抗栓肽基因的克隆和表达

抗栓肽(Decorsin)是糖蛋白Ⅱb-Ⅲa(GPⅡb-Ⅲa)的强拮抗剂,能抑制血小板聚集。实验通过设计两对引物,经PCR获得抗栓肽的结构基因,并将基因插入原核表达载体pET32a硫氧还蛋白(TrxA)的下游。将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),进行诱导表达,表达产物以可溶形式存在于胞内,占菌体总蛋白的35%。利用表达载体自身所带的His×6纯化标签,可将融合蛋白通过金属螯合亲和层析柱一步纯化,纯化的蛋白质经SDS-PAGE分析达到电泳纯。体外的抑制血小板聚集实验结果表明,融合蛋白具有显著的抑制ADP诱导的血小板聚集活性,抑制常数IC50为500 nmol/L。     

NDM-1型金属-β-内酰胺酶及其抑制剂研究进展

金属β-内酰胺酶(MBLs)尤其是NDM-1型金属酶介导的细菌耐药性在全球范围内不断扩散,给人类健康带来日益严重的威胁。虽然使用抑制剂阻止酶的水解作用是临床上应对产β-内酰胺酶耐药菌的重要手段,并已成功上市了奥格门汀等药物,但临床所用抑制剂仅对丝氨酸β-内酰胺酶有效,对MBLs尤其是NDM-1没有效果。本综述概述了近年来NDM-1抑制剂的研究进展,介绍了MBLs抑制剂筛选新方法,以期为研究者们提供新的思路,更有效地设计或筛选出活性较好的MBLs抑制剂。     

抗癌新药9—Nitrocamptothecin

由美国Stehlin癌症研究基金会研制,SuperGen和Abbott公司获得转让许可的抗癌新药喜树碱的9-硝基取代物--9-Nitrocamptothecin(商品名为Camptogen,曾用代号9-NC)已完成了研发阶段的Ⅲ期临床实验.     

PAMAM树状大分子与加替沙星相互作用的分子模拟研究

由于其它实验手段各自的局限性,为了解释PAMAM和加替沙星相互作用的机制,在生理条件下,对聚酰胺-胺树状大分子(PAMAM)、加替沙星及其复合物进行了计算机分子模拟研究。通过分子动力学模拟发现:PAMAM与加替沙星相互作用主要以非键作用力为主,其中又以静电力为主要作用力,并且PAMAM对加替沙星无手性识别作用。G2.0～G4.0复合物随着代数的增加,键角弯折能逐步增大,洞内对接值为:165.898<223.442<298.619;洞外对接值为:166.141<206.183<300.666,表明PAMAM外部枝折回增加,有利于形成内部包裹。PAMAM空腔内与加替沙星相互成键,可形成O-H,N-H,F-H等键。随着势能的降低,N代的PAMAM包裹加替沙星呈现出比N-1代PAMAM更稳定的趋势。在分子水平上解释了PAMAM和加替沙星相互作用的机制。     

计算机辅助蔗糖酶结构模拟及其与阿拉伯糖相互作用研究

与阿卡波糖对α-葡萄糖苷酶的竞争性抑制类型不同,L-阿拉伯糖对蔗糖酶的抑制类型为反竞争性抑制,但由于人蔗糖酶结构尚未被实验测定,其抑制的分子机理尚未阐明。文章使用计算机辅助同源模建的方法,以人麦芽糖酶-葡糖淀粉酶(Maltase-glucoamylase)碳端亚基的三级结构为模版,模建了人肠道蔗糖酶的结构,并使用分子对接的方法,将L-阿拉伯糖对接到蔗糖酶的活性中心,建立了蔗糖-阿拉伯糖-蔗糖酶三元复合物的结构模型。模拟了两种可能的三元复合物结构,通过计算结合自由能,推断可能的复合物为酶-抑制剂-底物(E-I-S)类型。当底物蔗糖存在时,阿拉伯糖与蔗糖酶的亲和力增加,从而表现出反竞争抑制效果,。该模型可为深入研究其反竞争性抑制的分子机理提供帮助。     

免疫球蛋白结合结构域的研究进展

Z结构域,又叫免疫球蛋白结合结构域,是由金黄色葡萄球菌蛋白A(Staphylococal Protein A,SPA)中B结构域改构而成。SPA是从金黄色葡萄球菌的细胞壁中发现的能与多种哺乳动物的抗体相结合的天然蛋白,组成SPA的5个结构域中,以B结构域的抗体结合力及稳定性占绝对优势。将B结构域28～29位敏感性残基Asn-Gly定向诱变成为Asn-Ala后,得到的结构域被称为Z结构域,其稳定性更高,可耐受羟铵和溴化氢的处理。首尾相连的两个Z结构域,被命名为ZZ结构域,具有与SPA相类似的抗体结合容量以及更高的稳定性,可以耐受工业纯化中苛刻的环境。ZZ结构域以其独特的反3α螺旋结构、以及特有的抗体结合能力已广泛应用于外源蛋白的可溶表达及免疫检测、抗体纯化等领域。该文将对ZZ与抗体结合的机制研究以及它在各领域的应用研究进行综述。