基于四环素调控系统的HD1BEL-7402 Tet-on细胞模型的建立

目的:建立表达四环素调控系统（Tet-on）的人肝癌细胞模型（HD1 BEL-7402 Tet-on），为研究四环素调控系统对基因的表达与调控提供一种细胞模型。方法:用四环素调控表达系统（Tet-on），通过脂质体法转染BEL-7402细胞，经G418筛选出高表达Tet-on的细胞株，PCR检测Tet-on基因整合，TRE-luc质粒瞬时转染含有Tet-on的细胞克隆，Dox 诱导表达后,检测荧光素酶活性，筛选高诱导表达的抗性克隆，定名为HD1BEL-7402 Tet-on细胞。结果:建立了高效诱导表达的HD1 BEL-7402 Tet-on细胞模型。结论:建立的细胞模型为以后转染TER-x质粒（如GFP），研究任何感兴趣的目的基因的调控打下了基础。     

CEA启动子驱动cd—tk表达对CEA阳性肿瘤细胞的杀伤作用

目的：大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ，ｃｙｔｏｓｉｎｅｄｅａｍｉｎａｓｅ）和Ⅰ型单纯疱疹病毒胸苷激酶（ＴＫ，ｔｈｙｍｉｄｉｎｅｋｉｎａｓｅ）融合基因ｃｄｔｋ，在癌胚抗原（ＣＥＡ，ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃａｎｔｉｇｅｎ）阳性肿瘤细胞表达，联合使用前体药５氟胞嘧啶（５ｆｌｕｏｒｏｃｙｔｏｓｉｎｅ，５ＦＣ）和丙氧鸟苷（ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ，ＧＣＶ）可明显增强对肿瘤细胞的杀伤作用。方法：ＰＣＲ法分别扩增出ＣＥＡ启动子、ｃｄ和ｔｋ；构建真核表达载体ｐＣＥＡｃｄｔｋ；用脂质体将它导入ＣＥＡ阳性肿瘤细胞株ＨＴ２９、ＬｏＶｏ、ＳＧＣ７９０１、ＧＬＣ８２及ＣＥＡ阴性细胞株ＢＥＬ７４０２中；ＭＴＴ法检测５ＦＣ、ＧＣＶ对这类细胞的毒性作用及对放疗射线的增敏效果。结果：融合基因ｃｄｔｋ只在ＣＥＡ阳性细胞中表达，且表达该基因的肿瘤细胞对５ＦＣ和ＧＣＶ都很敏感。联合使用ＧＣＶ和５ＦＣ时，对这些肿瘤细胞的毒性明显增加，该体系也可明显增强放疗射线对细胞的杀伤作用。结论：与单独使用ＣＤ／５ＦＣ，ＴＫ／ＧＣＶ相比，ＣＤＴＫ／５ＦＣ＋ＧＣＶ体系对肿瘤细胞的杀伤作用明显增强，该体系对放疗射线有较强的增敏作用。     

不同条件下培养小鼠胚胎干细胞

胚胎干细胞 (ｅｍｂｒｙｏｎｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌ,ＥＳ细胞 )是从早期胚胎中分离出来的全能细胞系[1,2 ] 。当将这种细胞注入受体胚胎时 ,能参加各种组织器官的发育 ,形成嵌合体而后杂交至纯合体。通过ＥＳ细胞进行基因打靶[3 ] ,将外源基因定点整合产生基因剔除或基因修复从而制备转基因动物模型 ,故ＥＳ细胞可以用于研究基因的结构、功能及调控、医学疾病模型建立以及生殖细胞基因治疗等研究。利用ＥＳ细胞可以研究哺乳动物的分化和发育等基本问题 ,还可以通过研究ＥＳ细胞在体外定向诱导为特殊组织类型细胞为将来临床提供器官组织的原材…     

小鼠胚胎干细胞在六种培养体系的培养观察

目的　观察小鼠胚胎干细胞在六种培养体系中的生长情况。方法　小鼠胚胎干细胞 (ESD3细胞株 )在以下六种培养体系中培养 :1 .原代小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF)有血清培养 ,2 .MEF无血清培养 ,3.SNL细胞有血清培养 ,4.LIF(白血病抑制因子 )有血清无饲养层培养 ,5.LIF无血清无饲养层培养 ,6.大鼠肝细胞 (BRL)条件培养基培养。经体外培养 1 0代后 ,观察其克隆形态 ,同时进行碱性磷酸酶检测并将ES细胞接种于裸小鼠皮下 ,观察ESD3的未分化状态和多潜能性。结果　六种培养体系培养的ESD3具有典型的ES细胞克隆形态 :巢状 (集落状 )隆起生长 ,边缘清楚 ,表面平滑 ,结构致密 ;AKP强阳性 ;裸小鼠体内形成了由多种组织构成的畸胎瘤。结论　六种培养体系均能支持ESD3生长 ,并能保持其未分化性和多潜能性 ,为ES细胞的应用研究奠定了良好的基础。     

Leptin对大鼠肝细胞葡萄糖氧化影响的剂量效应与时间效应

目的:观察Leptin对大鼠肝细胞葡萄糖氧化的影响,及其剂量与时间效应。方法:培养肝细胞以不同剂量Leptin处理,以及以同一剂量Leptin处理不同时间,以液体闪烁计数法检测肝细胞氧化D[U14C]葡萄糖的量。结果:细胞培养1h,当Leptin为10μg·L-1时,肝细胞葡萄糖氧化与未予Leptin处理的对照组之间无明显差异,当Leptin为50μg·L-1,葡萄糖氧化较对照组下降(P<005),在50～200μg·L-1范围随剂量的上升而逐渐下降。以Leptin100μg·L-1延长作用时间至3h、12h、24h、48h,葡萄糖氧化反而较1h时显著上升(P<001),恢复至对照组水平。结论:低剂量Leptin对肝细胞葡萄糖氧化无显著影响,高剂量Leptin对肝细胞葡萄糖氧化具剂量依赖性急性抑制作用,慢性作用时,其抑制作用消失。     

人鼻咽癌细胞株CNE—1放射生物学参数的测定

目的：测定人鼻咽癌细胞株CNE－1的各项放射生物学参数D0，Dq,n, α/β,SF2。方法：应用集落形成法检测人鼻咽癌细胞株CNE－1在不同放射剂量照射下的细胞存活率，通过单击多靶模型和线性二次模型拟合绘制细胞存活曲线，求出D0、D1，n,α/β比值，以及SF2等放射生物学参数。结果：（1）由单击多靶模型求出D0＝0．84Gy,Dq=2.19Gy,n=13.57,SF6=0.732;(2)曲线性二次模型求出α=0.260GY^-1,β=0.075Gy^-2,α/β=3.44Gy,SF=0.44。结论：人鼻咽癌细胞株CNE－1 D0值及SF值较大，其对放疗相对不敏感。