葛根素对家兔MI／RI中氧化损伤和一氧化氮的影响

目的观察葛根素在家兔急性心肌缺血再灌注损伤中对机体氧化状态的作用及对一氧化氮的影响。方法健康大耳白兔,制作急性心肌缺血再灌注损伤模型。用药组开胸暴露左冠状动脉,静脉注射葛根素20 mg／kg,5 min后结扎左前降支,造成急性心肌缺血60 min,松开结扎线,再灌注180 min,分别于缺血前、缺血60 min、再灌注60、120和180 min时取血,分离血清,测各时间点的SOD、MDA、NO,再灌注180 min的标本同时测CK、LDH。对照组相同时间给予等体积5％葡萄糖液,其余处理同用药组。结果共11只动物成功制模,完成实验观察,对照组5只,用药组6只。对照组和用药组缺血前SOD为307．91 NU／mL和307．26 NU／mL,缺血60 min时为268．52 NU／mL和306．72 NU／mL,再灌注60、120和180 min时分别为263．94和302．05 NU／mL, 256．98和296．06 NU／mL、244．73和284．76 NU／mL,缺血60 min及再灌注60 min、120 min与对照组比较,差异有统计学意义(P<0．05);缺血前MDA分别为2．80 nmol／L和2．60 nmol／L,缺血60 min时为3．28 nmol／L和2．39 nmol／L,再灌注60、120、180 min时分别为3．64和2．34 nmol／L,4．03和2．72 nmol／L,4．27和2．84 nmol／L,缺血60 min、再灌注60、120和180 min与对照组比较,差异有统计学意义(P<0．05);NO缺血前分别为3．61μmol／L和4．26μmol／L,缺血60 min时为3．21μmol／L和3．77μmol／L,再灌注60、120和180 min时分别为3．84和3．79μmol／L, 4．27和4．24μmol／L,3．94和4．06μmol／L．缺血后及再灌注后各时间点NO水平,及与对照组比较,差异均无统计学意义。再灌注180 min时的CK值在对照组和用药组分别为3 234 U／L和2 522 U／L,差异有统计学意义,LDH分别为375 U／L和328 U／L(P>0．05)。结论缺血前静脉使用20 mg／kg葛根素,可减轻家兔心肌缺血60 min、再灌注180 min的氧化损伤,对心肌有一定保护作用,但不影响NO水平。     

老年大鼠心肌线粒体的蛋白质组学研究及差异蛋白的功能分析

目的建立并优化心肌线粒体蛋白质组研究的双向凝胶电泳技术平台;筛查心肌线粒体中与衰老相关的蛋白质。为保证差异蛋白初筛结果的可信及下游分析的确定性,对差异蛋白进行再验证,并探讨其生物学功能。方法清洁级雄性SD大鼠随机分为新生组(2d)、成年组(10周)、老年组(12月),提取心肌线粒体,抽提全蛋白质行2-DE,对样品制备、上样量、电泳参数、不同固定方式、不同染色方法、不同离液剂等相关技术进行了优化。应用MALDI-TOF-MS鉴定图像分析出的差异蛋白点,同时进行了心肌组织ATP含量的检测。应用Western blot,RT-PCR检测不同发育阶段心肌线粒体中差异蛋白在蛋白、mRNA水平的表达情况。通过构建腺病毒载体,使用含有差异基因的腺病毒液将差异基因导入MRC-5细胞中,并获得表达,通过检测衰老相关的β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色、ROS和细胞周期等指标观察差异蛋白对MRC-5细胞衰老的影响。结果45％乙醇、5％乙酸的固定液对蛋白质固定效果最好;胶体考染和快速银染都是较理想的染色方法;含9M尿素的离液剂所得蛋白点最多;构建了心肌线粒体高分辨率和重复性的双向凝胶电泳图谱。图像分析示凝胶有1100个蛋白点,84个心肌线粒体蛋白表达发生改变,质谱鉴定了43个差异点。其中乙醛脱氢酶2(ALDH2)在老年组大鼠心肌线粒体中表达较成年组下调。差异蛋白多和呼吸链功能,能量代谢,物质运输和应激反应有关。新生组心肌组织ATP含量最低(15．49±1．33)μg ATP／g心肌,老年组心肌组织ATP含量较成年组下降((41．48±2．99)比(59．64±2．68)μg ATP／g心肌, (P<0．01)。能量代谢的生化检测进一步证实了蛋白质组学的结果。Western blot,RT-PCR证实ALDH2在老年组大鼠心肌线粒体中低表达。与对照组细胞相比, ALDH2基因导入后,MRC-5细胞的SA-β-gal染色阳性率下降,ROS水平较对照组下降。细胞周期未见明显改变。结论建立SD大鼠心肌线粒体蛋白质组的2-DE分析技术。鉴定SD大鼠心肌线粒体中在老年组差异表达的蛋白质,该差异蛋白为深入理解衰老的分子机制提供了有益的线索。功能学分析发现,ALDH2能延缓MRC-5细胞衰老的进程。     

