中性粒细胞弹性蛋白酶的过表达促进K562细胞增殖并抑制其凋亡

目的利用Ad Easy系统构建携带人中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)基因的重组腺病毒表达质粒,并感染K562细胞,观察其对K562细胞增殖和凋亡的影响。方法以急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株HL-60的RNA为模板,经反转录PCR得到NE基因的编码区并克隆入穿梭载体p Ad Track-CMV,得到p Ad-NE,经HindⅢ、EcoRⅤ酶切鉴定和测序正确后,将其转化入p Ad Easy-1-BJ5183进行同源重组,得到重组子Ad-NE,经PacⅠ酶切线性化后转染AD293细胞进行包装。14 d之后收获原代病毒,经5轮扩增后,测定病毒滴度,进行PCR鉴定。感染K562细胞后,荧光显微镜初步观察感染效率,同时用流式细胞术检测感染效率;Western blot法进一步鉴定NE是否表达上调;CCK-8法测定细胞增殖情况;流式细胞术测定细胞凋亡和细胞周期变化。结果酶切鉴定及测序结果表明重组穿梭质粒p Ad-NE构建成功;酶切鉴定显示同源重组成功,得到重组子Ad-NE;荧光显微镜表明病毒包装成功;经过5轮扩增后,病毒滴度达到1.64×1012pfu/m L;感染K562细胞后,荧光显微镜观察感染效率达80%左右;Western blot法检测到NE表达上调;CCK-8实验显示NE表达上调后K562细胞增殖能力增强;流式细胞术显示S期细胞明显增多并且细胞凋亡减少。结论过表达NE可促进K562细胞增殖并抑制其凋亡。     

ECEL1基因PSCSI-GFP慢病毒载体的构建

目的设计并构建针对ECEL1基因的RNA干扰慢病毒载体。方法依照ECEL1基因为模板,设计RNA干扰靶点,根据选定的靶点序列,设计短发夹RNA(shRNA)干扰序列,在两端添加相应的限制性内切酶酶切位点,合成单链DNA oligo,退火缓冲液中配对形成双链DNA oligo。利用Age I和EcoR I双酶线性化GV115载体。把载体和DNA oligo相连接,其连接产物转化大肠杆菌感受态细胞,经PCR扩增并测序鉴定。再通过质粒抽提,转染,浓缩与纯化后获得重组的ECEL1基因RNAi慢病毒,用"HIV-1p24抗原ELISA法"测定样品滴度。选取检测合格的慢病毒感染人肝癌细胞(BEL-7404),并设置对照组,荧光观察感染率。并使用Real-time PCR法及Western blot检测人肝癌细胞(BEL-7404)中ECEL1基因敲减后mRNA和蛋白质的表达量。2组间比较采用两独立样本t检验。结果 (1)根据ECEL1基因模板设计后,选定psc48784片段作为RNA干扰靶点,制备双链DNA oligo,PCR鉴定阳性重组子并测序,验证psc48784为正确的克隆。经过质粒抽提,转染以及浓缩纯化后,成功构建ECEL1基因RNAi慢病毒。物理检测与无菌检测合格。(2)通过HIV-1 p24抗原ELISA法测定ECEL1基因RNAi慢病毒样品病毒滴,测定样品病毒滴度为3×108TU/ml;表明已成功构建高滴度且合格的ECEL1基因RNA干扰慢病毒。(3)用ECEL1基因RNAi慢病毒感染人肝癌细胞(BEL-7404),荧光观察结果显示细胞感染效率达到80%,细胞状态稳定;使用Real-time PCR的方法及Western blot检测实验组人肝癌细胞(BEL-7404)中ECEL1基因在mRNA和蛋白质水平的表达量受到抑制(P值均0. 05),敲减效率达到70. 5%。结论成功构建ECEL1基因PSCSI-GFP慢病毒载体并获得稳定高滴度的病毒样品,并获得稳定的ECEL1基因敲减的人肝癌细胞(BEL-7404)。     

神经电生理检查技术在糖尿病周围神经病变患者中的临床诊断价值分析

正糖尿病(DM)属于常见慢性代谢性疾病,会累及全身各器官或系统,好发于中老年人群,主要特征为持续性高血糖,其中糖尿病周围神经病变(DPN)是DM患者的常见慢性并发症之一,病变早期临床症状并不显著,主观感觉症状也并不强烈,因而DPN患者容易错过最佳诊治时机[1]。神经电生理技术是通过神经系统活动时的电变化指标分析神经系统活动规律及神经活动传导途径,主要有定量温     

