ARCHITECT i2000免疫分析仪糖类抗原CA-15-3分析性能验证

目的使用ARCHITECT i2000型免疫分析仪对糖类抗原CA-15-3(CA153)进行性能验证。方法根据NCCLS-EP5文件要求进行重复性试验、根据NCCLS-EP9文件要求进行灵敏度验证、根据NCCLS-EP7文件要求进行回收试验、根据NCCLS-EP6文件要求进行干扰试验,并对其可报告范围进行评估。结果CA153的批内、批间变异系数均小于5%,回收率在97%~103%之间,检测低限达到0.5 U/mL,脂浊、溶血、黄疸对测定结果的影响度均小于3.0%,其可报告范围为0~800 U/mL。结论ARCHITECT i2000型化学发光微粒子免疫分析仪对CA153的分析性能及重复性、灵敏度、准确度以及可报告范围与其说明书提供之性能相符合。     

聚乙二醇重组人粒细胞集落刺激因子对猕猴辐射致粒细胞减少症的治疗作用

目的研究聚乙二醇重组人粒细胞集落刺激因子(PEG-rhGCSF)对猕猴辐射致粒细胞减少症的治疗作用。方法正常雄性猕猴全身一次性双侧照射60Coγ3.0 Gy,24 h后一次性sc给予PEG-rhGCSF 30,100和300μg·kg-1,及连续10 d rhGCSF 10μg·kg-1。检测50 d内的外周血象和骨髓造血细胞的情况。结果猕猴接受照射后,外周血白细胞及绝对中性粒细胞(ANC)迅速下降,造成粒细胞减少症。给药后1 d,PEG-rhGCSF治疗组均出现一过性ANC动员峰,且峰值与剂量呈正相关。PEG-rhGCSF可延缓ANC达谷时间且可以提高谷水平。与照射模型组的(7.2±2.5)d相比,PEG-rhGCSF 30,100和300μg·kg-1组抗生素需求天数3.2±2.9,1.4±1.9和(0.2±0.4)d明显缩短(P<0.05);与rhGCSF组粒细胞减少症持续时间(28±7)d相比,PEG-rhGCSF 100和300μg·kg-1组分别为(19±14)d与(7±6)d显著缩短(P<0.01)。连续注射rhGCSF 10 d与单次注射PEG-rhGCSF的药效作用相当。结论 PEG-rhGCSF对猕猴辐射致粒细胞减少症有明显治疗作用,可促进骨髓粒系增殖、分化成熟以及释放,恢复造血功能。治疗作用呈良好量效关系,与rhGCSF相比具有明显长效作用。     

儿科医务人员输液认知及输液限制管理的影响因素研究

目的:调查儿科医务人员输液知识储备情况,分析影响儿童门诊输液限制管理开展的因素,为提升儿童输液安全、减少不合理输液的发生提供建议。方法:采用多阶段分层整群抽样,以云南省为例对儿科医务人员进行输液知识及门诊输液限制管理影响因素的问卷调查。结果:共收到319份问卷,医务人员静脉输液知识平均得分为(13.70±3.09),不同年龄、职称、工作类别及月总收入医务人员间得分有统计学差异(P <0.05);在输液限制影响因素中,患者及家属因素得分最高,医院发展得分最低。结论:受访医务人员对输液知识了解程度总体较好,能清楚判断常见输液指征,但对感冒和炎症等指征的判断比较模糊,医疗机构还需进一步加强对医务人员的培训;同时应加强有效的医患沟通和宣传力度,结合相关疾病与政策因素,探索适宜的儿童门诊输液限制管理措施,减少不合理用药现象的发生。     

重酒石酸长春瑞滨脂质体包封率测定方法比较

目的制备重酒石酸长春瑞滨脂质体,比较葡聚糖凝胶微柱离心法和阳离子交换树脂离心法测定重酒石酸长春瑞滨脂质体包封率的差异。方法pH梯度法制备重酒石酸长春瑞滨脂质体,分别以葡聚糖凝胶Sephadex G-50和阳离子交换树脂装柱,离心分离脂质体和游离药物,采用HPLC法测定药物含量,计算包封率,并用SPSS软件进行t检验。结果两种方法测定不同载药量的脂质体包封率结果均无显著性差异(P>0.05)。结论葡聚糖凝胶微柱离心法和阳离子交换树脂离心法均可用来测定重酒石酸长春瑞滨脂质体包封率,优选阳离子交换树脂离心法。     

凤冈富锌硒茶对ERp57 蛋白酶的抑制作用及其有效成分的虚拟筛选

目的 探讨凤冈富锌硒茶水提取物对抗血小板聚集的潜在药物靶点ERp57 蛋白酶的抑制作用及 其潜在的有效成分。方法 利用超高效液相色谱分析凤冈富锌硒茶水提取物的主要成分,采用胰岛素浑浊度 分析方法检测提取物对ERp57 蛋白酶的抑制作用,采用体外血小板聚集率实验分析提取物对血小板聚集的干 预作用。采用计算机虚拟筛选和实验验证相结合的方法,分析提取物中抑制ERp57 蛋白酶的主要活性成分。 结果 凤冈富锌硒茶水提取物主要存在4 种化合物,提取物对ERp57 蛋白酶有显著的抑制作用,且表现出一 定程度的抗血小板聚集作用,其中表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对ERp57 蛋白酶的抑制作用最强。 结论 长期饮用绿茶有益于降低心血管疾病死亡率,可能与绿茶抑制ERp57 蛋白酶活性,从而抗血小板聚集 有关,其中EGCG 是其主要有效成分之一。     

