溃疡性结肠炎脾胃虚实证候核糖体蛋白基因表达研究

目的 研究健康人、溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)脾虚证和湿热证患者核糖体蛋白(ribosomal protein,RP)基因表达差异情况,为从蛋白合成角度理解“脾为气血生化之源”提供实验依据。     

人参皂苷Rg1对Caco-2细胞PepT1转运功能的影响

[目的]观察人参皂苷Rg1对Caco-2细胞肽转运载体PepT1转运二肽化合物的能力及其蛋白、mRNA表达的影响.[方法]Caco-2细胞长满瓶底后继续培养28d,然后给予人参皂苷Rg1(终浓度为50mmol/L)处理,并设立空白对照组及cAMP抑制剂(Rp-8-Br-cAMP)对照组,采用放射性同位素示踪技术比较Ca...     

核糖体蛋白基因芯片的制作和临床试用

【目的】制作核糖体蛋白(ribosomal protein,RP)基因芯片,探讨该芯片应用方法。【方法】设计、合成58mer寡核苷酸探针,打印芯片。收集溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)患者和正常自愿者结肠黏膜,提取总RNA。逆转录法Cy5-dCTP标记试验样品,试验样品包括正常组4例、混合正常组1例、UC 8例、UC混合1例,Cy3-dCTP标记共同参照,1例正常样品和共同参照进行Cy5-dCTP、Cy3-dCTP荧光交换。试验样品和共同参照配对杂交、扫描,应用BRB-TOOL(3.90)进行数据分析。【结果】制作了包括77条RP基因,2条RP类似基因(RPL26-like1、RPL7-like1)低密度芯片。UC混合样品杂交的信号值与UC 1～8分别杂交信号值之均数最为接近,健康人混合样品杂交的信号值和H 1～4分别杂交信号值之均数没有相近之处,但更接近于单样品杂交的结果;混合样品所得到的差异基因数明显少于样品分别杂交所得到的差异基因数。2例荧光交换Ratio值高度相关。【结论】成功制作了RP基因芯片。样品混合会影响杂交数据的统计,同时,均一化能轻微减弱荧光染料引起数据的偏差。     

活血化瘀法对实验性高脂血症大鼠载脂蛋白与脂蛋白(a)的影响

目的 :研究活血化瘀法对实验性高脂血症 (HLP)大鼠血清载脂蛋白AI (ApoAI)、B (ApoB)、脂蛋白 (a) [Lp (a) ]及磷脂酰胆碱胆固醇转酰酶 (LCAT)的影响。方法 :采用高脂饮食喂饲法建立大鼠HLP模型 ,自造模第 1天起 ,灌胃给予活血化瘀方剂 ,连续给药 40天 ,应用免疫比浊法在全自动生化分析仪上测定ApoAI、ApoB、Lp (a)浓度 ,参照文献方法测定LCAT活性。结果 :活血化瘀方剂三个剂量均能显著降低高脂大鼠血清ApoB、Lp (a)水平 ( p <0 .0 5 ,p <0 .0 1 ) ,显著升高ApoAI水平及LCAT活性。结论 :提示本方通过升高ApoAI、降低ApoB进一步发挥血脂调节作用 ,通过降低Lp (a)水平降低了心脑动脉粥样硬化 (AS)性血管疾病的独立危险因素 ,并提示提高LCAT活性是本方调血脂机理之一。     

黄芪提取物对结肠腺癌Caco-2细胞葡萄糖吸收的影响

目的:探讨黄芪提取物对Caco-2细胞葡萄糖吸收的影响,并探讨其作用机制。方法:采用系统溶剂法提取黄芪各部位,以Caco-2细胞为研究对象,设立空白组和黄芪各提取部位组(乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇4个部位组)。以荧光标记2-脱氧葡萄糖(2-NBDG)做为光学探针检测黄芪各提取部位对Caco-2细胞葡萄糖吸收能力的影响。筛选出黄芪中促进Caco-2细胞葡萄糖吸收的药效部位后,对这一药效部位有效作用浓度进行考察。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)法测定Caco-2细胞钠依赖葡萄糖转运蛋白(SGLT1)和2型葡萄糖转运蛋白(GLUT2)蛋白表达。结果:黄芪正丁醇提取部位可以促进Caco-2细胞葡萄糖的吸收,与空白组比较,黄芪正丁醇提取部位100,150 mg·L-1组Caco-2细胞葡萄糖含量升高(P0.05,P0.01);且黄芪正丁醇部位可以上调Caco-2细胞GLUT2和SGLT1蛋白的表达(P0.05,P0.01)。结论:黄芪正丁醇萃取部位可以促进Caco-2细胞葡萄糖的吸收,这一作用机制可能与SGLT1和GLUT2蛋白的调节有关。     