HSF1基因缺失通过上调microRNA-195a-3p加速压力超负荷下心脏重构

目的:探讨热休克转录因子1(HSF1)调控微小RNA-195a-3p (miR-195a-3p)对心肌微血管内皮细胞血管新生功能的影响,旨在阐明HSF1基因缺失加重压力超负荷下心脏重构的病理分子机制。方法:压力超负荷动物模型采用小鼠主动脉弓缩窄(TAC),辅以心脏超声功能评价。在体实验分组为HSF1基因敲除(HSF1~(-/-))小鼠假手术组、C57BL/6野生型(WT)小鼠假手术组、HSF1~(-/-)小鼠TAC模型组和C57BL/6 WT小鼠TAC组;细胞实验分组为对照组、miR-195a-3p模拟物干预组和阴性对照microRNA(miR-NC)干预组。TAC术后4周,通过病理组织切片检测各组小鼠心肌肥厚(HE染色)和血管新生(CD31染色),小鼠心超检查心脏主要功能指标变化;通过生物信息软件TargetScan 6.2结合萤光素酶(luciferase)报告基因检测,以及Western blot验证,测定miR-195a-3p调控血管新生的下游分子靶点;并用miR-195a-3p诱导微血管内皮细胞,观察其对细胞成管能力的影响。结果:HSF1缺失会导致TAC诱导的小鼠左心室重构加重。芯片筛查结果表明HSF1缺失可促进心脏12种microRNAs表达上调,5种microRNAs在心肌微血管内皮细胞中表达显著升高,其中miR-195a-3p的增高具有统计学显著性。miR-195a-3p过表达可以有效抑制微血管内皮细胞CD31和血管内皮生长因子(VEGF)的表达,阻滞细胞形成管腔样结构。TargetScan 6.2预测miR-195a-3p的靶点为AMP活化蛋白激酶α2(AMPKα2),在微血管内皮细胞用miR-195a-3p模拟物干预可以有效抑制AMPKα2的表达,同时miR-195a-3p模拟物也抑制了CD31和VEGF的表达。结论:HSF1基因缺失导致的miR-195a-3p表达上调是加速压力超负荷下心脏重构的重要诱因,其机制可能是通过抑制AMPKα2介导的血管新生信号通路的激活。     

心肌线粒体双向凝胶电泳技术分析

目的：建立并优化心肌线粒体蛋白质组研究的双向凝胶电泳（two-dimensional gel electrophoresis，2-DE）技术。方法：分离200g雄性SD大鼠心肌线粒体，抽提心肌线粒体的全蛋白，以固相pH梯度、等电聚焦为第一向和垂直SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳为第二向行双向凝胶电泳，对样品制备、上样量、电泳参数、不同固定方式等相关技术进行优化。凝胶行硝酸银染色，扫描仪获取凝胶图像并用PDQuest软件进行分析。结果：45％乙醇和5％乙酸的固定液对蛋白质固定效果最好；构建了心肌线粒体高分辨率和重复性的双向凝胶电泳图谱。结论：建立了SD大鼠心肌线粒体蛋白质组的双向凝胶电泳分析技术。     

化学消融术和外科切除术治疗梗阻性肥厚型心肌病3年随访的对比研究

目的:对梗阻性肥厚型心肌病行经皮室间隔化学消融术和外科手术室间隔切除术治疗的患者进行对照研究,观察长期疗效和安全性。方法:25例行化学消融术的梗阻性肥厚型心肌病患者,以17例手术治疗的患者作为对照组。进行术前、术后1个月、术后1年和3年的随访,包括临床的心脏事件和心脏超声等。结果:1例手术患者住院期间死亡。1例化学消融患者术后1个月时发生猝死。化学消融术中2例患者出现过一过性传导阻滞。术后患者症状缓解,心功能改善。术后1个月时室间隔厚度[手术组(14.11±1.12)mm∶化学消融组(17.68±0.82)mm,P<0.05]和左室流出道压差[手术组(22.55±6.49)mm∶化学消融组(44.13±5.93)mm,P<0.05],手术组显著小于化学消融组。随着时间延长,化学消融组患者室间隔和左室流出道压差有进一步下降。随访3年时,两组差异无统计学意义。术后有左室射血分数下降,左房左室内径增大的趋势,但两组差异无统计学意义。结论:化学消融和手术切除治疗梗阻性肥厚型心肌病,均能有效缓解症状,改善患者活动能力和心功能,术后患者长期存活。化学消融术对于药物治疗不佳的患者是手术切除治疗之外的一个较好的选择。     

缺氧大鼠乳鼠心肌细胞中sema3a调节connexin43磷酸化水平的相关性研究

目的:研究缺氧大鼠乳鼠心肌细胞中信号素3A(sema3a)与p-connexin 43(Ser 279/282)的相关性变化.方法:体外培养大鼠乳鼠心肌细胞并缺氧,检测sema3 a与p-connexin 43(Ser 279/282)在不同缺氧时间的变化.慢病毒构建并转染心肌细胞,分为空白组、空病毒组、病毒组3组,选择在最佳缺氧时间点检测sema3a及p-connexin 43(Ser 279/282)的蛋白水平变化.结果:(1)1 h为检测最佳缺氧时间点,p-connexin 43(Ser 279/282)在1h缺氧组达到高峰(P<0.05),sema3a缺氧12 h急剧下降(P<0.05),(2)高表达sema3a,p-connexin 43(Ser 279/282)降低;抑制表达sema3a,p-con-nexin 43(Ser 279/282)升高.结论:在缺氧条件下,sema3a可以负向调节p-connexin 43(Ser 279/282),影响缝隙连接功能,提示其在影响细胞间电传导、诱发室性心律失常中有重要作用.     

