树突状细胞和动脉粥样硬化免疫炎症反应

树突状细胞(dendritic cell，DC)是目前已知的功能最强大的专职抗原提呈细胞(antigen presentation cell，APC)，也是目前发现的唯一能激活初始型T细胞的APC，通过第二信号或共刺激信号促进T淋巴细胞增殖并使其发挥效应细胞作用，是机体免疫反应的始动者，在免疫反应中起重要作用。近年来炎症和免疫反应在动脉粥样硬化(AS)病理发生及斑块稳定性的作用日益受到重视。研究发现，DC也存在于动脉壁中，并且在AS斑块中明显增加，尤其在炎症浸润区域与T淋巴细胞聚集在一起；多种公认的致AS危险因素都可促使DC免疫功能成熟，提示DC在AS的发生发展中可能起着重要作用。     

STAT4基因敲除通过miR-9促进泡沫细胞形成及动脉粥样硬化

目的探究动脉粥样硬化斑块发生发展过程中信号转导与转录激活因子4(STAT4)信号通路在巨噬细胞分化及泡沫细胞形成中的作用及调控机制。方法将STAT4基因敲除(STAT4~(-/-))小鼠与载脂蛋白E基因敲除(ApoE~(-/-))小鼠进行杂交,筛选出ApoE/STAT4纯合子双基因敲除(DKO)小鼠,研究新型动脉粥样硬化相关小鼠模型的易感性和机制。将3月龄小鼠分为野生型(WT)、STAT4~(-/-)、ApoE~(-/-)、DKO共4组,经过12周高脂胆固醇饮食喂养,分别采用油红O染色及石蜡切片HE/Masson染色检测主动脉斑块形成情况。采用流式细胞术分析小鼠外周血、骨髓及脾脏髓系细胞各亚群比例。从小鼠骨髓分离CD11b~+髓系细胞进行体外培养,采用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)进行诱导,流式分析巨噬细胞不同亚型分化情况。采用实时定量聚合酶链反应(PCR)及Western blot分别检测基因表达水平及蛋白水平。结果 ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块局部的CD11b~+细胞中可检测到STAT4表达。ApoE~(-/-)及DKO小鼠经12周高脂喂养,油红O染色阳性的主动脉斑块主要分布在主动脉根部至髂动脉分叉处,DKO小鼠的斑块较ApoE~(-/-)小鼠明显增多;HE及Masson染色显示DKO小鼠的主动脉斑块较ApoE~(-/-)小鼠具有更薄的纤维帽及更大的脂质核心,且斑块中的纤维更稀疏,排列也相对更紊乱。体外细胞实验显示STAT4基因敲除可促进CD11b~+Gr-1~+未成熟髓系细胞的异常动员、巨噬细胞的M1极化以及泡沫化。STAT4基因缺失通过磷酸肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)/核因子κB(NF-κB)通路下调miR-9的表达,上调酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶(ACAT-1)表达,进而促进巨噬细胞的脂质蓄积及泡沫细胞形成,最终加速动脉粥样硬化斑块的发生发展。结论 STAT4通过调控免疫炎症反应及脂质代谢,在巨噬细胞分化及泡沫细胞形成过程中发挥关键作用。STAT4相关信号通路可作为未来动脉粥样硬化性疾病的潜在治疗靶点。     

参芎葡萄糖注射液对缺血再灌注损伤心肌的保护作用

目的探讨参芎葡萄糖注射液对小鼠急性心肌缺血再灌注（I／R）损伤的保护作用及可能的分子机制。方法建立急性心肌缺血再灌注（Ischemia-Reperfusion,I／R）损伤的小鼠模型,将野生型小鼠（C57BL／6）随机分为3组,假手术组（Sham）,缺血再灌注＋生理盐水组（Vehicle）,缺血再灌注＋参芎葡萄糖注射液预处理组（20mL／kg,SL）,术前2小时给予腹腔注射生理盐水或参芎葡萄糖注射液,于缺血再灌注后不同时间点,通过心脏超声观察各组小鼠心功能的变化,心肌组织TTC染色确定心梗面积大小,脱氧核糖核苷酸末端转移酶法（TUNEL）检测凋亡心肌,蛋白免疫印迹法（WesternBlot）及酶联免疫吸附法（ELISA）分别检测心肌组织以及血清炎症因子肿瘤坏死因子（TNF-α）表达水平变化。结果I／R手术48小时后,与假手术组相比,左室射血分数（LVEF）明显降低（P〈0．01）。参芎葡萄糖注射液预处理明显改善I／R组的LVEF,并降低了心肌梗死面积,抑制I／R引起的心肌细胞凋亡和组织炎症反应。进一步的研究表明,参芎葡萄糖注射液预处理明显抑制了I／R后心肌组织以及血清中TNF-α表达水平升高（P〈0．01）。结论参芎葡萄糖注射液预处理通过抑制TNF-α表达水平发挥对缺血再灌注（I／R）损伤心肌的保护作用。     

