THE EFFECTS OF LOW CONCENTRATIONS OF ZINC ON ETOPOSIDE INDUCED HL-60 CELLS APOPTOSIS

ffeStlln Mif Etudier leS effets du zinc d faible concntration (20 -- 4W/L, tw d lacoeatration Phwtque) sur I' ewbe des celluleS ffe60 induite per I' e~. bo Cytcrndtris au fias, extractthe et dlect-- de l' ADN, fortha mOWque por mimp d fiuons-ceme. Wlfots II eSt theontrd que le zinc d concentration faible peut infiuencer l' awrbe nd celIules.Si le zinc est ajoutd tris t6t, W une concentratthe de W/L, arrve d inhiler comPlebet en 4 heuresl'M des celluleS ffe60 induite per Who. Miis d c…     

锌缺乏对生长期大鼠外周血淋巴细胞表型及亚群分布的影响

目的 :　观察膳食锌缺乏对生长期大鼠外周血淋巴细胞表型及 Th1 /Th2 (Th,辅助 T细胞 )平衡的影响。方法 :　通过喂食锌含量不同的饲料 ,构建生长期缺锌大鼠模型 ;淋巴细胞表型检测采用双色免疫荧光流式细胞术分析。结果 :　与锌充足组 (ZA)和配饲组 (PF)相比 ,缺锌组(ZD)大鼠外周血淋巴细胞中 CD8+细胞 (细胞毒性 T细胞 )明显增多 ,而 CD4+细胞 (辅助 T细胞 )和 CD45 RA+细胞 (纯的 B淋巴细胞 )显著减少。而且锌缺乏选择性地使 Th1 (CD45 RC+CD4+)细胞减少 ,而 Th2 (CD45 RC- CD4+)细胞不减少。补锌后上述改变可得到恢复。结论 :　膳食锌缺乏导致淋巴细胞表型分布改变和 Th1 /Th2的平衡破坏 ,但这些改变是可逆性的     

CD45作门的三色流式细胞术在白血病免疫分型中的应用

目的 介绍一种直接裂解骨髓样本进行急慢性白血病分型的三色流式细胞术。方法 将这种方法应用于115例急性白血病和10例慢性白血病的免疫分型。利用CD45和侧向散射将白血病细胞从正常的淋巴细胞，单核细胞，粒细胞和有核红细胞中区分出来后，用双参数流式细胞术进行分析。结果 流式细胞术测定得到的幼稚细胞比例在很大程度上与形态学计数相关，不同的FAB亚型白血病在CD45/SS图中的形式也不完全相同，当PC5标记的CD45与异硫氰酸荧光黄和藻红蛋白标记的其他抗体联合应用时，可以在对白血病细胞作门的基础上，同时进行白血病细胞表型表达的双参数分析。结论 在白血病免疫分型时，这种作门技术明显优于传统的前向散射对侧向散射作门方法。     

CD45作门的三色流式细胞术在白血病免疫分型中的应用

目的介绍一种直接裂解骨髓样本进行急慢性白血病分型的三色流式细胞术.方法将这种方法应用于115例急性白血病和10例慢性白血病的免疫分型.利用CD45和侧向散射将白血病细胞从正常的淋巴细胞、单核细胞、粒细胞和有核红细胞中区分出来后,用双参数流式细胞术进行分析.结果流式细胞术测定得到的幼稚细胞比例在很大程度上与形态学计数相关.不同的FAB亚型白血病在CD45/SS图中的形式也不完全相同.当PC5标记的CD45与异硫氰酸荧光黄和藻红蛋白标记的其它抗体联合应用时,可以在对白血病细胞作门的基础上,同时进行白血病细胞表型表达的双参数分析.结论在白血病免疫分型时,这种作门技术明显优于传统的前向散射对侧向散射作门方法.     

柯萨奇病毒B3型VP1基因在酿酒酵母中的表达

目的在酿酒酵母AH109中表达柯萨奇病毒B3型VP1基因，并检测VP1蛋白对报告基因的转录自激活作用。方法用乙酸锂法将重组柯萨奇B3病毒VP1基因的细菌一酵母菌穿梭载体pGBKT7一VP1转化酵母菌。通过表型鉴定、PCR法验证质粒导入宿主菌后，Western blotting验证VP1蛋白的表达，最后经营养缺陷培养基和酶底物x—a-Gal反应检测VP1基因对报告基因的转录自激活作用。结果表型鉴定和PCR法均证实pGBKT7-VP1质粒转入酵母菌成功，Western blotting证实AH109能表达VP1蛋白，营养缺陷型培养基和酶底物X-a—Gal反应结果显示VP1蛋白对3种报告基因均无转录自激活作用。结论柯萨奇病毒B3型VP1蛋白可作为酵母双杂交系统的诱饵蛋白，为筛选与其相互作用的宿主细胞蛋白提供了基础。     

肿瘤患者外周血Th1/Th2的检测及意义

目的 检测恶性肿瘤患者机体的Th1/Th2细胞产生的相关细胞因子含量,讨论Th1/Th2的平衡与肿瘤发生发展的关系。方法 利用有丝分裂原ConA刺激人体外周血单个核细胞(PBMC)体外无菌培养适当时间,提取上清液后以ELISA测定IFN-γ和IL-4在培养液中的浓度,共研究了40例肿瘤患者和30例正常人。结果 恶性肿瘤患者的IFN-γ和IL-4分别是687.1±794.6 pg/ml和379.4±144.9 pg/ml,而正常对照组的IFN-γ及IL-4为1 665.8±1 041.6 pg/ml和294.9±73.1 pg/ml。肿瘤患者的IFN-γ明显降低(P<0.005),而IL-4却显著升高(P<0.05)。结论 肿瘤患者的Th1/Th2平衡被打破,使之向Th2漂移,检测肿瘤患者的IFN-γ和IL-4有助于恶性肿瘤病情发展的监测。     

