阿尔采默病患者皮肤α-微管蛋白的免疫细胞化学与胶体金免疫电镜观察

目的观察阿尔采默病(AD)患者皮肤基底细胞α微管蛋白的变化。方法取患者背部皮肤,用免疫细胞化学和胶体金免疫电镜技术观察,并进行定量分析。结果免疫细胞化学染色显示,对照组皮肤免疫阳性染色主要位于表皮层基底细胞的胞质内,棘细胞层和颗粒层可见少量的阳性细胞;AD组基底细胞内着色深,棘细胞层和颗粒层亦有表达,但数量少。胶体金标记结果显示,对照组基底细胞可见较丰富的微管,标记的胶体金散在于胞质。AD组微管较对照组减少;标记的金颗粒数量较对照组明显增多。定量结果显示,AD组α微管蛋白免疫细胞化学染色的AOD值(1. 165±0. 079)、VIOD值(186. 000±15. 853)均较对照组(0. 814±0. 152, 96. 020±14. 755)明显增高(P<0. 01);α微管蛋白胶体金标记颗粒数目AD组(20. 74±3. 99)亦较对照组(15. 50±3. 41)增多明显(P<0. 01)。结论AD患者皮肤基底细胞内微管数量的减少,结构破坏,对皮肤组织的观察可能间接反映神经组织的改变。     

RNA干扰CRMP 5抑制大鼠海马神经元突起生长

目的探讨CRMP5对大鼠海马神经元突起生长的影响。方法将带FAM标记的CRMP5的特异性干扰片段及阴性对照转染培养成熟的海马神经元,用免疫荧光的方法验证干扰片段对神经元内源性CRMP5的干扰效果,并利用共聚焦显微镜观察神经元突起以及侧枝的形成。结果携带FAM的si RNA可以成功的进入细胞,分布于神经元的胞体以及树突;免疫荧光证实CRMP5 si RNA可以有效的沉默CRMP5蛋白的表达;沉默CRMP5基因表达后的海马神经元突起短小,而且缺少分支,而对照细胞突起长,分支多;定量分析显示,导入CRMP5 si RNA的细胞突起的长度较对照细胞缩短,差异显著(P0.05);突起的数目比较,一级突起数目无显著差异,而二级及其以上突起的数目明显减少,差异显著(P0.05)。结论沉默CRMP5可抑制海马神经元突起的生长和侧枝形成。     

血管性痴呆患者皮肤α-微管蛋白免疫细胞化学与胶体金免疫的电镜观察

目的：观察血管性痴呆(vascular dementia，VD)患者皮肤基底细胞α-微管蛋白的变化，从细胞的超微结构变化探讨其皮肤基底细胞α-微管蛋白与VD的关系。方法：实验于2001—03／12在广州东山区福利院和暨南大学医学院进行。取广州东山区福利院志愿参加实验的正常老人和VD患者各5例背部皮肤，用免疫细胞化学和胶体金免疫电镜技术观察，并进行定量分析。结果：免疫细胞化学染色显示，对照组皮肤免疫阳性染色主要位于基底细胞的胞质(吸光度为0．814&;#177;0．152；体积积分吸光度为96．020&;#177;14．755)；VD组阳性产物主要位于基底细胞层(吸光度为0.398&;#177;0．081；体积积分吸光度为41．800&;#177;7．823)，与对照组比较差异有显著性意义(t=8．368，-54．220，P&;lt;0．05)。胶体金标记结果显示对照组基底细胞可见较丰富的微管，标记的胶体金多散在于胞质[(15．50&;#177;3．41)个／细胞)]。VD组基底细胞内微管较对照组增多，基底细胞标记的胶体金颗粒较对照组明显减少[(11．38&;#177;3．27)个／细胞，t=4．120，P&;lt;0．05]。结论：VD患者皮肤组织细胞骨架结构亦发生变化，提示痴呆可能是一种系统性的退行性疾病。了解皮肤组织的变化，可能有助于痴呆的非神经系统生物学诊断指标的建立。     