ALDH2基因多态性与稳定型心绞痛患者硝酸甘油有效性关联的实验研究

目的选取临床存在稳定型心绞痛发作史的冠心病患者,观察其乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因多态性与稳定型心绞痛发作时单独舌下含服硝酸甘油有效与否的关联。方法纳入临床经冠脉造影确诊为冠心病(主要冠脉狭窄≥50%)并有稳定型心绞痛发作史及稳定型心绞痛发作时单独舌下含服过硝酸甘油的患者共113人,分为有效组(A组)87人、无效组(B组)26人,有效组进一步分为迅速起效组(A1组)69人及缓慢起效组(A2组)18人。由多聚酶链式反应PCR及反向直接测序方法获得ALDH2基因第12号外显子504位点多态性。结果ALDH2基因在第12号外显子504位点存在G(谷氨酸)/A(赖氨酸)基因多态。具有完全ALDH活性的野生型基因G/G型及完全丧失酶活性的突变型基因A/A型所占比例在有效组(A组)与无效组(B组)之间均无显著性差异(74.713%vs.61.538%,P0.05;6.897%vs.11.538%,P0.05);有效组A组中,基因型G/G型及A/A型所占比例在迅速起效组(A1组)及缓慢起效组(A2组)之间均无显著性差异(73.913%vs.77.778%,P0.05;4.348%vs.16.667%,P0.05);在迅速起效组(A1组)及无效组(B组)之间,基因型G/G型及A/A型所占比例亦均无显著性差异(73.913%vs.61.538%;P0.05;4.348%vs.11.538%,P0.05)。结论ALDH2基因第12号外显子504位点基因多态性与冠心病患者稳定型心绞痛急性发作时单独舌下含服硝酸甘油有效与否无关联。     

大鼠血清高密度脂蛋白对动脉粥样硬化的抵抗作用

目的探讨大鼠血清高密度脂蛋白(HDL)对动脉粥样硬化(AS)的抵抗作用及可能机制。方法将24只体质量在200 g左右的SD大鼠随机分为实验组和对照组,每组各12只,均行胸腹主动脉球囊血管成形术,实验组术前1周开始给予高脂喂养。取术前1周、术后2周和6周大鼠静脉血做血脂检测,行胸主动脉组织形态学分析,行免疫组化染色检测三磷酸腺苷结合盒转运子A1(ABCA1)的表达。结果 (1)实验组高脂喂养后血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)显著增高,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)轻度升高,HDL-C/LDL-C比值由高脂喂养前的(6.21±0.87)降至术后2周的(0.70±0.25)和术后6周的(0.30±0.05),呈时间依赖性下降(均为P0.05)。(2)术后2周,两组均可见胸主动脉内弹力板断裂,新生内膜形成,实验组见内膜脂质沉积,但未见脂质斑块形成;术后6周,实验组可见新生内膜增厚明显,并粥样斑块形成,内膜/中膜面积百分比和管腔面积狭窄率均大于对照组,但差异无统计学意义(11.85%±4.86%比9.13%±7.66%,3.39%±1.50%比2.59%±2.12%,均为P0.05)。(3)双因素相关分析,内膜/中膜面积百分比和管腔面积狭窄率与HDL-C/LDL-C比值均呈负相关。(4)实验组术后2周和6周血管内膜及中膜ABCA1表达水平均高于对照组[2周:(50.5±3.1)比(38.8±2.5);6周:(35.6±2.8)比(20.4±5.1),P均0.05]。结论大鼠具有很高的血清HDL储备能力,在一定时间内,具有抵御高LDL-C致AS的作用,其机制可能与血清高HDL水平促进ABCA1表达,增强血管壁泡沫细胞胆固醇逆转运和延缓粥样斑块形成有关。     

热休克因子1在动脉粥样硬化中的作用

动脉粥样硬化被认为是一种慢性炎症、自身免疫性疾病。热休克因子1（HSF1）在多个组织器官中均有表达,是哺乳动物中调节热休克反应最重要的转录因子,参与调节热休克反应、诱导热休克蛋白（HSPs）的表达。它具有多种生物学功能,不仅能抗炎、抗凋亡、保护缺血心肌细胞、抑制心肌纤维化、参与生长发育过程;而且与动脉粥样硬化亦有紧密关系。该文就HSF1在动脉粥样硬化发生、发展过程中的作用作一综述。     

