探索性实验教学的体会与思考

近年来,我院在七年制学生中开展了探索性实验教学,教学过程中学生在实验设计、实验实施、数据分析和论文书写方面还存在不少问题。改进机能学和探索性实验的教学方法,建立合理的考核评价体系,将有助于提高探索性实验课程的教学质量。     

检测铜绿假单胞菌金属β-内酰胺酶方法比较

目的：探讨检测金属β-内酰胺酶的可靠方法。方法：收集临床分离耐亚胺培南的铜绿假单胞菌8株及产IMP-1金属争内酰胺酶标准株一株,分别采用纸片增效法和双纸片协同实验检测金属酶表型,比较其结果。结果和结论：纸片增效法容易出现假阳性结果,而纸片协同法是相对可靠的检测金属酶的方法。     

多重耐药肺炎克雷伯菌基因型和整合子的分析

目的 了解多重耐药肺炎克雷伯菌的基因型和整合子存在情况.方法 设计TEM、SHV和CTX-M型及Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合酶基凶特异性引物,并将聚合酶链反应(PCR)扩增获得β-内酰胺酶编码基因,分别克隆入pMD18-T载体后测定其核苷酸序列,分析其基因亚型.结果 该多重耐药株与TEM-1、SHV-12及CTX-M-3型编码基因序列的同源性为100%,Ⅰ类整合酶基因检测阳性,Ⅱ、Ⅲ类整合酶基因检测阴性.结论 Ⅰ类整合子存在产ESBLs肺炎克雷伯菌中.     

国产阿洛西林人体药动学,生物利用度研究

８名健康男性志愿者单剂静注和肌注１ｇ国产阿洛西林后的药物动力学、生物利用度的研究及阿洛西林对β－内酰胺酶的稳定性的测定结果显示：静注和肌注后药物在体内的转运过程符合二室开放模型。静注后即刻血药浓度为２１９．８４μｇ／ｍｌ。肌注后５ｍｉｎ血药浓度为１０．７９μｇ／ｍｌ，约３０ｍｉｎ达峰，峰浓度为４３．２４μｇ／ｍｌ。静注和肌注后分布相半衰期分别为０．１７和０．２９ｈ，消除相半衰期为１．６０和１．８４ｈ，药—时曲线下面积为１１５．９７和７１．８８μｇｈ／ｍｌ，生物利用度为６１．９８％。２４ｈ尿排泄率为７０．３１％和６８．５６％。本品对质粒和染色体介导的β－内酰胺酶均不稳定。     

β-内酰胺酶动力学研究进展

1 β-内酰胺酶底物动力学 class A β-内酰胺酶底物动力学性质上显示出多样性。A型β-内酰胺酶底物动力学参数的变化在头孢菌素中表现得尤为突出,K_(cat)/K_m值对不同的头孢菌素底物变化范围达2～3个数量级,耐对青霉素类底物则变化不大。大多数青霉素(包括苯唑西林和氯唑西林)都是A型β-内酰胺酶的良好底物,侧链上含氨基的氨苄西林和含羧基的羧苄西林都能象苄青霉素一样被A型β-内酰胺酶高效水解,尽管前者的K_(cat)值稍低,但K_(cat)/K_m值却相差无几,说明侧链取代对动力学性质无太大影响。而侧链上具有空间障碍基因的物质(如苯唑西林,甲氧西林)也是A型β-内酰胺酶的良好底物。但底物整个酰基侧链对反应动力学就有不同的影响结果,对青霉素而言,酰基     

金属β-内酰胺酶分子生物学及酶学研究进展

金属β-内酰胺酶能水解碳青霉烯类抗生素，而获得性金属酶可以通过整合子上的移动性基因元件使耐药基因在细菌之间传播，使临床抗感染治疗面临更严峻的考验。通过对获得性金属酶分子及酶动力学特征进行阐述，更好地了解酶结构与功能的关系，为进一步研究耐药机制提供依据。     