外源性一氧化氮抑制剂和诱导剂对高血压大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的：观察长期使用Nω-硝基-L-精氨酸(Nω-nitro-L-Arginine，LNNA)和谷氨酸单氨钠(L-Glutamic acidmonoammonium salt，MSG)后高血压大鼠主动脉中膜的变化。方法：将60只SD大鼠随机分为4组，一组作为对照组，一组用双肾双夹法建立高血压大鼠模型，另2组首先建立高血压模型，分别腹腔内注射LNNA[0．2mg／(100g&;#183;d)]和MSG[50mg／(100g&;#183;d)]，用测微尺测量主动脉中膜的厚度及平滑肌细胞的层数，并计算中膜的面积。结果：中膜平滑肌细胞层数和面积的变化具有相似性，高血压组中膜平滑肌细胞层数和面积虽然7d变化不显著，但随着高血压持续时间的延长30，70d均明显增多(t=3．257，3．986，3．784，4．251，P&;lt;0．05)，70d分别达(28．3&;#177;0．8)层和(1031．4&;#177;39．7)&;#215;10^3 μm^2；LNNA组高血压大鼠30，70d与高血压组大鼠比较显著增多(t=3．087,3．469,3．895，3．884，4．011，P&;lt;0．05)，且随着高血压的发展有增多趋势，其中70d为(32．1&;#177;0．5)和(1159．5&;#177;46．7)&;#215;10^3μm^2；应用MSG组大鼠7,30d较LNNA组大鼠明显减少(t=4．779，4．989，3．683,4．709,P&;lt;0．05)，与高血压组无明显差异，在70d减少明显(t=3．784．P&;lt;0．05)，为(22．3&;#177;0．5)和(826．3&;#177;36．4)&;#215;10^3μm^2。结论：抑制一氧化氮生成可升高血压，并促进血管平滑肌细胞增殖，有效促进一氧化氮生成可减少血管中膜平滑肌细胞的增殖，其机制可能涉及一氧化氮对ANG分泌的抑制作用。     

力学加载对胚胎神经干细胞分化的影响

目的 观察机械力学加载对胚胎神经干细胞(NSC)体外培养和分化的影响.方法 取妊娠13.5d昆明小鼠分离胚胎大脑中的神经干细胞,用添加碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的无血清培养基进行体外培养,在培养过程中对细胞进行力学加载,免疫细胞化学检测细胞及细胞分化表面抗原.结果 力学加载培养细胞和非加载细胞均呈100％巢蛋白阳性,分化良好,对照组非力学加载分化细胞中(10.9±4.7)％细胞呈Tubulin阳性,力学加载4h后的胚胎神经于细胞的阳性率为(20.5±3.4)％,力学加载后的培养细胞和非加载培养细胞的分化率差异有统计学意义(P＜0.05).结论 力学加载对体外培养的胚胎神经干细胞的分化有促进作用.     

坍塌反应调节蛋白5促进海马神经元突起生长

目的 探讨坍塌反应调节蛋白5(CRMP5)对神经元突起生长的作用。方法 构建CRMP5真核表达载体,采用基因转染、实时定量PCR和免疫印迹技术评估CRMP5基因表达;以空载体为对照组,设3个复孔,用时差成像技术和突起提取技术观察和检测原代培养海马神经元突起的生长。结果 成功构建携带增强型绿色荧光蛋白（EGFP）标签蛋白的CRMP5的真核表达载体。脂质体转染技术可成功把CRMP5基因导入细胞,转染的细胞CRMP5表达高于空载体对照组;CRMP5蛋白表达于神经元的胞体和突起,尤其是胞体、突起起始处和突起末端高表达。过表达CRMP5可明显促进突起生长,主要表现为突起的生长,并形成丰富的侧枝;定量结果显示,CRMP5过表达的细胞突起的长度逐渐延长,而且较空载体转染细胞增多,差异显著(P<0.01)。导入CRMP5的细胞突起提取液的吸光度较对照细胞明显升高(P.<0.01)。 结论 CRMP5能促进神经元突起及其分支的生长。     

糖尿病大鼠中脑导水管周围灰质nNOS免疫阳性神经元的变化

糖尿病患者常并发慢性周围神经病变,表现为感觉异常。一氧化氮(NO)缺乏导致周围神经供血不足以及由此引起的感觉传导异常可能与之有关。但对于中枢神经是否参与感觉障碍?与糖尿病时感觉传导异常的关系如何,仍有许多未知。中脑导水管周围灰质(PAG)是内源性镇痛系统的关键结构,其背外侧区富含神经元型一     

