基于脾虚证相关基因功能鉴定的小肠上皮细胞RNA干扰转染条件研究

[目的]探索影响大鼠小肠上皮细胞(IEC-6)RNA干扰效率的转染条件,为进一步以RNA干扰(RNAi)技术构建不同程度表达靶蛋白的细胞模型打下基础.[方法]以24孔培养板培养IEC-6细胞,利用阳离子脂质体转染FAM-siRNA片段进入IEC-6细胞,采用荧光显微镜和流式细胞仪检测FAM-siRNA和转染试剂Lipofectamine 2000不同剂量比例对转染效率的影响.[结果](1)采用荧光显微镜检测转染效率,以评分进行秩和检验,结果仅有转染试剂或仅有FAM-siRNA或两者均无的组别评分均为0,转染试剂加FAM-siRNA组别均有或强或弱的荧光表达.(2)采用流式细胞仪检测转染效率,以Lipofectamine 2000 1.0μL+FAM-siRNA 160 nmol/L组转染效率最高(平均76.3%),而空白对照组约为1%. [结论]FAM-siRNA 160 nmoL/L(20 μmoL/L、4.8μL,终体积为0.6 mL)+Lipofectamine 2000 1.0μL组合为IEC-6细胞RNA干扰时转染效率最高的转染条件.     

RPS20RNA干扰慢病毒的构建及其对CT26细胞生长的影响

目的 研究脾虚证差异表达基因——核糖体蛋白S20 (RPS20)RNA干扰慢病毒转染对小鼠结肠癌细胞(CT26)细胞指数的影响,验证前期筛选的RNA干扰序列的有效性,为后续在小鼠体内以RNA干扰进行RPS20的功能鉴定提供参考.方法 根据前期筛选的RPS20 RNA干扰有效序列,进行质粒载体的重组,包装RPS20干扰慢病毒并转染CT26细胞,采用xCELLigence细胞动态分析仪实时监测转染后细胞的细胞指数以反映细胞的生长情况.结果 测序图谱和Blast比对结果表明重组慢病毒包装载体构建成功,慢病毒滴度为1.2×105 TU/mL,RNA干扰慢病毒转染后CT26细胞指数的增长受到明显抑制,转染后30 h细胞指数抑制率达到82.24％.结论 前期筛选的RPS20 RNA干扰序列可成功构建包装干扰慢病毒,转染后能有效抑制CT26细胞的生长,可为后续研究提供参考.     

脾气虚证患者基因差异表达研究

目的：研究慢性胃炎脾气虚证的特征性基因差异表达谱。方法:慢性胃炎脾气虚证患者及健康志愿者各选4例，镜下取胃黏膜组织，提取总RNA，一一配对制作基因芯片，采用荧光比值、生物信息学、双侧t检验等方法比较分析；实时荧光定量PCR检测相关基因。结果:差异表达基因54条，72.2%下调；其中与营养物质代谢和免疫调节相关差异表达基因45条， 71.1%下调；差异基因中有4条基因P＜0.05，为显著差异表达基因；实时定量PCR检测差异基因5条，4条与芯片结果一致。结论:慢性胃炎脾气虚证具有特征性的基因差异表达图谱，主要表现为与营养物质代谢及免疫调节相关基因呈下调趋势。     

中医药治疗脂肪肝研究进展

对近年中医药治疗脂肪肝的文献通过以下几方面进行综述,对病因病机的认识,中医药治疗包括辨证论治,专方治疗以及基础方随症加减治疗,现代药理研究包括单味中草药,有效复方,有效活性成分,并对其研究之不足进行概括,提出建议。     

铅对男性职业人群血清激素水平的影响探讨

目的探讨铅对男性职业人群血清激素水平的影响。方法调查某蓄电池生产企业铅危害情况,选择137名男性铅作业工人及140名男性不接触职业危害因素的管理人员,检测其血铅(Pb B)浓度、三碘甲状腺原氨酸(T3)、人促卵泡生成激素(FSH)、甲状腺素(T4)、睾酮(T)、血清中促甲状腺素(TSH)以及人促黄体生成激素(LH)水平。结果接触组Pb B含量高于对照组,差异有统计学意义(P0.01)。接触组T3平均为(1.26±0.24)ng/m L、T4为(75.22±17.17)ng/m L、T为(3.98±1.37)ng/m L、LH为(3.17±1.21)m IU/m L,低于对照组T3为(1.47±0.32)ng/m L、T4为(89.92±21.32)ng/m L、T为(5.29±1.84)ng/m L、LH为(10.18±1.63)m IU/m L水平(P值均0.05);接触组TSH的(2.73±1.22)m IU/m L,高于对照组的(2.15±1.13)m IU/m L水平(P0.05)。FSH水平的差异无统计学意义(P0.05)。结论铅对职业人群甲状腺功能有一定的损害作用,能降低甲状腺激素分泌水平;同时干扰性激素的分泌。     

纳络酮在临床中应用的新进展

纳络酮在体内与吗啡竞争同一受体,是纯吗啡受体拮抗剂.近年来纳络酮在临床中广泛应用,应用范围包括:酒精中毒、农药中毒、昏迷、休克、脑缺血性卒中,以及新生儿方面的疾病,本文就纳络酮在临床中的应用作一介绍.     

