细胞磁共振成像不能区分磁标细胞的存活状态

目的探讨不同状态下磁标记间充质干细胞(MSCs)的体内外磁共振(MR)成像特点,明确MR对细胞存活状态是否有鉴别诊断价值。方法分离培养猪骨髓MSCs,用超顺磁性铁纳米颗粒(SPIO)标记细胞24h。对未标记MSCs、存活的SPIO-MSCs、死亡的SPIO-MSCs、单纯SPIO进行体外凝胶内1.5TMR成像;开胸结扎前降支建立猪心肌梗死模型,于梗死交界区心肌内直接注射未标记MSCs、存活的SPIO-MSCs、死亡的SPIO-MSCs和单纯SPIO,然后进行体内T2*WI-flash序列MR成像。结果存活的SPIO-MSCs、死亡的SPIO-MSCs和单纯SPIO在体内外T2*WI-flash序列MR图像上均显示为低信号区,单凭图像无法区分。结论细胞MR成像无法区分组织磁标细胞、游离铁和含铁病变,因此对长期细胞示踪结果的解读应该慎重。     

黄芪甲甙改善扩张型心肌病小鼠左室重构与磷酸化p-38MAPK相关性的实验研究

目的：探讨黄芪甲甙对柯萨奇病毒B3（CVB3）扩张型心肌病(DCM)小鼠左室重构的影响及其可能的作用机制。方法:BALB/c小鼠腹腔无菌重复增量接种CVB3建立扩张型心肌病动物模型（n＝30）；感染CVB3 的小鼠以黄芪甲甙（0.6 mg·kg-1·d-1）灌胃作为扩张型心肌病＋黄芪甲甙治疗组（n＝20）；同期腹腔无菌注射等容积不含病毒的EMEM液作为正常对照组（n＝10）。用高频超声心动图测量左室大小及心功能指数，用ELISA技术检测血清I、III型前胶原端肽（PINP、PICP及PIIINP）浓度并计算PICP/PICN比值，苦味酸天狼猩红胶原特异染色和偏光显微镜显像，并辅以图像分析软件计算心肌胶原容积积分（CVF）和I型胶原的含量，分别应用RT-PCR和Western blotting技术检测心肌组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原变化和磷酸化p38MAPK的表达。结果:黄芪甲甙显著提高DCM小鼠的生存率、有效地降低扩大的左室内径及增加心脏功能；组织学和血清学显示DCM小鼠心肌组织胶原沉积明显多于正常对照组，而这种增多的趋势可被黄芪甲甙明显抑制 (P<0.01)；DCM小鼠心肌磷酸化p38MAPK表达高于正常对照组，黄芪甲甙治疗后p38MAPK活性明显低于正常对照组（分别为P<0.01和P<0.05）。结论:黄芪甲甙改善CVB3感染后导致的扩张型心肌病左室重构可能与降低磷酸化p38MAPK活动密切相关。     

老年大鼠心肌线粒体的比较蛋白质组学研究

目的:筛查心肌线粒体中与衰老相关的蛋白质。 方法：分离成年组（10周）和老年组（12月）雄性SD大鼠心肌线粒体，抽提心肌线粒体蛋白质行双向凝胶电泳，应用MALDI-TOF-MS和数据库搜索鉴定图像分析出的差异蛋白点，同时进行了心肌组织ATP含量的检测。 结果:图像分析示84个心肌线粒体蛋白表达发生改变，质谱鉴定了15个差异点。老年组肌酸激酶、硫氧还原蛋白过氧化物酶2、Tu翻译延长因子、异柠檬酸脱氢酶4个蛋白表达上调，琥珀酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶、乌头酸水合酶、NADH脱氢酶、ATP合酶H+转运装置、ATP合酶β链、热休克蛋白60、葡萄糖调节蛋白78、prohibitin、乙醛脱氢酶2、电压依赖型阴离子通道11个蛋白表达下调。老年组心肌组织ATP含量下降(P<0.01)。 结论:通过具有高度分辨率和高度重复性的双向凝胶电泳图谱鉴定了SD大鼠心肌线粒体中在老年组差异表达的蛋白质，这些差异蛋白为深入理解衰老的分子机制提供了有益的线索，差异蛋白的功能留待以后进一步研究。     

组织蛋白酶S基因启动子区-25G／A多态不是中国人群中冠心病的预测因子

目的这项研究的目的旨在观察中国人群中，组织蛋白酶S（CTSS）基因-25G／A多态分布及其多态性与冠心病（CAD）危险性之间的关联。方法CTSS基因-25G／A多态性由多聚酶链式反应PCR及限制性内切酶降解方法获得。经冠脉造影检查明确的共659名冠心病患者（冠脉狭窄≥50％）及352名非冠心病患者（对照组）纳入这项研究。结果所有研究对象中的等位基因G和A的频率分别为0．630及0．370。在病例组及对照组之间未发现其CTSS-25G／A多态性频率（G：0．626vs．0．633，P〉0．05；A：0．374vs．0．367，P〉0．05）及基因型分布（G：83．4VS．85．3，P〉0．05；A：58．0vs．58．5，P〉0．05）存在显著性差异。使用逻辑回归对其他危险因素校正后，CTSS基因型与冠脉狭窄严重程度之间亦未发现存在关联（P〉0．05）。结论在中国人群中，基因型AA较基因型GG和GA更为少见。对照组及冠心病组之间的等位基因频率及基因型分布均无显著性差异。CTSS-25G／A多态性与冠状动脉狭窄的发生率及严重程度不相关。     