一种感染性非人灵长类实验装置的生物安全研究

目的 拟设计一种在无操作时能完全隔离感染动物,又能在日常照料动物时形成定向气流的实验装置,保证非人灵长类动物正常生物学特性表达的同时还能有效防止气溶胶感染。方法 使用具有氯霉素抗性的大肠杆菌(Cl+, E.coli, Rosetta菌株)作为指示微生物,观察处于本实验装置中非人灵长类在实验中的生物学特性,并采用气溶胶采集装置及沉降菌采集的方法对本实验装置内外的指示微生物进行监测。结果 在内笼指示菌富集时,本实验安全装置的外笼无论在开启还是关闭状态下,房间内、笼外及外笼均未检测到指示菌及气溶胶。结论 本实验装置能保证非人灵长类正常生物学特性的表达,并可有效防止气溶胶感染。     

哑型心脏瓣膜损害9例临床分析

哑型心脏瓣膜损害９例临床分析安徽省阜阳地区人民医院阳海红安徽省蚌埠市第三人民医院高翔近年来我们收治哑型心脏瓣膜损害９例，其中二尖瓣狭窄（二狭）６例，主动脉瓣关闭不全（主闭）２例，二尖瓣关闭不全（二闭）１例，现报道如下。临床资料二狭６例均为风湿性心脏病...     

以脂肪酸合成酶FabH为靶标的化合物体外抗结核作用的初步研究

目的研究结核分枝杆菌脂肪酸合成酶FabH为靶标的化合物的体外抗结核活性，研制新的高效、安全的抗结核药物。方法以平板滤纸法测定化合物对草分枝杆菌的抑菌圈，以试管抑菌法检测化合物对结核分枝杆菌药物敏感株和耐多药分离株的抑制作用。结果18种化合物在500μmol／L浓度时对草分枝杆菌的抑菌圈为1．8～2．4cm，其中7种化合物在250μmol／L和125μmol／L浓度时对草分枝杆菌的抑菌圈为1．5～2．2cm。结核分枝杆菌H37Rv标准株在分别含3mmol／L的18种化合物的培养基上培养2周时，绝大多数含化合物培养基上未见细菌生长；培养4周时，No．115、No．131、No．128、No．129、No．137化合物的抑菌作用较明显。结核分枝杆菌耐多药分离株HB240在分别含3mmol／L的11种化合物的培养基上培养2周和4周时，No．115化合物均显示明显的抑菌作用。结论以脂肪酸合成酶FabH为靶标的大多数化合物在体外都具有不同程度的抗结核活性，尤其是No．115化合物对草分枝杆菌、结核分枝杆菌敏感株和耐药株都具有明显的抑制作用。     

睡眠调节机制及睡眠障碍分类

1睡眠调节机制最近关于人类睡眠和觉醒周期调节的认识提示睡眠和觉醒状态是由内源性昼夜节律和睡眠内稳态过程的复杂相互作用所产生的[1]。同时自主神经系统的改变也起到一定的作用[2]。这些机制与可能的病理条件或外源性刺激(社交活动和环境因素)一起影响睡眠[3-4]。1.1昼夜节     

两种检测方法对牛环形泰勒虫病感染的调查

为进一步了解新疆托克逊县某地各年龄段牛环形泰勒虫病的感染情况,本实验应用血液涂片法和PCR检测法分别对随机采集的104头份牛全血进行了对比检测,并分析了4个年龄段牛环形泰勒虫病的感染情况。结果表明,104头份牛全血涂片染色镜检的阳性率为51.0%(53/104),PCR方法检测阳性率为57.7%(60/104),PCR的检测阳性率高于全血涂片染色结果;该地四个年龄段牛,1~2岁龄牛环形泰勒虫病的感染率高于其它三个年龄段,感染率为72.7%(8/11)。     

非优势A1侧翼点入路夹闭破裂前交通动脉瘤的临床研究

目的比较非优势A1侧翼点开颅与优势A1侧翼点开颅夹闭破裂前交通动脉瘤的效果,并探讨其相关适应证。 方法回顾性分析江西省人民医院神经外科自2013年9月至2019年9月存在优势A1现象的58例破裂前交通动脉瘤患者的临床资料。其中32例采用非优势A1侧翼点开颅,为非优势A1侧组;26例采用优势A1侧翼点开颅,为优势A1侧组;比较2组患者的显微镜下操作时间,夹闭方式（简单夹闭、复杂夹闭）,术后3个月及1年的动脉瘤残留或复发情况,术后1年GOS评分等指标。 结果非优势A1侧组简单夹闭25例,复杂夹闭7例;优势A1侧组简单夹闭12例,复杂夹闭14例,2组比较差异有统计学意义（χ²=5.148,P=0.022）。非优势A1侧组的显微镜下操作时间为（1.57±0.32）h,术后3个月动脉瘤残留或复发有2例（6.25%）、3例（9.38%）,术后1年预后良好率为90.63%;优势A1侧组的显微镜下操作时间为（1.63±0.37）h,术后3个月动脉瘤残留或复发有2例（7.69%）、2例（7.69%）,术后1年预后良好率为92.31%;2组比较差异均无统计学意义（P>0.05）。 结论采用非优势A1侧翼点开颅夹闭前交通动脉瘤能够易化动脉瘤颈显露过程并简化夹闭方式,但需严格把握手术指征。