理中汤对脾阳虚大鼠模型PepT1及其转运功能的影响

目的 观察理中汤对脾阳虚模型大鼠小肠上皮肽转运载体蛋白1对二肽转运功能改变、肽转运载体PepT1及其mRNA表达变化的影响.方法 采用利血平复合因素造模法建立脾阳虚大鼠模型,以头孢氨苄做为PepT1的转运底物,通过反相高效液相法(RP-HPLC)测定其血药浓度来反映脾阳虚大鼠小肠上皮细胞PepT1的吸收转运功能,RT-PCR:测定大鼠小肠黏膜PepT1 mRNA表达,免疫组织化学方法观察大鼠小肠PeDT1蛋白表达情况,同时用酶联免疫法测定小肠黏膜组织cAMP含量.结果 模型组大鼠血清中cefalexin浓度明显高于正常组,经理中汤治疗后,大鼠cefalexin血药浓度与正常对照组比较无显著性差异;模型组大鼠PeDT1蛋白表达明显上调(P＜0.05),理中汤治疗组大鼠的PepT1蛋白表达与正常组比较未见明显差异;脾阳虚模型大鼠PepT1 mRNA表达水平较正常组明显下调(P＜0.05),经理中汤治疗后,其下调趋势被逆转,与正常组比较未见明显差异;模型组大鼠小肠黏膜cAMP浓度较之于正常组,明显降低,经过理中汤治疗恢复接近正常组水平.结论 脾阳虚模型大鼠小肠黏膜PepT1转运功能增强,蛋白表达上调,理中汤治疗可逆向调节这种改变.     

活血化瘀法对实验性高脂血症大鼠调血脂作用的研究

目的 :研究活血化瘀法对实验性高脂血症 (HLP)大鼠血清总胆固醇 (TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白 -胆固醇 (LDL -C)、高密度脂蛋白 -胆固醇 (HDL -C)及其第二亚组份(HDL2 -C)、极低密度脂蛋白 -胆固醇 (VLDL -C)水平及TC HDL -C比值的影响。方法 :采用高脂饮食喂饲法建立大鼠HLP模型 ,自造模第 1天起 ,灌胃给予活血化瘀方剂低剂量 6 75g kg·d ,中剂量 2 0 2 5g kg·d ,高剂量 40 5g kg·d ,连续给药 40天 ,应用酶法在全自动生化分析仪上进行指标测定。结果 :活血化瘀方剂三个剂量均能显著降低高脂大鼠血清TC -TG、LDL -C、VLDL -C水平及TC HDL -C比值 (P <0 0 5 ,P <0 0 1 ) ,显著升高HDL -C、HDL2 -C水平 (P <0 0 1 )。结论 :活血化瘀法能有效地调整血脂异常 ,对动脉粥样硬化 (AS)的发生发展可能有防治作用。     

劳绍贤诊治便秘经验

介绍劳绍贤教授临床诊治便秘经验,并附验案3则以佐证。劳绍贤教授认为,便秘的病机为五脏功能失调,大肠传导失常。治疗上,以调理五脏、行气养阴为治则,并根据气虚、气滞、津伤的病机特点,病证结合,辨证施治。急性便秘者采用大承气汤或大黄牡丹汤治疗;慢性便秘者采用自拟润肠通便基础方（主要由槟榔、木香、台乌、郁李仁、生地黄、玄参、甘草等组成）治疗;其他胃肠疾病伴便秘者,治疗时可在胃病辨证用方基础上加用行气润肠药;大便多日未解者服用通便药前应先润化燥屎。同时嘱咐患者保持良好的饮食习惯,并进行腹部按摩、相关肌肉训练等以提高中药疗效,预防便秘复发。     

四君子汤对脾气虚证模型大鼠小肠葡萄糖吸收功能作用的影响

目的 观察四君子汤对脾气虚证模型大鼠小肠葡萄糖吸收功能的影响。方法 通过颈部皮下注射利血平建立脾气虚证大鼠模型,观察大鼠体重及尿D-木糖排泄率变化,通过在体空肠灌流收集并检测葡萄糖吸收量,收集小肠黏膜,检测葡萄糖运载蛋白2（GLUT2）蛋白及mRNA表达变化。结果 与正常对照组比较,模型组大鼠体重及尿D-木糖排泄率均降低,同时伴有葡萄糖吸收的下降以及GLUT2蛋白及mRNA表达的降低,通过给予四君子汤治疗,四君子汤组在各指标恢复上均优于自然恢复组。结论 四君子汤能够促进利血平致脾气虚证模型大鼠小肠吸收葡萄糖功能恢复。