用单克隆抗体从人尿中纯化红细胞生成素

应用DEAE-纤维素和抗红细胞生成素单克隆抗体偶联的亲和层析柱方法分离、纯化到高纯度和高比活性的红细胞生成素产品。从25L浓缩200倍的正常人尿中提纯到约6．8mg红细胞生成亲．生物活性是62865U／mg蛋白。经SDS－PAGE和Western－blot电泳技术证实纯化到的产品在38．6±1ku处呈单一蛋白区带。氨基酸分析产品富含Ale、Gln和Leu。     

酶联免疫吸附法检测罂粟碱研究(Ⅱ)抗体制备和酶标抗原合成

利用前文制备的罂粟碱－牛血清白蛋白（Pap-BSA)偶联物作为免疫抗原，免疫新西兰大白兔，获得效价为1：32的特异性抗罂粟碱免疫球蛋白（抗体）。同时，合成了罂粟碱－辣根过氧化物酶（Pap-HRP)结合物（酶标抗原），抗体和酶标抗原特性的鉴定结果令人满意。     

人白介素-2/人血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的表达

目的：构建编码人白介素-2／人清白蛋白的重组表达质粒pPIH，在毕赤酵母（Pichia pastria）中进行表达，获得具有白介素-2（IL-2）活性的融合蛋白。方法：通过逆转录方法从人外周血单核细胞得到人IL-2的cDNA，再通过重叠PCR方法，将编码人IL-2的cDNA和编码人白蛋白的cDNA拼接起来，克隆至T载体获得含有融合基因IH的质粒pMD19／IH。用Eco RI和NotI双酶切pMD19／IH和pPIC9K两种质粒，通过琼脂糖凝胶电泳分离，试剂盒纯化，将IH片段和pPIC9K连接获得表达型pPIH的重组质粒，利用电转化方法转化毕赤酵母KM71获得重组表达质粒pPIH；CTLL-2／MTT法测定融合蛋白中人IL-2活性。结果：成功构建了人白介素-2，人血清白蛋白的重组表达质粒pPIH，融合蛋白得到了较理想的表达；重组菌经甲醇诱导表达后含有融合蛋白IL-2-HSA发酵上清液表现100U／mL的生物学活性。结论：成功获得具有人IL-2生物活性的重组人白介素-2，血清白蛋白融合蛋白，该研究结果未见文献报道。     

人C-型利钠肽-血清白蛋白融合蛋白质的构建及在毕赤酵母中的分泌表达

目的构建重组表达人C-型利尿钠肽(CNP)-人血清白蛋白(HSA)融合蛋白质的毕赤酵母。方法重叠PCR拼接CNP(400 bp)-HSA(1 800 bp)成融合基因,双酶切后克隆至表达载体pPIC9K中。电穿孔法转染毕赤酵母菌KM71,摇瓶培养分泌表达。结果融合基因约为2 200 bp,序列测定正确。SDS-PAGE分析相对分子质量约为80 000,Western blot和RIA鉴定显示其为CNP与HSA的杂合分子。结论实现了HSA-CNP融合蛋白质在毕赤酵母中的分泌表达。     

重组人血管抑素的表达、复性优化及活性研究

目的探索一种实效、经济的血管抑素制备工艺。方法对基因工程菌(E.coli,M15/pQE/AS)的IPTG诱导条件及包涵体复性纯化条件进行优化,产物以SDS-PAGE鉴定纯度,在人微血管内皮细胞模型及鸡胚尿囊膜模型上鉴定其生物学活性。结果经优化后重组人血管抑素的表达量约达菌体蛋白的30%,纯化的重组人血管抑素可显著抑制人微血管内皮细胞的增殖,最高抑制可达47%,并可显著抑制鸡胚尿囊膜模型上血管的生成。结论该表达、复性工艺简单,高效可行。     

去势骨质疏松症大鼠模型防治效果的参数比较

目的：评价防治骨质疏松症大鼠模型药物疗效的各项指标,方法：采用卵巢切除术建立骨质疏松症预防和治疗大鼠模型,分别灌喂阿仑膦酸内和埃本膦酸钠,持续处理6个月,以骨密度,骨生化标志物,骨矿含量,骨生物力学和骨组织形态学方面的参数为指标,评价它们的价值,结果：两组大鼠模型用药后,各部位的骨密度明显升高,评价药物疗效时,敏感度,特异度,准确度最高的是全身骨密度和骨小梁面积,用药大鼠的股骨最大弯曲载荷,骨挠度,股同干重,灰重,骨钙含量虽有不同程度的增高,血清骨钙素有一定程度的下降,但与对照组相比基本均无统计学意义。结论,全身骨密度是评价防治骨质松症药物疗效的最佳指标,骨切片计算骨小梁面积也是评价防治骨质疏松症药物疗效的敏感指标。     

比较三种免疫分析法检测微囊藻毒素-LR

目的评估微囊藻毒素-LR(MC-LR)的时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)、纳米均相时间分辨荧光免疫分析(NH-TRFIA)和酶联免疫分析(ELISA)三种免疫检测方法。方法通过比较包被板、反应步骤、信号系统和试剂用量,分析反应条件的差异;通过分析灵敏度、精密度和准确性,比较上述方法的性能指标;通过检测实际样品,评估方法的可靠性。结果 NH-TRFIA反应时间最短,试剂消耗量最少,灵敏度最高,量程宽;TRFIA信号最强,稳定性佳;三种方法精密度高,相对标准差均小于15%。三种方法检测实际样品与高效液相色谱法的分析结果差异无统计学意义,认为可靠。结论 TRFIA和NH-TRFIA,技术优势明显,应用前景广阔。     

Enhancement of (-)-stepholidine on protein phosphorylation of adopamineand cAMP-regulated phosphoprotein in denervated striatum of oxidopaminelesioned rats

目的：研究左旋千金藤立定（ＳＰＤ）对羟多巴胺损毁大鼠纹状体中ＤＡＲＰＰ３２蛋白磷酸化程度的影响．方法：反磷酸化测定脱磷ＤＡＲＰＰ３２的含量．结果：ＳＰＤ不改变正常大鼠纹状体中ＤＡＲＰＰ３２磷酸化的程度，但能拮抗Ｄ１激动剂的作用；对羟多巴胺损毁大鼠的损侧纹状体，ＳＰＤ使脱磷ＤＡＲＰＰ３２的含量降低４４％，给予Ｄ１拮抗剂可以拮抗这一作用．结论：在损侧纹状体，ＳＰＤ显示Ｄ１激动剂的作用特性，增加ＤＡＲＰＰ３２蛋白的磷酸化，而在正常纹状体，ＳＰＤ表现为Ｄ１拮抗剂．     

在大肠杆菌中融合表达重组羧肽酶抑制剂

利用PCR技术扩增得到编码土豆羧肽酶抑制剂（carboxypeptidase inhibitor from potato，CPI）活性多肽基因，克隆于表达载体pGEX-4T-1的多克隆位点中，得到重组质粒pGCPI，测序后将重组质粒转化到受体菌Escherichia coli BL21中。重组菌经IPTG诱导表迭，超声波破菌后，通过谷胱甘肽sepheroseFF亲和层析柱一步纯化得到融合蛋白，纯度大于979，6。融合蛋白经凝血酶切割并分离除去谷胱甘肽-S-转移酶后得到纯度大于98％的重组CPI，ELISA鉴定产物具有免疫原性，体外检测表明其促进纤溶的生物功能与天然CPI无明显差异。