通心络对血管内皮的保护机制

目的:探讨树突状细胞(DC)在中药方剂通心络(TXL)对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)引起的小鼠内皮细胞损伤过程中的作用. 方法:C57BL/6小鼠随机分为假手术组(Sham组),血管紧张素Ⅱ组(Ang Ⅱ组),通心络保护组(Ang Ⅱ+TXL组).扫描电镜观察胸主动脉内皮的损伤状况;流式细胞术检测外周血液中单个核细胞CD11c的表达及胫、腓骨骨髓中树突状细胞的前体细胞标志ER-MP58的表达.免疫组织化学法检测胸主动脉壁、心肌间质、肾皮质中S100的表达.结果:电镜显示Ang Ⅱ+TXL组血管壁上内皮细胞的损伤明显较Ang Ⅱ组减轻,骨髓中ER-MP58及血液中CD11c表达水平明显降低,胸主动脉壁、心肌间质、肾皮质中S100阳性细胞数减少.结论:通心络可通过抑制骨髓中DCs前体细胞的数量,减少DCs在组织、血液中的水平,对血管紧张素Ⅱ导致的小鼠血管内皮损伤发挥保护作用.     

银杏叶提取物GBE50对缺氧致内皮细胞功能的影响

目的初步探讨缺氧对人脐静脉内皮细胞功能的影响,以及银杏叶提取物GBE50在其中的作用。方法应用流式细胞技术、TUNEL、RT—PCR及Western blot等方法,探讨缺氧及GBE50对内皮细胞功能的影响。结果缺氧干预内皮细胞24h后,细胞活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平及早期、晚期凋亡率均明显增加,伴随内皮素（endothelin-1,ET-1）mRNA水平及内皮型一氧化氮合成酶（endothelial oxide synthase,eNOS）蛋白水平的升高。缺氧前4h给予GBE50干预后发现,GBE5025μg／ml时可显著降低细胞早期及晚期凋亡率及ET-1 mRNA水平（P〈0．05）,部分降低因缺氧导致的ROS水平及eNOS蛋白表达的增高（P〉0．05）。结论缺氧可导致血管内皮功能障碍,而GBE50可部分或显著逆转缺氧所致的内皮功能障碍,GBE50对缺氧所致的内皮功能障碍有一定的保护作用。     

粒细胞集落刺激因子在心血管疾病中的应用

利用粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员自体骨髓干细胞(BMDCS)进人外周血,并迁移到受损部位再生修复心血管组织是新的治疗策略.G-CSF对心肌梗死,对动脉粥样硬化、心力衰竭、缺血性外周血管病等多种心血管疾病都有作用.其机制主要是心肌再生、瘢痕修复、血管新生以及心脏直接保护效应.G-CSF对心血管不良反应报道的不多,主要致白细胞增多引起高黏滞血症,还对凝血、抗凝血系统有较大影响.目前研究多提示其安全,且由于无创、操作简便,G-CSF治疗心血管疾病将会在临床广泛开展.     

miR34a通过调控乙醛脱氢酶2参与心肌细胞凋亡及心室重构

背景和目的乙醛脱氢酶2(ALDH2)是一种内源性心肌保护因子,通过代谢4-HNE等毒性醛类在心肌梗死过程中起抗心肌细胞凋亡并改善心室重构作用。miRNA在很多生物的生理和病理过程中发挥重要作用,影响细胞凋亡、增殖,并与许多疾病相关。我们前期研究发现,ALDH2在心肌缺氧早期呈显著下降趋势。本研究拟从microRNA角度探讨ALDH2下降的机制,并探索内源性抑制ALDH2下降的作用靶点。方法利用实时定量PCR研究缺氧心肌细胞中miR34a及ALDH2 mRNA的表达情况,同时利用Western blot检测ALDH2蛋白表达,以观察miR34a与ALDH2在缺氧心肌细胞中变化趋势是否相关。在此基础上,利用microRNA特异模拟及抑制技术调控miR34a的表达,同时利用siRNA及高表达病毒转染技术调控ALDH2表达,观察miR34a与ALDH2的改变是否都能够改变心肌细胞缺氧后凋亡的反应情况。进一步利用miR34a特异模拟剂和抑制剂分别上调和下调microRNA的表达后,检测心肌细胞内ALDH2表达变化,以证实miR34a可以抑制ALDH2的翻译表达。进而,我们将采用荧光报告基因质粒技术,构建GFP后带有AL...