氯沙坦对压力超负荷小鼠心肌肥厚和高迁移率族蛋白B1表达的影响

目的探讨氯沙坦对压力超负荷小鼠心肌肥厚和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达的影响及机制。方法采用主动脉弓缩窄(TAC)方法建立压力超负荷小鼠心肌肥厚模型,并将小鼠随机分为假手术组、TAC+生理盐水组、TAC+氯沙坦组。术后2周行心脏超声检测并分析心肌组织学变化。同时,检测小鼠血清和心肌组织中HMGB1基因和蛋白表达水平,并检测心肌组织中细胞外信号调节激酶(ERK1/2)、P38和核转录因子(NF-κB)的表达及活化水平。结果TAC小鼠术后2周出现心肌肥厚,且氯沙坦可有效改善由TAC导致的左心室室壁增厚(P<0.05)。同时,TAC不仅升高小鼠血清HMGB1水平(P<0.05),还增加心肌HMGB1 mRNA和蛋白表达(P<0.05),而这些变化都可以被氯沙坦部分抑制(P<0.05)。此外,TAC导致心肌组织中p-ERK1/2、p-P38、p-NF-κB水平明显升高(P<0.05),且同样可以被氯沙坦部分抑制(P<0.05)。结论氯沙坦在改善压力超负荷所致心肌肥厚时伴随HMGB1表达减少,该作用可能与其阻断丝裂原活化蛋白激酶家族(MAPKs)及NF-κB信号通路有关。     

载脂蛋白A1对胆固醇逆转运及三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达的影响

目的 观察载脂蛋白A1(apoAl)对人急性单核细胞白血病细胞株(THP-1)源性泡沫细胞内胆固醇、胆固醇酯含量和三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1(ABCAl)表达的影响和机制.方法 以50 ng/ml的佛波酯诱导人THP-1,使其分化为巨噬细胞,再经50μg/ml氧化型低密度脂蛋白充分诱导使其转变为负脂的泡沫细胞;然后用不同浓度apoAl(5μg/ml、10μg/ml、15μg/ml、20 μg/ml)孵育泡沫细胞24 h,以apoAl(10μg/ml)孵育泡沫细胞6 h、12 h、24 h.采用油红O染色观察细胞内脂滴的变化,用氧化酶法检测细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯的含量;用反转录聚合酶链反应检测不同浓度apoAl干预泡沫细胞后ABCA1 mRNA的表达;用免疫荧光法检测经不同浓度和不同时间apoAl和ABCAl多克隆抗体干预泡沫细胞后ABCA1蛋白的表达.结果 (1)THP-1经佛波酯(50 ng/ml)和氧化型低密度脂蛋白(50μg/ml)分别干预48 h后可成功诱导为富含脂质的泡沫细胞;(2)apoA1可促进THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇逆向转运,减少细胞内胆固醇含量,呈浓度依赖性和时间依赖性;(3)随着apoA1干预浓度增加,THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内ABCA1 mRNA的表达变化不显著,但蛋白表达增加,0 μg/ml与5 μg/ml、10μg/ml、15μg/ml、20μg/ml apoAl干预浓度下油红O染色阳性细胞率分别为(55±4)%与(43±9)%、(33±4)%、(28±1)%、(26±2)%,差异有统计学意义(均P<0.05);(4)ABCAl抗体干预可增加THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1蛋白的表达.结论 apoA1-ABCA1通路参与泡沫细胞胆固醇逆向转运,apoA1起关键作用,apoA1增加ABCA1蛋白的表达可能与降低ABCA1蛋白的降解有关.     

辛伐他汀保护缺血-再灌注损伤心肌的线粒体蛋白质组学研究

目的建立大鼠心肌缺血-再灌注损伤模型,通过蛋白质组学的方法研究辛伐他汀对大鼠缺血-再灌注损伤心肌线粒体代谢的保护作用。方法将大鼠随机分为辛伐他汀干预组(n=14)和生理盐水对照组(n=14),建立缺血-再灌注损伤模型,通过伊文思蓝和TTC染色评估梗死面积,提取大鼠左心室心肌线粒体蛋白行双向凝胶电泳,应用质谱分析鉴定差异蛋白点。结果辛伐他汀组和对照组相比,梗死区与危险区(梗死区+缺血区)的比值有统计学差异(29.4%±8.4%vs57.7%±6.5%,P0.0001);梗死面积与左室面积的比值有统计学差异(15.9%±5.6%vs29.0%±8.9%,P=0.012)。双向凝胶电泳图谱分析有19个蛋白点的表达有差异,质谱鉴定了9种差异蛋白,相比对照组,辛伐他汀组4个蛋白表达上调:三功能酶亚基α(线粒体前体)、电子转移黄素蛋白脱氢酶、肌动蛋白α(心肌)、细胞色素c氧化酶亚基5A亚单位(线粒体前体);5个蛋白表达下调:L-乳酸脱氢酶B链、异柠檬酸脱氢酶[NAD]α亚基(线粒体前体)、α晶状体蛋白B链、内膜蛋白(线粒体)、肌动蛋白类似物(细胞质)。结论辛伐他汀组大鼠心肌在缺血-再灌注损伤后,心肌梗死面积显著减少,辛伐他汀改变线粒体呼吸链、能量代谢等途径上的蛋白,为阐明辛伐他汀保护缺血再灌注损伤提供了理论依据。     

