A型H3579亚型流感多表位核酸疫苗小鼠实验免疫研究

目的为了应对流感流行多亚型并存的局面,进行了多表位核酸疫苗设计,并观察其免疫小鼠的细胞和体液免疫应答反应。方法设计并合成了含有H3、H9的HA和H5N1NA中和表位,M、NP基因保守序列CTL表位的多表位基因盒(Epi)。采用pVAX载体对H5HA、H7HA及Epi进行融合表达。经肌肉注射免疫6～8周龄雌性Balb/c小鼠,ELISA法检测小鼠血清中的针对H3579亚型流感抗体。三免后2周,分离脾淋巴细胞,进行T淋巴细胞转化试验和T淋巴细胞亚类数量检测。结果免疫小鼠获得了针对H3579亚型流感的体液和细胞免疫反应。结论完整HA抗原结合多表位的DNA疫苗模式的成功,预示了该DNA疫苗可能可以有效应对当前多种亚型流感并存的局面,并为其他种类流感疫苗的研究奠定了基础。     

携带tPA信号肽序列HuZP3核心抗原核酸疫苗质粒的构建与体外瞬时表达

目的:构建含有组织型纤溶酶原激活剂(tPA)信号肽的人卵透明带3(HuZP3)蛋白核心抗原核酸疫苗质粒并进行体外瞬时表达。方法:将HuZP3基因用PCR方法扩增并分别引入限制性内切酶酶切位点,然后克隆入pIRESIneo载体中获得核酸疫苗质粒,经筛选鉴定后,将上述核酸疫苗质粒及空载体质粒pIRESIneo分别用脂质体瞬时转染CHO细胞,应用免疫印迹法检测核心抗原在体外CHO细胞中的表达,并将其免疫实验小鼠,以酶联免疫吸附法验证其免疫原性。结果:成功构建以pIRESIneo为载体的含tPA信号肽的HuZP3核心抗原核酸疫苗质粒,体外瞬时表达证实含tPA信号肽的HuZP3核心抗原在CHO细胞胞内和胞外均能表达,含tPA信号肽的HuZP3核心抗原核酸疫苗质粒的核心抗原表达水平较高,核酸疫苗质粒具有很好的免疫原性。结论:以pIRESIneo为载体的含tPA信号肽的HuZP3核心抗原核酸疫苗能够将细胞内的HuZP3核心抗原分泌到细胞外,构建的核酸疫苗质粒pIRES1-ZP3/tPA具有很好的免疫原性,为进一步研究其免疫原性奠定了基础。     

抗HIV-1 gp41单链抗体导向SEAD227A融合蛋白原核温控表达及活性检测

目的 获得抗HIV-1 gp41单链抗体与葡萄球菌外毒素A融合表达的重组导向毒素蛋白。方法 人工合成能广泛识别HIV-1 goal的单链抗体(ScFv41)基因和金黄色葡萄球菌外毒素A(SEA)基因，将SEA基因第227位编码Asp(D)的密码子GAT转换成编码Ala(A)的密码子GCT，并对两基因进行密码子优化。以大肠杆菌温控型表达质粒pBV220为载体，分别构建单表达ScFv41的质粒pBV-41和SEA与ScFv41融合表达的质粒pBV-SL41，转化大肠杆菌感受态细胞，通过提高温度诱导表达，表达产物经分子筛层析折叠复性后，检测单链抗体结合活性及重组导向毒素介导的细胞毒淋巴细胞(CTL)杀伤活性。结果 表达质粒pBV-41和pBV-SL41分别在E．coli B121(DE3)plys中44℃诱导6h、42℃诱导7h得到较高表达，经SDS-PAGE、薄层扫描分析表明，目的蛋白分别占菌体总蛋白的14．359％和23．482％，目的蛋白经复性后可与HIV-1抗原条发生良好的结合反应，并且SL41可激活外周血淋巴细胞(PBMC)并介导其杀伤稳定表达HIV-1 gp160蛋白的靶细胞。结论 成功得到ScFv41与SEA融合表达蛋白SL41，为研制抗HIV-1重组导向毒素奠定基础。     

