三氧化二砷注射剂诱导乳癌细胞凋亡

恶性肿瘤的成因与增殖失控,凋亡受阻有关.促进凋亡治疗开创了肿瘤治疗新模式.我国学者最近报道砷剂(主要成分三氧化二砷,As_2O_3)治疗急性早幼粒细胞白血病(APL),无论对初治还复发及难治病例均有明显疗效,并证实As_2O_3可诱导APL细胞凋亡,为促凋亡治疗提供了成功的范例.为了解As_2O_3对乳癌的影响及作用机制,本文观察了三氧化二砷注射剂诱导乳癌细胞凋亡的作用.采用MTT法检测药物半数抑制剂量(IC50),三氧化二砷注射剂处理人乳癌细胞     

大肠癌防治现场研究

大肠癌在我国近几年发病率上升,5年生存率在60%左右,但治疗效果30年来无显著提高.20世纪70年代以来,浙江大学肿瘤研究所课题组负责大肠癌防治"六五"、"七五"、"八五"及"九五"攻关研究,历时二十余年,进行了从现场到实验室,从病因机制到干预阻断的系列研究.     

结直肠癌辅助化疗新进展

结直肠癌辅助化疗的意义　大约70%～80%的结直肠癌可施行根治性切除术,辅助化疗的目的在于消除手术时未被发现的微小转移灶或微小残留灶,以求改善预后,提高生存率.结直肠癌治疗以手术为主加辅助化疗的原则必将彻底改变治疗的结果,延长患者的生存,使患者获得最多的临床益处.     

康莱特注射液对肺癌A549细胞环氧化酶作用的研究

目的:研究康莱特注射液对IL-1β刺激后A549肺癌细胞环氧化酶(COX)表达的抑制作用。方法:用RT-PCR方法检测100~300μL.mL^-1不同含量康莱特注射液作用前后A549肺癌细胞COX-1,COX-2 mRNA表达变化,同时用Western-blot检测COX-2蛋白表达变化。结果:A549细胞在康莱特注射液作用前后COX-1的mRNA表达无明显变化,但COX-2的mRNA和蛋白表达随着药物作用浓度增加而逐渐降低。结论:康莱特注射液能选择性抑制A549肺癌细胞COX-2表达。     

人组织中大肠癌负相关基因ST13的蛋白表达研究

目的原核表达大肠癌负相关基因ST13，制备ST13蛋白单克隆抗体，研究人大肠等组织中表达的ST13蛋白的生物学特性。方法将ST13 ORF克隆至GST融合蛋白表达质粒，原核表达并以Glutathione纯化GST—ST13蛋白，以凝血酶切得到ST13蛋白。以GST-ST13融合蛋白免疫小鼠，以ST13蛋白筛选杂交瘤细胞株，按杂交瘤技术制备ST13蛋白单克隆抗体，并以ST13蛋白亲和层析纯化单抗。以该单抗作Western—blot及免疫组化检测临床标本。结果蛋白表达和纯化以SDS-PAGE证实。融合蛋白表达量占大肠杆菌总蛋白20％，每升培养物回收融合蛋白2．5mg，纯度为91．3％。建立了3个ST13蛋白单抗的杂交瘤细胞株，腹水中单抗的ELISA效价达10^4-10^5，并具有对ST13蛋白的高度特异性。Western—blot证实组织细胞中天然ST13蛋白的SDS—PAGE表观分子量约50KD，比其计算分子量大约10KD，但无糖基化修饰。免疫组化表明该蛋白均匀分布于SW480细胞及大肠上皮细胞浆，计算机分析系亲水性分子。免疫组化还表明该蛋白可表达于大肠、胃及肝等多种组织上皮，但在各种正常组织和肿瘤组织之间，正常组织之间，以及肿瘤组织之间的的着色强度不一。结论原核表达了ST13蛋白，制备了相应的单抗，建立了检测组织标本中ST13蛋白的方法。研究表明人组织ST13蛋白系表观分子量50KD的细胞浆可溶性分子，可表达于大肠等多种上皮组织。ST13蛋白在大肠癌组织呈低表达，在多种正常和肿瘤组织中的表达程度不一。cDNA同源性及蛋白质特性比较表明ST13与Hip(hsp70-interacting protein)为同一蛋白质，提示ST13／Hip经Hsp70等分子伴侣途径而在大肠癌发生发展中起作用。     

转化医学研究对恶性肿瘤转移浸润的探讨

恶性肿瘤治疗失败90％的原因是由于治疗后转移复发。Paget早在1889年就提出了“种子与土壤”的学说：Ewing于1928年又提出了肿瘤转移的“流体动力学”的学术观点：均为肿瘤转移相关的基本理论。分子生物学技术的不断发展和转化医学研究的逐渐深入,为临床研究提供了可供筛检、易致肿瘤转移复发的“种子”——肿瘤干细胞或具干性细胞。近些年对肿瘤细胞产生的外排囊泡（tumor derived exosome）的研究,提出了形成前转移壁龛（premetastatic niche）及转移的趋向性的概念。建立了识别这类外排囊泡的方法,均为临床筛检、临床预测与个体诊治提供了可行的手段,并已有临床的报道,是转化医学研究领域进一步干预阻断肿瘤复发转移的新课题。     