L及T型钙离子通道α1亚基在风湿性房颤心房组织中的表达变化

目的研究正常窦律(NSR)、风湿性瓣膜病窦律(RSR)及风湿性瓣膜病房颤(RAF)三组患者右房组织中L型钙离子通道α1C和T型钙离子通道α1G、α1H亚基mRNA及蛋白的表达差异。方法术中获取各组患者(NSR=10,RSR=11,RAF=16)少量右房标本,实时荧光定量RT-PCR对各组α1C、α1G及α1H亚基的mRNA丰度相对定量(2-ΔΔCt法);蛋白免疫印迹法比较三种α1亚基蛋白表达水平。结果与NSR及RSR组相比,RAF组的α1C及α1H的mRNA丰度及蛋白水平显著上调(P0.05),α1G表达水平三组间差异不显著;三种α1亚基在NSR及RSR两组间表达水平无显著差异。结论房颤时,α1C及α1H亚基表达水平上调,而α1G亚基表达水平不变;风湿性因素对L及T型钙离子通道的表达并无直接影响,但不能排除其对钙离子通道功能发生影响的可能。     

HSF1对氧化应激诱导内皮细胞凋亡的保护作用的机制研究

目的探讨热休克转录因子1（HSF1）对过氧化氢（H2O2）刺激后心脏微血管内皮细胞内活性氧簇（ROS）水平和细胞凋亡的影响。方法体外培养大鼠心脏微血管内皮细胞,分别单独转染HSF1质粒、凋亡信号调节激酶1（ASK1）质粒或共转染HSF1及ASK1质粒。转染48h后用1mmol/LH2O2刺激细胞30min,检测并比较各组细胞凋亡情况和胞内ROS水平。结果 （1）H2O2刺激后,各组细胞凋亡较刺激前明显增加（P〈0.05）;且在相同刺激条件下,HSF1转染组细胞凋亡明显少于对照组（P〈0.05）,ASK1转染组明显多于对照组（P〈0.05）,而共转染组与ASK1转染组相比明显减少（P〈0.05）。（2）H2O2刺激后,各组细胞内ROS水平较刺激前都显著升高（P〈0.05）;且在相同刺激条件下,各组细胞内ROS水平较刺激前ROS水平增高的幅度：HSF1转染组明显低于对照组（P〈0.05）,ASK1转染组和共转染组与对照组无明显差异,而共转染组与HSF1转染组相比有升高趋势,与ASK1转染组相比有降低趋势。结论 HSF1可以通过抑制细胞内ROS产生对抗氧化应激诱导的细胞凋亡,保护心脏微血管内皮细胞。ASK1可能干扰HSF1的保护作用。     

纤维蛋白原βG-455A基因多态性与血浆纤维蛋白原及冠心病的关系

目的 研究中国人群中纤维蛋白原βG-455A基因多态性与血浆纤维蛋白原水平及冠心病亚型的关系.方法 1485例因胸痛或非侵入性检查提示心肌缺血的成年人进行了冠状动脉造影检查,根据临床表现及冠状动脉造影结果被分为冠心病组(n=1019)及对照组(n=466),冠心病组又被分为稳定型心绞痛(SAP)组(n=674)及急性冠状动脉综合征(ACS)组(n=345).应用 von Clauss法测定血浆纤维蛋白原水平,多聚酶链反应(PCR)和Hae Ⅲ内切酶技术检测纤维蛋白原βG-455A基因多态性.结果 ACS组及SAP组的血浆纤维蛋白原水平较对照组显著升高,其中ACS组最高(ACS组380.92±92.35 mg/dL,SAP组352.49±94.89 mg/dL,对照组311.72±87.09 mg/dL,三组之间两两比较,P均＜0.001).在对照组及SAP组中基因型为AA的纯合子其血浆纤维蛋白原水平较携带G等位基因的个体为高(对照组AA为363.83±76.66 mg/dL,与GA的337.83±77.43mg/dL或GG的295.28±88.06 mg/dL比较,P均＜0.05;SAP组AA为429.82±93.35 mg/dL,与GA的368.30±90.39 mg/dL或GG的337.89±94.32 mg/dL比较,P均＜0.05),而在ACS组未见此趋势.各组之间的基因型及等位基因频率分布差异无统计学意义(P＞0.05),-455A等位基因与冠心病发病风险无相关性.结论 血浆纤维蛋白原水平升高与冠心病发病风险相关.纤维蛋白原βG-455A基因多态性与冠心病发病无相关性.