甲氨蝶呤对单核细胞样细胞系U937的生长影响及其促凋亡作用

一般认为急性髓细胞白血病(AML)是对甲氨蝶呤(MTX)原发耐药的恶性肿瘤.AML细胞除急性单核细胞白血病(AML-M5)细胞与MTX孵育时,由于不能象急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞一样形成足够量的长链聚谷氨酸盐甲氨蝶呤(MTXPG),而被认为对MTX不敏感.为了开发对AML-M5新的治疗,本实验采用了具有单核细胞特征的U937细胞系进行研究.细胞分别通过不同浓度(1 nmol/L-100μmol/L)MTX孵育24小时或48小时后,通过XTT法评估细胞生长抑制情况.24小时的半数抑制浓度(IC50)为0.04μmol/L;48小时的IC50为0.037μmol/L,90%细胞抑制浓度(IC90)为0.39μml/L.为了解MTX细胞毒作用的发生机制,进一步分析了细胞的死亡过程.采用了系列实验,包括台盼蓝拒染法、流式细胞术、显微镜(瑞氏染色法)及DNA片段分析进行研究.结果在MTX作用后短时间内(4或6小时)无明显的细胞凋亡特征出现.随5 nmol/L-10μmol/L MTX作用8小时后,亚G1(凋亡)峰的比率从0.1μmol/L的3.2%增加到5.0μmol/L的18.2%,S期的比率从0.01 μmol/L的41.2%到10 μmol/L的19.1%.可见到DNA片段电泳后细胞凋亡的特征性改变.MTX所引发U937细胞的生长阻滞和凋亡特征,提示它可用于AMLM5治疗的潜在可能.     

柯萨奇-腺病毒受体基因的原核表达和多克隆抗体制备

目的利用原核基因工程克隆表达柯萨奇-腺病毒受体(CAR)胞外段,并制备多克隆抗体.方法从HeLa细胞中抽提总RNA,通过RT-PCR获得编码CAR胞外段的cDNA,与pQE31质粒连接,构建表达型重组质粒,测序证实后诱导表达,经NiNTA柱亲和纯化后,免疫新西兰兔,ELISA检测抗血清滴度.结果重组质粒转化的大肠杆菌M15经IPTG诱导表达及亲和纯化后得到滴度较高的融合蛋白,SDS-PAGE和Western blot显示其分子量约为26 kd,具有特异的抗原性,主要以包涵体形式存在于菌体中.纯化的融合蛋白免疫新西兰兔后产生的抗体,经ELISA检测抗体滴度＞l:32 000.结论CAR胞外段基因的克隆表达和多克隆抗体的制备,为进一步研究该受体在以腺病毒载体为基础的基因治疗中的作用及柯萨奇病毒的致病机制奠定了基础.     

哺乳动物的促分裂原活化蛋白激酶信号途径

促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)是一类表达于所有真核细胞的丝氨酸／苏氨酸激酶，能够被诸如细胞因子、生长因子、神经递质、激素、细胞应急以及细胞粘附等各种刺激因素激活。MAPK途径的基本组合包括MAPK、MAPK激酶(MKK)和MAPK激酶激酶(MKKK)三种保守的成分，由此建立一个连续的激活途径。哺乳动物的MAPK可以大致归纳为5类：ERK1／2(MAPK^erkl/2)、P38(MAPK^p38)、JNK(MAPK^jnk)、ERK3／4(MAPK^erk34)和ERK5(MAPK^erk5)。MAPK家族在各种细胞活动中具有重要作用，如增殖、分化、发育、转化及凋亡等。文章讨论了哺乳动物MAPK的功能和调节。     

CAR的表达调节对肝癌基因治疗中腺病毒载体感染效率的影响

目的: 通过抑制RafMEKERK信号转导途径调节肝癌细胞表面柯萨奇病毒和腺病毒受体(coxsackieadenovirus receptor,CAR)的表达,探索肝癌基因治疗中CAR表达与腺病毒(adenovirus, Ad)感染效率之间的关系。方法: 选择两株人肝癌细胞株SMMC－7721及HepG2，以RafMEKERK信号转导抑制剂U0126作用后,应用Western blotting检测细胞表面CAR蛋白的表达水平。选用能表达GFP的非复制型E1A缺陷的Ad感染人肝癌细胞SMMC－7721及HepG2,应用FACS分析U0126处理前后Ad感染效率的变化。结果: 细胞经MEK抑制剂U0126处理后，细胞膜表面CAR的表达呈明显上调趋势。FACS检测显示,经U0126处理后,在相同感染复数(10 MOI)AdGFP的感染下,GFP+细胞率明显升高, SMMC7721细胞由（71.65±6.21）％上升至（86.54±5.70）％；HepG2细胞由（77.53±4.62）％上升至（87.06±2.83）％ (均P<0.05)。结论: 抑制剂U0126抑制RafMEKERK信号转导途径后,可上调肝癌细胞膜表面CAR的表达,从而导致Ad在肝癌细胞感染效率的提高。