抑癌基因PTEN shRNA腺病毒载体的构建

目的:构建抑癌基因PTEN shRNA腺病毒载体, 探讨PTEN在哮喘患者气道重塑的作用机制.方法:设计形成短发夹序列 (shRNA) 的PTEN-shRNA引物对应的模板DNA序列, 亚克隆至 p Shuttle-GFP-U6重组穿梭载体, 构建穿梭质粒 p Shuttle-GFP-U6-PTEN-shRNA.鉴定正确后, 然后与腺病毒质粒 p Adxsi在化学感受态细胞DH5α菌株内同源重组, 得到 p Adxsi-GFP-U6-PTEN-shRNA病毒质粒, 将 p Adxsi-GFP-U6-PTEN-shRNA质粒经 Pac I线性化后转染HEK293细胞, 包装重组、并大量扩增 p Adxsi-GFP-U6-PTEN-shRNA腺病毒质粒, 氯化铯梯度离心纯化, 测病毒滴度, Western blot检测PTEN蛋白水平的表达.结果:结果证实 p Shuttle-GFP-U6-PTEN-shRNA及 p Adxsi-GFP-U6-PTEN-shRNA质粒构建正确, 收获病毒后的PCR 及Western blot检测结果均证明 p Adxsi-GFP-U6-PTEN-shRNA包被成功.结论:抑癌基因PTEN shRNA腺病毒载体成功构建, 为进一步研究PTEN基因应用于哮喘治疗提供了相关的实验基础.     

妥洛特罗贴剂治疗C、D级COPD稳定期患者的疗效与不良反应

目的探讨妥洛特罗贴剂治疗C、D级COPD稳定期的有效性和安全性。方法选取2013年6月至2014年1月85例C、D级COPD稳定期患者随机分为研究组和对照组,两组均给予吸入激素、口服茶碱缓释片、痰液溶解药等综合治疗,研究组加用妥洛特罗贴剂,每日1贴(2 mg/贴)。治疗6个月。观察用药前后肺功能、临床症状评分的变化及吸入短效β2-受体激动剂的使用情况。结果两组患者治疗前肺功能指标、临床症状评分及吸入短效β2-受体激动剂的使用情况比较差异均无统计学意义(P0.05),治疗后两组肺功能指标、临床症状评分、吸入短效β2-受体激动剂的使用情况比较差异有统计学意义(P0.05)。研究组局部皮肤不良反应发生率仅2.2%,且程度轻。结论妥洛特罗贴剂能改善C、D级COPD稳定期患者的临床症状和肺功能。     

IL-22在支气管哮喘患者血清中的表达及其受体IL-22R1在人气道细胞中的表达

\[摘要\]目的检测IL-22在支气管哮喘患者血清中的表达,检测IL-22R1在人气道上皮细胞、气道平滑肌细胞、肺成纤维细胞中的表达,寻找IL-22作用的靶细胞。方法应用ELISA法检测36例支气管哮喘患者及20例正常对照者血清IL-22及IL-17的表达,同时检测36例患者肺通气功能,根据1秒率(FEV1/FVC)及FEV1占预计值的百分比将支气管哮喘患者分为支气管激发试验阳性组(17例)和支气管舒张试验阳性组(19例)。应用实时定量PCR检测人气道平滑肌细胞、人肺成纤维细胞、人气道上皮细胞IL-22R1 mRNA的表达,用免疫荧光以及蛋白质印迹法检测IL-22R1蛋白在上述3种细胞中的表达。结果支气管哮喘患者血清IL-22及IL-17水平与正常对照组相比差异无统计学意义,但支气管舒张试验阳性组患者血清IL-22和IL-17水平高于支气管激发试验阳性组(P<0.05)。IL-22R1 mRNA及蛋白在上述3种细胞均有表达。结论IL-22可能涉及支气管哮喘的发生发展过程,气道平滑肌细胞、肺成纤维细胞、人气道上皮细胞可能均是IL-22发挥作用的靶细胞。