临床分离革兰阴性菌整合子研究

目的 了解临床分离革兰阴性菌整合子的产生情况及整合子在细菌耐药中的作用.方法 E实验测定细菌对11种抗生奈及抗生素复合制剂的最低抑菌浓度,PCR扩增三种整合酶基因及Ⅰ型整合子的可变区,并对可变区的扩增产物进行克隆、测序.结果 16株革兰阴性菌中,6株含Ⅰ型整合子,所含基因盒主要是妒dfr/dhf及aadA基因盒.结论 整合子在不同革兰阴性菌中广泛存在,与细菌的多重耐药尤其是对氨基糖苷类抗生素的耐药密切相关.     

β-内酰胺酶动力学研究进展

1 β-内酰胺酶底物动力学 class A β-内酰胺酶底物动力学性质上显示出多样性。A型β-内酰胺酶底物动力学参数的变化在头孢菌素中表现得尤为突出,K_(cat)/K_m值对不同的头孢菌素底物变化范围达2～3个数量级,耐对青霉素类底物则变化不大。大多数青霉素(包括苯唑西林和氯唑西林)都是A型β-内酰胺酶的良好底物,侧链上含氨基的氨苄西林和含羧基的羧苄西林都能象苄青霉素一样被A型β-内酰胺酶高效水解,尽管前者的K_(cat)值稍低,但K_(cat)/K_m值却相差无几,说明侧链取代对动力学性质无太大影响。而侧链上具有空间障碍基因的物质(如苯唑西林,甲氧西林)也是A型β-内酰胺酶的良好底物。但底物整个酰基侧链对反应动力学就有不同的影响结果,对青霉素而言,酰基     

金属β-内酰胺酶分子生物学及酶学研究进展

金属β-内酰胺酶能水解碳青霉烯类抗生素，而获得性金属酶可以通过整合子上的移动性基因元件使耐药基因在细菌之间传播，使临床抗感染治疗面临更严峻的考验。通过对获得性金属酶分子及酶动力学特征进行阐述，更好地了解酶结构与功能的关系，为进一步研究耐药机制提供依据。     

HPLC法测定血中茶碱浓度

本文建立了一种流动相为甲醇－乙腈－０．０１ｍｏｌ／Ｌ乙酸（７．５：７．６：８５）的ＨＰＬＣ法测定血清茶碱浓度。ＯＤＳＣ－１８反相色谱柱，柱温３０℃．流动相流途１．５ｍｌ／ｍｉｎ，ＵＶ／ｖｉｓ检测器，检测被长２７８ｎｍ，用外标沽定量。血浴样品用氯仿／异丙醇（９６：６）提取，水浴蒸干，甲醇６０μｌ重溶。茶碱保留时间约４．８０ｍｉｎ；标准曲线回归方程Ｙ＝０．６０８３＋０．３８６６ｘ，ｒ＝０．９９８１：茶碱浓度１０．０．２０．０．４０．０μｇ／ｍｌ时回收率分别为９４．７１±３．３５．１０８．４２±５．２２和９０．４８±４．３２：最低检测限０．３１２５μｇ／ｍｌ；日内变异系数３．１４％，日间变异系数４．７３％，结果显示，木法分离效果好。而且快速、简便。     

产金属β-内酰胺酶嗜麦芽寡养单胞菌的研究

目的 探讨嗜麦芽寡养单胞菌所产金属β-内酰胺酶的酶学特性及分子生物学特征。方法 采用纸片协同法筛选产金属β-内酰胺酶菌株；测定产酶株所产β-内酰胺酶对亚胺培南的稳定性和丝氨酸β-内酰胺酶、金属β-内酰胺酶抑制剂的抑酶保护效应；检测金属β-内酰胺酶的等电点；用PCR法检测金属β-内酰胺酶全基因，并测序。结果 纸片协同法筛选产金属β-内酰胺酶菌株4株，药敏试验显示对多种抗菌药物耐药。酶稳定性试验显示，4株产酶菌产碳青霉烯水解酶。酶抑制试验表明，克拉维酸对这4株菌所产酶无抑酶保护效应，而金属β-内酰胺酶抑制剂EDTA对4株菌所产酶有抑制作用，且酶活性能被ZnCl2复活。等电聚焦显示，2株菌(710、750)产的碳青霉烯水解酶pI为6．6，l株菌(603)的pI为6．2，EDTA抑制试验证实均为金属β-内酰胺酶。PCR结果显示，以4株细菌基因组DNA为模板，用所设计的金属β-内酰胺酶全基因引物进行PCR扩增，2株(750，7lO)扩增结果为阳性，进行序列分析，均为867bp。经GeneBank网上同源性比较．发现与金属酶Ll的编码基因blaS(注册号AJ291672．1)的核苷酸序列同源性均为99％。结论 嗜麦芽寡养单胞菌710和750号产Ll型金属β-内酰胺酶；603号可能产非Ll型金属β-内酰胺酶。     