HPLC法测定血中茶碱浓度

本文建立了一种流动相为甲醇－乙腈－０．０１ｍｏｌ／Ｌ乙酸（７．５：７．６：８５）的ＨＰＬＣ法测定血清茶碱浓度。ＯＤＳＣ－１８反相色谱柱，柱温３０℃．流动相流途１．５ｍｌ／ｍｉｎ，ＵＶ／ｖｉｓ检测器，检测被长２７８ｎｍ，用外标沽定量。血浴样品用氯仿／异丙醇（９６：６）提取，水浴蒸干，甲醇６０μｌ重溶。茶碱保留时间约４．８０ｍｉｎ；标准曲线回归方程Ｙ＝０．６０８３＋０．３８６６ｘ，ｒ＝０．９９８１：茶碱浓度１０．０．２０．０．４０．０μｇ／ｍｌ时回收率分别为９４．７１±３．３５．１０８．４２±５．２２和９０．４８±４．３２：最低检测限０．３１２５μｇ／ｍｌ；日内变异系数３．１４％，日间变异系数４．７３％，结果显示，木法分离效果好。而且快速、简便。     

产金属β-内酰胺酶嗜麦芽寡养单胞菌的研究

目的 探讨嗜麦芽寡养单胞菌所产金属β-内酰胺酶的酶学特性及分子生物学特征。方法 采用纸片协同法筛选产金属β-内酰胺酶菌株；测定产酶株所产β-内酰胺酶对亚胺培南的稳定性和丝氨酸β-内酰胺酶、金属β-内酰胺酶抑制剂的抑酶保护效应；检测金属β-内酰胺酶的等电点；用PCR法检测金属β-内酰胺酶全基因，并测序。结果 纸片协同法筛选产金属β-内酰胺酶菌株4株，药敏试验显示对多种抗菌药物耐药。酶稳定性试验显示，4株产酶菌产碳青霉烯水解酶。酶抑制试验表明，克拉维酸对这4株菌所产酶无抑酶保护效应，而金属β-内酰胺酶抑制剂EDTA对4株菌所产酶有抑制作用，且酶活性能被ZnCl2复活。等电聚焦显示，2株菌(710、750)产的碳青霉烯水解酶pI为6．6，l株菌(603)的pI为6．2，EDTA抑制试验证实均为金属β-内酰胺酶。PCR结果显示，以4株细菌基因组DNA为模板，用所设计的金属β-内酰胺酶全基因引物进行PCR扩增，2株(750，7lO)扩增结果为阳性，进行序列分析，均为867bp。经GeneBank网上同源性比较．发现与金属酶Ll的编码基因blaS(注册号AJ291672．1)的核苷酸序列同源性均为99％。结论 嗜麦芽寡养单胞菌710和750号产Ll型金属β-内酰胺酶；603号可能产非Ll型金属β-内酰胺酶。     

肺炎克雷伯菌产ESBLs基因型分析

目的 分析我院临床分离的肺炎克雷伯菌产ESBLS基因型，为指导临床合理用药提供依据。方法 用琼脂稀释法检测10种抗菌药物对已确定为产ESBLS肺炎克雷伯菌的MIC，分别用TEM、SHV、CTX-M、OXA通用引物进行PCR扩增、产物克隆测序分析。结果 83株产ESBLS肺炎克雷伯菌中，产TEM型75株，SHV型41株，CTX-M型25株，OXA型9株。其中，同时产3种酶有13株，占15．7％；同时产2种酶有59株，占71．1％；仅11株产单1种酶，占13．2％。而9株同时产TEM、SHV和CTX-M型，测序结果为CTX-M-3，TEM-1及多种SHV型（SHV-12、SHV-28）。药敏结果表明，同时产2或3种酶的菌株比产单1种酶的菌株耐药性更严重。结论 所分离产ESBLS肺炎克雷伯菌主要为TEM、SHV、CTX-M、OXA型，且同时存在产2～3种酶，应引起临床高度重视。     

国产氧氟沙星治愈细菌性肝脓肿一例

国产氧氟沙星治愈细菌性肝脓肿一例邹启园，钱元恕，王其南，朱治本，何海霞女，２３岁，农民，因畏寒、发热４０天，黄疸半月，于１９９１年１２月２８日入院。４０天前起畏寒、寒战，发热及多汗，并感上腹隐痛。入院前１０天，曾在外院胸透称有胸膜炎，并进行抗痨治疗，...