阿霉素诱导人乳腺癌细胞系耐药后的细胞行为变化

目的研究和完善乳腺癌细胞多药耐药机制及多药耐药后肿瘤细胞的性质、行为改变。方法分别对野生组(MCF-7)、阿霉素诱导的耐药组(MCF-7/ADM)、撤药60d组(MCF-7/撤药60d)进行细胞学分析,观察细胞增殖速度及群体增殖时间,SP免疫组化法检测细胞表型变化。结果MCF-7/ADM与MCF-7细胞增殖速度无明显差异,撤药组随着撤药时间的延长,细胞的增殖速度加快,群体倍增时间缩短;MCF-7/ADM、MCF-7/撤药60d细胞的分化程度低于MCF-7组;MCF-7/ADM的耐药相关标记蛋白Pgp、LRP、GST-π、HER-2表达较MCF-7明显增加,而雌激素受体(ER)、TOPO-Ⅱ转为阴性表达,孕激素受体(PR)随撤药时间的延长表达逐步减低。结论应用阿霉素诱导的MCF-7具有明显的耐药细胞性状,耐药细胞具有去分化的能力;耐药细胞的遗传和生化特性发生了变化,可用于肿瘤多药耐药机制的研究。     

鸡Ⅱ型胶原诱导的类风湿关节炎大鼠模型的建立

目的以鸡Ⅱ型胶原皮内免疫Wistar大鼠,建立类风湿关节炎的大鼠模型。方法用鸡Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂于大鼠皮内注射免疫,自大鼠发病起,观察大鼠的踝关节部位的肿胀,毛色及运动状态;用ELISA法检测大鼠血清中抗Ⅱ型胶原抗体水平;采用X线摄片、病理组织学等方法进行大鼠病理学特征分析。结果ELISA结果提示：实验组大鼠血清中抗Ⅱ型胶原抗体水平较正常对照组明显高（P〈0．001）;与正常对照组相比,实验组大鼠脚踝与脚趾有明显的肿胀;X线摄片结果和病理学分析结果显示,实验组大鼠的关节组织呈现典型的关节病变的特征。结论本实验成功建立了鸡Ⅱ型胶原诱导的类风湿关节炎大鼠模型。Ⅱ型胶原诱导的类风湿关节炎大鼠模型的病理学特征与人类RA极为相似,为更好的研究人类RA的发病机制及其治疗研究提供了一个良好的动物模型。     

重组白蛋白人胰高糖素样肽-1突变体的串联体的融合蛋白在小鼠体内的药代动力学

目的研究重组白蛋白融合人胰高糖素样肽突变体的串联体rh(GLP-1A2G)2-HSA(GGH)在小鼠体内的药代动力学特性。方法采用氯胺T法标记目标蛋白rhGGH,γ放射免疫计数器检测三氯醋酸(TCA)沉淀前后血浆、组织、尿和粪的放射性计数,用DSA1.0软件拟合药物动力学模型,并计算相应动力学参数。结果 125I-rhGGH单次单剂量皮下注射后在小鼠体内的动力学过程符合二室模型,分布容积为53.4 mg.L-1.h-1,体内吸收相半衰期T12α为26.6 h,体内消除相半衰期T12β为57.8 h。125 I-rhGGH在小鼠甲状腺、血、胃、肝、肾、肺等组织器官中有较高的放射性摄取,而心、脑、胰腺、脾其它组织中放射性活度较小。125I-GGH主要经肾由尿排泄,给药后306 h,79.3%的药物由尿排出。结论小鼠体内的药代动力学表明rhGGH体内的半衰期明显优于非融合人胰高糖素样肽-1,因而使用rhGGH可以减少给药次数,并有可能提高疗效。     

阿霉素和紫杉醇诱发的人乳腺癌耐药细胞株的比较研究

目的通过比较研究乳腺癌耐药细胞株的细胞生物学特性,探讨不同化疗药物诱发的多药耐药细胞模型的共性。方法以人乳腺癌细胞株MCF-7为亲本细胞,采用阿霉素(Adriamycin,Adr)及紫杉醇(Taxol,Tax)低浓度持续加量诱导法建立了多药耐药的人乳腺癌细胞株MCF-7Adr及MCF-7Tax。SRB法测定细胞生长曲线、半数致死浓度(IC50)、耐药指数(RF)和耐药谱;显微镜观察细胞形态,FCM分析细胞动力学周期,免疫组化检测细胞表型变化;Hoechst33342染色分析侧群细胞(side population,sp)比例。结果MCF-7Adr及MCF-7Tax细胞较MCF-7亲本细胞对相应药物的IC50提高500倍,撤药培养100 d后RF仍维持在150倍以上,并对多种化疗药物产生交叉耐药性;耐药细胞分化程度低于同步传代的亲本细胞,细胞倍增时间与亲本细胞接近,但S期细胞明显增加,G1期细胞减少,且随着撤药时间的延长,耐药细胞的增殖速度加快;耐药细胞P-gP、LRP和GSTπ的表达水平较亲本细胞有明显增加,ER阳性表达丢失;耐药细胞中SP细胞比例明显增高。结论MCF-7Adr和MCF-7Tax具有多药耐药细胞的基本生物学共性,两者均可作为研究MDR机制的耐药细胞模型。     