人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)gag基因疫苗的免疫原性

目的 :检测人免疫缺陷病毒 1型 (HIV 1)gag基因疫苗的免疫原性。方法 :分别以ELISA、荧光抗体染色和乳酸脱氢酶释放法 ,检测免疫小鼠血清抗体滴度、脾T细胞亚群的数量和淋巴细胞杀伤效应。结果 :血清抗体滴度、脾T细胞亚群的数量及淋巴细胞杀伤效应 ,重组质粒pVAXGAG免疫组与空载体pVAX1对照组相比较差异显著(分别为P <0 .0 5和P <0 .0 1)。结论 :HIV 1DNA疫苗质粒pVAXGAG在BALB/c小鼠中不仅可诱导特异性体液免疫 ,而且可诱导特异性细胞免疫。     

坚持你的立场

在一家并不太有名的卫校学了3年护理专业，我有幸来到广州一家大型医院实习。按照医院的规定．如果我经过3个月的实习能够得到我们医疗外科主治医师的认可．那么我就可以正式成为这家医院的一员了。所以在实习的日子里．我处处小心谨慎地工作着．生怕万一有什么闪失，我便与这份待遇优厚的工作失之交臂了．     

高通量肿瘤组织-细胞系芯片技术平台的建立及应用

1998年Ｋｏｎｏｎｅｎ等[1] 首次介绍的组织芯片 (ｔｉｓｓｕｅｍｉｃｒｏａｒｒａｙ)技术给广大病理学和相关学科领域的研究人员带来了极大方便 ,其中以在免疫组织化学和原位杂交技术中的应用最为普遍。本研究室于 1999年引进了相关仪器设备 ,国内首家建立了组织 细胞系芯片 (ｔｉｓｓｕｅ ｃｅｌｌｌｉｎｅｓｍｉｃｒｏａｒｒａｙ)技术平台并成功用于科研工作。此平台具有高通量 (一个载玻片上可排列 10 0 0个组织或细胞样品 )、经济、省时省力、易于标准化、可重复性高等优点 ,现介绍如下。一、材料和方法(一 )标本1.组织标本 :35对肝细…     

在鸡痘病毒中共表达HIV-1 gp120与IL-2基因

外膜蛋白gp120是HIV—1主要结构蛋白之一，它的V3区存在着中和抗体决定簇、CTL决定簇，以及对巨噬细胞和脑组织纤维特异性识别的区，与HIV—1可诱导中和抗体应答、特异性细胞毒反应及分子致病机制密切相关。针对V3环的抗体可干扰gp120和CCR5之间的结合，这一发现为艾滋病的预防和治疗提供了新的途径。现已证明，多数细胞因子具有良好的免疫佐剂性能，对免疫应答具有刺激作用。本研究拟利用我国鸡痘病毒疫苗株为载体，构建可共表达HIV-1 gp120与IL-2基因的重组鸡痘病毒载体，为开发HIV重组病毒活载体疫苗提供一种安全的新途径。     

应用PRPL串联启动子表达HIV-2gag蛋白

探讨ＨＩＶ－２ｇａｇ非融合蛋白的表达。方法：应用ＤＮＡ重组技术,将ＨＩＶｇａｇ基因全序列（ｇａｇ）和部分（ｇａｇ’）ｃＤＮＡ片段克隆到ｐＢＶ２２０载体ＰＲＰＬ串联启动子下游,构建成ＨＩＶ－２ｇａｇ重组表达载体ｐＢＶ－ｇａｇ和ｐＶＢ－ｇａｇ’,在大肠杆菌中表达。结果：ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示,ＰＢＶ－ｇａｇ’在２１ｋＤ处可见一明显的客外蛋白带,经薄层扫描分析占菌体总蛋白的６．１％,蛋白印迹结果证明,表达     

跟我学画兰4

上期说到兰叶的中锋用笔,介绍了画兰用笔的基本方法和具体要求.本期为您介绍兰叶穿插.兰叶的穿插,古人总结了一套方法: 一笔长,二笔短,三笔交凤眼.这种说法很有道理.按照这样的方法来画,可以清晰地表现兰叶的主次及穿插关系,避免叶叶相同、笔笔没有变化的不足.但凤眼要有大小、形状不一的区别,要体现出留白的美.     

跟我学画兰(3)

学画所以养性情,且可涤烦襟,破孤闷,释躁心,迎静气.书画延年益寿的功效早已得到公认.跟我学画兰专栏希望读者朋友能在此学到画兰的基本技巧,培养出书画的爱好,以此静心、释躁、养性情.