MRI多参数分析在乳腺良、恶性病变诊断中的应用

目的 探讨MRI多参数分析在乳腺良、恶性病变诊断中的应用.方法 对44例乳腺疾病患者均行双乳T1WI、T2WI压脂扫描以及弥散加权成像(DWI)扫描.采用乳腺容积成像序列进行动态增强扫描.使用Functool软件进行表观弥散系数(ADC值)的测量、建立时间-信号强度增强曲线及计算出最大信号增加斜率(MSI).结果 44例患者中,恶性25例,良性19例.其分叶及毛刺的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值以及准确度为62.5%～80.0%.时间-信号强度增强曲线显示: Ⅰ型曲线(平台型)17例,均为良性.Ⅲ型曲线(速升速降型)18例,均为恶性;其阳性预测值为100.0%,准确度为100.0%.Ⅱ型曲线(平台型或速升速降型)9例,其中良性2例,恶性7例.ADC值的敏感性为88.0%、特异性为84.2%、阳性预测值为88.0%、阴性预测值为84.2%、准确度为88.0%,各项指标均较高.MSI的敏感性为100.0%、特异性为100.0%、阳性预测值为100.0%、阴性预测值为90.5%、准确度为100.0%.结论 乳腺疾病的MRI检查主要以形态学及动态增强后强化程度与方式评价为基础.时间-信号增强曲线、DWI及ADC值等对乳腺良、恶性病变的诊断有重要价值.     

紫外线照射充氧自血回输治疗体内自由基与抗自由基系统的变化

本文对163例脑血管、肺心病经过紫外线照射充氧自血回输疗法(UIB)治疗后,体内O_2~-及SOD活性增高LPO降低.说明ULB能调节体内自由基平衡、增强体内氧化还原,致使SOD诱导合成增高.为探讨其作用机理,又对UIB处理后的血液作各种浓度稀释在试管内产生O_2~-的实验.结果其O_2~-的量并不因稀释倍数增加而降低,提示使O_2~-增加主要是充氧自血回输体内后的直接作用.随O_2~-量的增加,反馈激活体内抗氧化酶系统,使体内SOD活性诱导力提高,使机体得到新的平衡,达到治疗疾病的作用.     

从活血化瘀中药中虚拟筛选P2Y12受体拮抗剂及其抗血小板聚集作用的评价

目的建立从活血化瘀中药中虚拟筛选P2Y12受体拮抗剂的模型,并验证候选化合物抗血小板聚集的药理活性。方法根据《中国药典》中的活血化瘀药种类,找出了32种具有抗血栓作用的中药,建立中药成分的虚拟化合物库,以P2Y12受体为靶标蛋白进行虚拟筛选,获得结合自由能最低的化合物,然后进行体外抗血小板凝集实验以验证其活性。结果通过虚拟筛选,得到了结合自由能最低的化合物紫丁香苷,计算其结合自由能力为-14.3 kcal/mol。进一步的实验验证结果表明,该化合物有显著的抗二磷酸腺苷(ADP)诱导的血小板凝集作用。结论从32种活血化瘀的中药中,基于P2Y12受体三维蛋白结构,利用虚拟筛选的方法,筛选出紫丁香苷对ADP诱导的血小板聚集有显著的抑制作用,该模型可用来后续的进一步虚拟筛选P2Y12受体拮抗剂。     

人源LL-37杀菌多肽的改建及原核细胞中表达

目的改良人源杀菌肽LL-37的氨基酸序列,提高其杀菌力,并在原核细菌中表达.方法应用蛋白质分析软件(Anthepro 5.0、SWISS-MODEL等),对人源杀菌肽LL-37的氨基酸序列进行二维、三维结构及理化特性分析,将其中部分氨基酸残基进行替换,提高其正电荷,并以人源杀菌肽LL-37的基因序列为模板,进行相应的DNA序列替换,转入表达载体pET-28a( )于杆菌BL21(DE3)中表达、纯化,并初步研究其抗菌性.结果在维持LL-37空间构象不变的基础上,将Glu16、Asp26、Glu36分别替换为Gln16、Asn26、Gln36,其静电荷由pH 7.4时的 5.8提高到 9.0,并且其多肽N端疏水、C端亲水的特性不变.通过Touch-Down PCR法,成功获得改良LL-37多肽的DNA序列,并将重组质粒pET-28a( )-rLL-37在杆菌BL21(DE3)中表达,改良LL-37多肽成功由强离子交换柱芯Macro-Prep High S纯化,并对G 、G-菌具有一定的抗菌力.结论将杀菌肽LL-37多肽进行氨基酸残基替换并以原核细胞进行融合型表达是可行的,为改良LL-37的大量制备及杀菌活性研究奠定了基础.     

改良人源LL-37杀菌肽的融合表达及其杀菌活性

目的:将改良LL-37多肽以融合肽形式表达、纯化,并初步研究其杀菌活性. 方法:将编码改良的LL-37多肽的DNA序列放入载体pET-30a( ),转入工程菌BL21 star(DE3)中,用IPTG诱导表达得到含6×His标记的改良融合蛋白LL-37. 再以TALON柱芯亲和层析、SDS-PAGE和Western blot鉴定后,用FXa裂解融合肽. 将裂解后多肽进一步用强阳离子交换柱Macro-Prep High S纯化、收集各洗脱峰, 脱盐、冻干. 采用抑菌圈法检测改良LL-37的抗菌活性. 结果:改良的LL-37多肽于载体pET-30a( )在杆菌BL21 star(DE3)中高效融合表达,用凝胶扫描显示融合蛋白的表达量约占全菌蛋白的35%. 融合蛋白经纯化后用SDS-PAGE鉴定在Mr 4000处见单一条带. 经抑菌圈法检测改良的LL-37多肽对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌都具有很好的杀菌力. 结论:改良的人源性LL-37多肽以原核细胞进行融合表达是可行的,并具有较强的杀菌活性.