四君子汤对利血平致脾虚大鼠唾液淀粉酶分泌的影响

目的观察脾虚证大鼠唾液淀粉酶分泌情况及四君子汤治疗作用。方法雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组,模型组,大鼠皮下注射利血平,空白组大鼠注射等量生理盐水,共8d;造模结束后将模型组分为中药组和模型组,中药组给予灌服四君子汤,模型组和正常组给予灌服等量的双蒸水,灌服4周后进行取材。麻醉动物,取下左侧腮腺,缝合伤口,等大鼠稍清醒时用10%冰乙酸溶液20μL刺激大鼠舌尖,1次/min,共刺激30min;处死,取下右侧腮腺。检测腮腺淀粉酶活性、电镜下观察腮腺内酶原颗粒数量、腮腺组织病理。结果模型组大鼠酸刺激后腮腺内残余的淀粉酶活性和酶原颗粒高于正常组大鼠,经四君子汤治疗后脾虚大鼠的唾液淀粉酶的分泌基本恢复正常,各组腮腺组织没有明显病理改变。结论四君子汤对利血平所致脾虚大鼠唾液淀粉酶分泌障碍有明显治疗作用,机制与腮腺组织病理学无关。     

黄芪六一汤对2型糖尿病大鼠降糖作用的机制研究

目的:探讨黄芪六一汤对糖尿病大鼠的降糖作用及其机制。方法:采用高脂高糖饲养合并腹腔注射链脲佐菌素(30 mg/kg)建立糖尿病大鼠模型。造模成功的大鼠随机分为模型组、达格列净阳性对照组及黄芪六一汤低、中、高剂量组。实验期间每周称体质量,尾静脉采血测量空腹血糖、糖化血红蛋白及胰岛素的含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定2型葡萄糖转运蛋白(GLUT2)和钠-葡萄糖转运蛋白(SGLT2)的表达;荧光定量PCR分别检测GLUT2、SGLT2 mRNA表达。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠体质量显著降低,血糖、糖化血红蛋白水平及SGLT2、GLUT2蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,黄芪六一汤各组糖化血红蛋白、SGLT2蛋白表达均显著降低,GLUT2蛋白表达显著升高(P<0.05或P<0.01)。黄芪六一汤对模型大鼠体质量及GLUT2、SGLT2 mRNA表达无明显影响。结论:黄芪六一汤对高脂高糖饲养合并腹腔注射STZ致糖尿病大鼠具有降糖作用,治疗效果与达格列净相似,其作用机制与抑制SGLT2蛋白功能有关。     

活血化瘀法对实验性高脂血症大鼠脂质氧化的影响

目的 :研究活血化瘀法对实验性高脂血症 (HLP)大鼠血中丙二醛 (MDA)、超氧化物歧化酶 (SOD)、氧化低密度脂蛋白 (oxLDL)的影响。方法 :采用高脂饮食喂饲法建立大鼠HLP模型 ,自造模第 1天起 ,灌胃给予活血化瘀方剂低剂量 6.75 g/kg·d,中剂量 2 0 .2 5 g/kg·d ,高剂量40 .5 g/kg·d ,连续给药 40天 ,应用硫代巴比妥酸 (TBA)法测定血清MDA含量 ,黄嘌呤氧化酶法测定血清SOD活力 ,酶联免疫吸附试验 (ELISA)双抗体夹心法测定血浆oxLDL浓度。结果 :活血化瘀方剂三个剂量均能显著降低高脂大鼠血中MDA、oxLDL水平 (P <0 .0 1 ) ,显著提高SOD活力 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1 )。结论 :提示本方具有抗脂质过氧化作用。     

脾阳虚大鼠肽转运载体蛋白表达及转运功能的改变

目的 观察脾阳虚模型大鼠小肠黏膜肽转运载体1(PepT1)的表达及其转运功能的变化.方法 采用劳倦泄下合利血平复合因素造模法建立脾阳虚大鼠模型,RP-HPLC法测定cefalexin血药浓度以评价小肠黏膜PepT1的转运吸收功能,免疫组化方法观察脾阳虚大鼠肠上皮PepT1蛋白表达情况.结果 十二指肠给药120 min后,RP-HPLC法测定模型大鼠血清cefalexin浓度为(5.23±2.10) μg/ml,高于正常对照组的(2.52±0.47) μg/ml(P<0.01);模型大鼠小肠黏膜上PepT1蛋白表达较正常对照大鼠表达升高.结论 脾阳虚证模型大鼠小肠黏膜肽转运载体PepT1表达及对cefalexin的转运能力增强.     

奥美拉唑体内外给药对壁细胞H~+-K~+-ATP酶活性的影响

目的观察奥美拉唑体内外给药对壁细胞H+-K+-ATP酶活性的影响。方法体内给药:大鼠分为空白对照组、奥美拉唑组,奥美拉唑组体内给予奥美拉唑5 mg·kg-1,连续3 d,提取分离壁细胞,检测H+-K+-ATP酶活性;体外给药:分离纯化大鼠壁细胞,进行裂解后,随机分为空白对照组、奥美拉唑组,奥美拉唑组给予奥美拉唑4μg·mL-1,水浴孵育30 min,检测H+-K+-ATP酶活性。结果奥美拉唑体内给药未见明显抑制壁细胞H+-K+-ATP酶活性的作用,体外给药可明显抑制壁细胞H+-K+-ATP酶活性。结论分离纯化壁细胞后进行药物干预效果更明显,可作为药物筛选的方法之一。