重组人改构体酸性成纤维细胞生长因子减少帕金森病大鼠黑质酪氨酸羟化酶免疫阳性神经元丢失

目的 探讨重组人改构体酸性成纤维细胞生长因子(Mrh-aFGF)对帕金森病(PD)大鼠旋转行为和酪氨酸羟化酶(TH)免疫阳性神经元的影响.方法 6-OHDA分别注入黑质和腹侧被盖区后建立PD大鼠模型,侧脑室内注射Mrh-aFGF,用阿扑吗啡诱导旋转行为,免疫细胞化学染色观察TH免疫阳性神经元和纤维,并进行定量分析.结果 对照组均未引出旋转行为;PD组术后旋转启动时间缩短,持续时间延长,速度加快;生理盐水(NS)处理组旋转行为未见明显改善;Mrh-aFGF处理组旋转启动时间延长,持续时间缩短,速度减慢(P＜0.01).各组大鼠健侧黑质TH阳性神经元的数量维持在相近的水平.同组内健侧和损毁侧阳性神经元比较,对照组损毁侧无明显改变;PD组、NS处理组和Mrh-aFGF处理组损毁侧阳性神经元与健侧比较均明显减少(P＜0.01).其中PD组损毁侧黑质TH免疫阳性神经元数量随时问延长逐渐减少(P＜0.01).NS处理组损毁侧黑质TH免疫阳性神经元的变化与PD组相似;Mrh-aFGF处理组损毁侧黑质阳性神经元较PD组及NS处理组有明显改善,阳性神经元的数量明显增加(P＜0.01).结论 Mrh-aFGF能减少PD大鼠黑质TH免疫阳性神经元的丢失,并改善其旋转行为.     

氯丙嗪氯氮平合用治疗精神分裂症临床疗效评价

目的　评价合用氯丙嗪和氯氮平治疗精神分裂症的临床疗效。方法　采集１１５ 例精神分裂症患者,随机分３ 组：（１）氯丙嗪组：氯丙嗪４００ｍｇ·ｄ－ １ ;（２） 氯氮平组：氯氮平３００ｍｇ·ｄ－ １ ;（３） 双氯疗法组：氯丙嗪１００ｍｇ·ｄ－１ 和氯氮平３００ｍｇ·ｄ－ １ 。疗效和不良反应分别用简明精神病评定量表（ＢＰＲＳ）和副反应量表（ＴＥＳＳ） 进行评定。结果　各治疗组ＢＰＲＳ总分均明显低于治疗前（ Ｐ＜ ０．０１）;１ｗｋ 后氯丙嗪组、氯氮平组因子ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ 的评分显著低于治疗前（Ｐ＜ ０ ．０５）,因子Ｉ、ＩＩ的评分于２ｗｋ 后明显降低（ Ｐ＜０ ．０１）;双氯疗法组ＢＰＲＳ因子评分１ｗｋ 后均明显低于治疗前（ Ｐ＜０ ．０１）。氯丙嗪组不良反应主要表现为植物神经系、锥体外系;氯氮平组为植物神经系;双氯疗法组亦为植物神经系,且ＴＥＳＳ总分较其它两组明显增多（Ｐ＜ ０．０５）;氯氮平组ＢＰＲＳ减分值与氯丙嗪组无显著差别,但ＴＥＳＳ增分值明显降低（ Ｐ＜０ ．０１） ;双氯疗法组ＢＰＲＳ减分值、ＴＥＳＳ增分值显著高于氯丙嗪组和氯氮平组（Ｐ＜ ０．０１）。结论　合用氯丙嗪与氯氮平治疗精神分裂症的疗效优于单独使用上述两种药物,但植     

大鼠纹状体神经元型一氧化氮合酶神经元的分布和超微结构特征

目的 观察大鼠纹状体神经元型一氧化氮合酶(nNOS)免疫阳性神经元的分布以及阳性神经元的超微结构特征.方法 取健康成年SD大鼠,ABC法显示nNOS免疫阳性神经元,包埋前染色方法对阳性细胞进行免疫电镜观察.结果 光镜下,nNOS免疫阳性细胞呈棕褐色,胞体及突起清晰,纹状体外侧区阳性细胞较多,内侧区较少.各区内阳性细胞以中、小型细胞为主,且大多数为中型细胞,小型细胞次之,大型细胞最少.透射电镜观察nNOS阳性神经元核大,胞浆少,呈中间神经元的特征;阳性颗粒呈黑色斑块样,在胞体内,可见小的阳性物质分布于胞核周围或者细胞膜内侧均无膜样结构包裹,大的团块样阳性物质主要存在于胞浆,有清晰的单层膜样结构包裹,亦可见部分无膜样结构包裹的大的阳性物质;在树突和轴突集中的部位亦可见免疫阳性物质,但并不在突起终末的囊泡内;脑组织内微血管壁旁的免疫阳性终末较多见,其突起毗邻血管外膜.结论 大鼠纹状体nNOS免疫阳性神经元以中、小型细胞为主,符合中间神经元的特征,nNOS阳性物质分布于胞质和突起,大块物质多有膜性结构包裹,小块和部分大块阳性物质以及位于轴树突内的无膜性结构包裹,这可能与其功能状态有关.