大鼠卵巢组织中早期卵泡发育及卵母细胞凋亡与白藜芦醇的影响

目的:观察白藜芦醇对大鼠卵巢组织中早期卵泡发育及凋亡的影响。方法:实验于2006-07/12在汕头大学医学院细胞衰老实验室完成。成年SD大鼠合笼,所生的新生雌鼠分为3组:①对照组:正常出生者,不干预。②腹腔注射组:正常出生后12h内开始腹腔注射白藜芦醇25mg/(kg·d),1次/d。③母鼠灌胃组:正常怀孕的母鼠在孕12d(以发现阴道栓为怀孕0.5d)开始进行白藜芦醇25mg/(kg·d)灌胃,1次/d,直至分娩后生下的雌鼠。各组大鼠分别在出生2,4d处死取卵巢,应用苏木精-伊红染色观察大鼠早期卵泡发育情况(计算卵母细胞巢中卵母细胞及原始卵泡和发育卵泡的比率),应用TUNEL染色观察卵母细胞凋亡的情况。结果:①腹腔注射组和母鼠灌胃组大鼠卵母细胞巢内卵母细胞比例高于对照组[2d龄:(39.78±9.22)%,(53.20±5.08)%,(15.76±6.68)%;4d龄:(9.39±1.82)%,(5.39±2.12)%,(2.62±1.18)%;P均<0.05];2d龄母鼠灌胃组和腹腔注射组大鼠原始卵泡和发育卵泡比例低于对照组[原始卵泡:(57.64±7.23)%,(46.40±5.20)%,(74.57±9.36)%;发育卵泡:(2.58±2.41)%,(4.51±4.60)%,(9.67±4.70)%;P均<0.05]。②生后第2天是大鼠卵母细胞凋亡的高峰期,母鼠灌胃组和腹腔注射组卵泡凋亡率高于对照组,但差异不显著[(9.88±3.30)%,(12.95±3.34)%,(8.50±4.13)%,P>0.05]。结论:白藜芦醇可以延缓大鼠卵巢组织中卵母细胞巢破裂,抑制原始卵泡的发育启动;但是对于卵母细胞的凋亡没有明显影响。     

国产氧氟沙星治愈细菌性肝脓肿一例

国产氧氟沙星治愈细菌性肝脓肿一例邹启园，钱元恕，王其南，朱治本，何海霞女，２３岁，农民，因畏寒、发热４０天，黄疸半月，于１９９１年１２月２８日入院。４０天前起畏寒、寒战，发热及多汗，并感上腹隐痛。入院前１０天，曾在外院胸透称有胸膜炎，并进行抗痨治疗，...     

肺炎克雷伯菌产ESBLs基因型分析

目的 分析我院临床分离的肺炎克雷伯菌产ESBLS基因型，为指导临床合理用药提供依据。方法 用琼脂稀释法检测10种抗菌药物对已确定为产ESBLS肺炎克雷伯菌的MIC，分别用TEM、SHV、CTX-M、OXA通用引物进行PCR扩增、产物克隆测序分析。结果 83株产ESBLS肺炎克雷伯菌中，产TEM型75株，SHV型41株，CTX-M型25株，OXA型9株。其中，同时产3种酶有13株，占15．7％；同时产2种酶有59株，占71．1％；仅11株产单1种酶，占13．2％。而9株同时产TEM、SHV和CTX-M型，测序结果为CTX-M-3，TEM-1及多种SHV型（SHV-12、SHV-28）。药敏结果表明，同时产2或3种酶的菌株比产单1种酶的菌株耐药性更严重。结论 所分离产ESBLS肺炎克雷伯菌主要为TEM、SHV、CTX-M、OXA型，且同时存在产2～3种酶，应引起临床高度重视。     

屎肠球菌抗生素耐药性分析

目的：检测国内部分地区临床分离的39株屎肠球菌对8种抗生素的耐药性，以及屎肠球菌产β-内酰胺酶的情况。方法：采用纸片琼脂扩散法检测其对青霉索、环丙沙星、红霉素、万古霉素、米诺环索、氯霉素、呋喃妥因及高浓度庆大霉素的耐药情况；用nitrocefin检测屎肠球菌产β-内酰胺酶情况。结果：39株屎肠球菌对各种抗生素的耐药率分别为红霉素94．87％、高浓度庆大霉素84．62％、青霉素79．48％、环丙沙星76．92％、米诺环素38．46％、氯霉素17．95％，未发现耐万古霉素及呋喃妥因的菌株。39株屎肠球菌β-内酰胺酶阳性率为0。结论：临床分离的屎肠球菌多重耐药性严重，尤其是汕头地区分离的细菌。     

SHV型β内酰胺酶抑酶效应的研究

目的 :采用分光光度法研究革兰阴性菌产生的 4种SHV型 β内酰胺酶的抑酶效应。方法 :分别以L B作图法求取米氏常数 (Km)和最大反应速度 (Vmax) ,以Dixon作图法求取抑制常数 (Ki)。结果 :SHV 2 ,4 ,5对头孢噻肟有水解作用 ,Km 分别为5,4 ,8μmol·L- 1,相对最大水解速度分别为 4 .9% ,8.4 % ,7.8%。表明头孢噻肟对SHV 2 ,SHV 4 ,SHV 5有较高的亲和力 (低Km) ,它对SHV 2 ,SHV 4 ,SHV 5有抑制作用 ,Ki 分别为 0 .94 ,1.0 9,1.4 7μmol·L- 1。结论 :β内酰胺酶抑制剂舒巴坦对SHV 1,2 ,4 ,5均有抑制作用 ,Ki 分别为 1.68,0 .2 ,2 .33,0 .15μmol·L- 1。