硝酸甘油对大鼠缺氧心肌细胞乙醛脱氢酶2 表达的影响

目的 探讨硝酸甘油(GTN)对大鼠缺氧心肌细胞凋亡的影响及其相关机制,为阐明长期使用GTN导致心脏不良事件的发病机制提供依据.方法 利用心肌细胞缺氧模型,将缺氧的正常细胞作为对照组,测定GTN作用1～3 d时心肌细胞的凋亡率以及乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因和蛋白的表达.结果 ①1、10、100μmol/L的GTN作用1 d的心肌细胞凋亡均显著少于对照组(P值均＜0.05),作用2、3 d的细胞凋亡数均显著高于作用1 d时(P值均＜0.05).由此确定GTN的作用浓度是1μmol/L,作用时间是2 d.②不同浓度GTN作用1～3 d,ALDH2基因表达与心肌细胞凋亡率呈负相关(r=-0.658,P=0.028).③1μmol/LGTN作用2 d时的ALDH2蛋白表达为1.35±0.16,显著低于对照组的1.66±0.22(P＜0.05);作用2、3 d时的ALDH2蛋白表达分别为1.35±0.16和0.33±0.27,均较作用1 d时显著下降(P值均＜0.05).结论 ①GTN作用不同时间所起的作用不同:作用1 d,为心肌保护作用;作用2～3 d能引起心肌细胞凋亡增加,缺乏心肌保护作用.②GTN使用后ALDH2基因表达变化与心肌细胞凋亡呈负相关,可能与ALDH2对缺氧心肌细胞有保护作用有关.③GTN作用2～3 d时缺氧心肌细胞ALDH2 mRNA和蛋白水平下调,可能与ALDH2消耗有关.     

冠心病患者血清瘦素水平与血小板聚集功能的相关性

目的:探讨冠心病(CHD)患者血清瘦素水平与血小板聚集功能的关系。方法:选择36例CHD患者及28例性别、年龄、体质指数、腰臀比、空腹血糖及血脂等指标相匹配的对照者,检测血清瘦素水平及血小板最大聚集率。结果:CHD组患者瘦素水平及血小板最大聚集率均高于对照组,胰岛素敏感指数低于对照组,均差异有统计学意义(均P<0.05)。偏相关分析发现CHD组血清瘦素水平与血小板聚集率呈正相关(r=0.523,P<0.05)。结论:血清瘦素与CHD关系密切,瘦素可能通过增强血小板聚集功能参与CHD的形成及发展。     

促红细胞生成素促心肌细胞肥大的实验研究

目的观察促红细胞生成素（Erythropoietin,Epo）对离体乳鼠心肌细胞肥大形态学及分子生物学表现的影响。方法（1）新生大鼠原代心肌细胞分为空白对照、AngⅡ1×10^-6M和Epo10U／ml干预组,取24h、48h和72h三个时间点固定细胞,cTnI免疫组化染色,比较各组细胞面积;（2）RT．PCR法检测比较空白对照和Epo10U／ml干预30min c-los mRNA和2hANP和BNPmRNA表达;（3）Western blot检测Epo10U／ml刺激p-ERK表达的时间变化。4）Western blot检测不同浓度Epo刺激p-ERK表达的差异。结果（1）AngⅡ和Epo刺激均使心肌细胞面积增大（P〈0．05,24h、48h和72h,AngII组VSCon组;P〈0．05,48h和72h,Epo组VSCon组）;（2）Epol0U／ml干预组心肌细胞30minc．fosmRNA表达量与对照组相比差异不明显,2hANP mRNA和BNP mRNA表达量和对照组相比,明显升高（P〈0．05）;（3）Western blot结果显示,Epo干预心肌细胞后P—ERK2表达随时间出现先升高后下降的变化,30min时达到高峰,与干预前和干预后120min差别具有统计学意义（P〈0．05,30minVS0,120min）;（4）随Epo干预浓度增大,P-ERK2表达水平升高（P〈0．05,Epo10U／ml和Epo100U／ml组VS Con组）。Epo刺激p-ERKl表达也出现相同的时间浓度趋势,但各组差别无统计学意义。结论Epo刺激可使心肌细胞表面积增大,促进肥大基因ANP-BNP mRNA表达的升高,并刺激p-ERK出现时间相关性和浓度依赖性表达。     

G-CSF对高脂喂养兔不同动脉段内皮的影响

目的 通过高脂喂养兔制造动脉粥样硬化动物模型,研究G-CSF对不同动脉段内皮形态和功能变化的影响及相互关系.方法 30只新西兰成年雄兔随机分4组,分为对照组6只,高脂喂养组、普通及高脂喂养+G-CSF组各8只,分别测定血脂及血清NO浓度,各取胸主动脉、颈总动脉、股动脉,采用病理分析及扫描电镜观察内皮形态的不同变化,同时用RT-PCR方法测定eNOS、ET-1基因的表达了解不同动脉段的内皮功能变化.结果 高脂喂养后兔血脂、NO浓度明显升高,病理发现动脉内膜增厚,以大动脉最著,小动脉最次,扫描电镜下内皮细胞的凋亡、变形亦然.ET-1基因表达相对定量次序为胸主动脉>颈总动脉>股动脉,eNOS基因反之.应用G-CSF后大动脉内皮功能及形态受到明显影响,但小型动脉变化不大.结论 高脂喂养兔能成功制造动脉粥样硬化模型,成模后动脉内皮功能显著受损,其中以大型动脉显著,同时内皮形态出现相应变化.应用G-CSF对全身动脉系统有影响,且动脉越小,影响越小,说明粥样硬化动脉内皮形态与功能改变之间存在必然联系,对G-CSF的反应也不同.