结直肠癌患者外周血中癌胚抗原-mRNA的表达及其临床意义

目的：肿瘤复发转移仍是威胁患者生存的重要原因，及早检出外周血中的循环肿瘤细胞并进行有效的综合治疗有着重要的临床意义。检测结“直肠癌患者外周血中癌胚抗原（CEA）－mRNA的表达及血清CEA蛋白的含量，并分析其临床价值。方法：35例有明确临床肿瘤病灶存在的结直肠癌患者、9例根治术后患者和37例健康志愿者，分别以逆转录PCR（RT－PCR）检测其外周血中CEA－mRNA的表达，时间分辨荧光方法测定其血清CEA蛋白的含量。结果：35例结直肠癌患者CEA－mRNA阳性率为45．7％，而健康对照组阳性率为2．7％，两者比较差异有显著性（P＜0．05）；9例术后患者CEA－mRNA仅2例阳性；CEA－mRNA阳性表达率与肿瘤分期相关，与肿瘤细胞分化程度并不相关。CEA－mRNA阳性组血清CEA蛋白阳性率（72．2％）显著高于CEA－mRNA阴性组（42．3％）。结论：外周血细胞中CEA－mRNA的表达与肿瘤分期相关，有可能作为结直肠癌微转换的一个监测指标。长期的随访有助于评价其临床价值。     

结直肠癌组织cripto基因mRNA水平及临床意义

目的检测cripto基因mRNA在结直肠癌及其癌旁组织中mRNA表达情况，并探讨其在结直肠癌发生发展中的意义。方法提取36例人大肠癌及癌旁正常组织中总mRNA，采用实时荧光定量PCR法检测其中cripto mRNA表达情况；并分析其表达与患者淋巴结转移、肿瘤分化程度和Dukes’s分期相关性。结果cripto mRNA表达在大肠癌组织中阳性表达率为86．1％（31／36），而正常肠组织未见cripto mRNA表达，统计学差异显著（P〈0．0001）。criptomRNA表达与浆膜侵袭、淋巴结转移和Duke’s分期密切相关（P〈0．05，P〈0．05，P〉0．05），而与患者肿瘤发生部位和分化程度无关（P〉0．05，P〉0．05）。结论cripto基因在结直肠癌组织中高表达，可能与大肠侵袭痈转移有关。     

乳头溢液脱落细胞端粒酶活性检测

目的探讨乳头溢液脱落细胞端粒酶活性检测在临床诊断中的应用。方法采用ＴＲＡＰ－ＰＣＲ银染定性法及ＴＲＡＰ－ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ定量法对５０例溢乳进行脱落细胞端粒酶活性分析。结果５０例溢乳脱落细胞端粒酶阳性率高达７８％（３９／５０）,随着年龄的增大,端粒酶阳性率呈逐步下降趋势,而同期送检的细胞病理诊断则无１例找到癌细胞。结论溢乳脱落细胞端粒酶阳性检出率明显增高。随着疾病的发展,端粒酶阳性患者易发生恶变的可能性是否大于端粒酶阴性患者需进一步研究。     

人肠癌RKO细胞周期依赖性激抑制因子基因启动子区甲基化状态的研究

目的 探讨人结肠癌RKO细胞周期依赖性激酶抑制因子(CKIs)家族启动子区CpG岛甲基化状态及其甲基化可逆性特征.方法 应用特异性DNA甲基转移酶(DNMTs)抑制剂5-Aza-2]-deoxycytidine(5-Aza-CdR)处理肠癌细胞,甲基特异性聚合酶链反应(Methylation-Specific PCR,MSP)、T-A克隆及DNA测序法分析RKO细胞CKIs家族抑癌基因p15ink4b、p16ink4a/CDKN2、p21/cip、p27/kip启动子CpG岛甲基化状态.结果 未经5-Aza-CdR作用的肠癌RKO细胞,其p15ink4b、p16ink4a/CDKN2基因组DNA胞嘧啶(C)保持不变,这提示在其单链DNA中胞嘧啶呈甲基化状态;而经5-Aza-CdR作用的肠癌RKO细胞,其p15ink4b、p16ink4a/CDKN2、p21/cip和p27/kip基因组DNA胞嘧啶均已变为胸腺嘧啶,表明在DNA单链中胞嘧啶已呈去甲基化状态.结论 肠癌RKO细胞周期INK4家族(p15ink4b和p16ink4a/CDKN2)基因的启动子区处于异常的高甲基化状态,而KIP/CIP家族(p21/cip和p27/kip)基因未处于高甲基化状态;5-Aza-CdR能较好地逆转肿瘤细胞INK4家族基因DNA高甲基化状态.