微囊藻毒素-LR的生物素-亲和素-时间分辨荧光免疫分析法

目的运用生物素-亲和素信号放大系统,建立高灵敏的微囊藻毒素-LR(MC-LR)时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)检测方法。方法采用5μg/ml二抗Ig G包被板,样品中的MC-LR与生物素-MC-LR半抗原(1∶300)竞争限量抗MC-LR抗体(1∶1 000),用铕标记的链霉亲和素示踪,采用TRFIA法检测水样中的MC-LR含量。结果在0.1~5 ng/ml的线性范围内,得到MC-LR-TRFIA的回归方程为y=-29 132x+38 057,r=0.991 5。方法的灵敏度为0.02 ng/ml,平均回收率为80.2%~102.0%,批内和批间的RSD分别为4.3%~8.1%和9.9%~15.2%。该方法检测MC-LR与MC-YR和MC-LF的交叉率均小于10%。结论基于生物素-亲和素信号放大系统的MC-LR-TRFIA方法灵敏度高、特异性好、操作简便,适于水中MC-LR浓度的检测。     

王不留行提取物对内皮细胞增殖、迁移及其黏附的作用评价

目的体外分析王不留行抑制人微血管内皮细胞(HMEC)增殖、迁移和黏附的有效部位。方法SRB法测定药物干预细胞增殖的IC50和药物作用时间与药效学的关系;划线灼伤法研究细胞迁移;体外基质胶分析药物对细胞黏附能力的影响;HE染色观察药物对细胞染色体的影响。结果王不留行有效部位对HMEC增殖抑制的IC50为3.60mg.L-1,加药4h后起作用。加药48h后HMEC迁移受到明显抑制(迁移率为40.33%,对照组迁移率为77.68%)。加药组细胞黏附受到明显抑制,且呈浓度依赖关系。结论王不留行提取物能明显抑制内皮细胞增殖、迁移及黏附,因此具有潜在的价值用于抑制血管生成。     

利凡诺去白蛋白人血浆再利用的实验研究I.蛋白C和蛋白S的纯化与鉴定

目的综合再利用利凡诺去白蛋白人血浆进行抗凝血成分蛋白C（PC）和蛋白S（PS）的分离纯化。方法采用钡盐吸附、分段盐析、亲和层析和制备性等电聚焦等技术从利凡诺去白蛋白人血浆中分别纯化PC和PS。结果所得PC和PS的相对分子量分别为(61±0.9)、(83±0.8)kD;等电点分别为4.70±0.03、5.20±0.03;分别富含Glu、Leu、Gly和Asp、Glu、Leu;毛细管区带电泳分析高度均一;与文献报道基本一致;得率分别为28.3%和12.6%。结论该纯化路线省时、经济,有助于利凡诺去白蛋白人血浆的综合再利用和抗凝血成分输血制剂的研制和开发。     

利凡诺去白蛋白人血浆再利用的实验研究Ⅱ.抗凝血酶Ⅲ和蛋白C抑制物的纯化与鉴定

目的综合再利用利凡诺去白蛋白人血浆进行抗凝血成分抗凝血酶Ⅲ (AT Ⅲ )和蛋白C抑制物 (PCI)的分离纯化。方法以钡盐吸附上清为原料 ,采用铝盐吸附、有机沉淀、离子交换层析、分子筛层析、亲和层析和制备性等电聚焦等技术从利凡诺去白蛋白人血浆中分别纯化AT Ⅲ和PCI。结果从利凡诺去白蛋白人血浆 10L中得到了AT Ⅲ 16 0mg和PCI4.2mg ,得率分别为 12 .7%和 10 .5 % ,其相对分子量分别为 (5 7± 0 .8)和 (5 6± 0 .8)kD ;等电点分别为 4.81± 0 .0 2和 8.0 1± 0 .0 2 ;分别富含Glu、Asp、Leu和Glu、Leu、Asp ;毛细管区带电泳分析高度均一 ;与文献报道基本一致。结论该纯化路线经济、简便 ,有助于利凡诺去白蛋白人血浆的综合再利用和抗凝血成分输血制剂的研制和开发     

不同喷射雾化器对吸入混悬液体外沉积性质的影响

目的：分析并比较使用3种喷射雾化器测定布地奈德吸入混悬体外沉积的结果。方法以自制布地奈德吸入混悬液为模型药物,使用百瑞Turob BOY N、BOY SX和欧姆龙NE-C28雾化器,通过呼吸模拟器和新一代药用撞击器（NGI）测定其体外沉积性质。结果百瑞两型雾化器递送速率相近,欧姆龙的递送速率较低,递送总量均约在0.11μg;3种雾化器测得的质量平均空气动力学粒径（MMAD）为4.95~6.54μm,几何标准偏差（GSD）为1.66~2.10,微细粒子剂量（FPD）87.64~101.47μg,微细粒子有效沉积率（FPF）37.75%~53.88%。由统计学分析可知不同雾化器对递送总量不产生显著性差异,而对递送速率（P＜0.01）和空气动力学测定结果（P＜0.05）产生显著差异。结论不同喷射式雾化器对布地奈德吸入混悬液体外沉积有一定影响,所选的3种雾化器中欧姆龙NE-C28适用性较好。     

过敏性哮喘患者外周血循环TFR细胞的变化及临床意义

目的：本研究旨在探讨过敏性哮喘患者外周血循环滤泡调节性T细胞(cT_FR)比例变化及临床意义。方法：流式细胞仪检测25例过敏性哮喘患者及15例健康志愿者外周血cT_FR细胞的比例,流式细胞微球芯片捕获技术法检测血清细胞因子水平,并分析cT_FR细胞比例与过敏性哮喘临床实验室检测指标的相关性。结果：与健康对照组相比,过敏性哮喘患者外周血cT_FR细胞比例显著下降[(0.42±0.08)vs(0.91±0.12),P<0.01],血清IL-10表达水平显著降低(P<0.05)。cT_FR细胞比例与血清总IgE水平呈负相关(P<0.05),与第1秒用力呼气容积占预计值的百分比FEV1%呈正相关(P<0.05)。结论：外周血cT_FR和IL-10可能在过敏性哮喘免疫球蛋白E(IgE)异常增高的病理过程中起重要作用。