猪冠状动脉微栓塞模型血清TGF-β-1的表达

目的：检测转化生长因子-β1（transforming growth factor-beta 1,TGF-β1）在猪冠状动脉微栓塞模型中的表达情况。方法：10只小型猪,通过经皮冠脉介入术于前降支注入微栓塞球建立冠状动脉微栓塞的模型,以ELISA法检测术前、术后2h、6h和1周时血清TGF-β1的浓度;RT-PCR法检测术后1周时心肌中TGF-β1 mRNA的表达情况。结果：与冠脉微栓塞术前（7.38±2.10ng·mL^-1）相比,在术后2h血清中TGF-β1升高（14.86±4.04ng·mL^-1）,6h达到高峰（22.89±2.03ng·mL^-1）,1周时下降（20.44±3.99ng·mL^-1）,但仍高于术前;RT-PCR法检测示1周时前壁微梗死区心肌组织TGF-β1 mRNA水平表达高于后壁未梗死区。结论：冠状动脉微栓塞后血清TGF-β1呈升高趋势,且至少持续1周左右;1周时微栓塞相关心肌组织中TGF-β1 mRNA的表达也明显升高。     

急诊经导管干细胞移植改善急性心肌梗死患者的左室收缩功能

目的近年来多个小样本临床试验提示在心肌梗死发生后一周内进行经冠状动脉内自体骨髓细胞移植可以促进受损心肌的修复和心功能的改善.本项随机双盲的临床研究旨在评价急诊经冠状动脉内骨髓细胞移植治疗急性心肌梗死是否可行.方法20例发病在24h内的急性心肌梗死患者随机分成骨髓移植组(n=10)和对照组(n=10),分别在急诊经皮介入治疗(PCI)成功后3h内经导管注入自体骨髓单个核细胞或安慰剂至梗死相关冠状动脉.随访患者PCI后1周及6个月左室射血分数(LVEF)和左心室舒张末期内径(LVDd).结果经胸心脏超声提示移植组LVEF由术后1周(53.8±9.2)%升至6个月(58.6±9.9)%,P＜0.05,而对照组无显著变化[(58.2±7.5)%比(56.3±3.5)%,P＞0.05];6个月随访移植组LVDd维持不变[(52.5±2.8)mm比(52.1±3.2)mm,P＞0.05],而对照组LVDd由术后1周(50.4±6.0)mm增加至(55.2±7.1)mm,P＜0.05.另外单光子放射计算机断层显像术(SPECT)提示移植组心肌灌注缺损指数由1周时的21±11降低至6个月时的13±10,P＜0.01.而对照组变化不显著.结论急诊经冠状动脉自体骨髓单个核细胞移植可以显著地改善急性心肌梗死患者左心室收缩功能,并且有效地防止远期左心室扩大.     

Connexin43在银杏叶片抑制兔动脉粥样硬化斑块形成中的作用

目的观察银杏叶片对兔动脉粥样硬化过程中血脂代谢及斑块形成的变化,探讨在兔动脉粥样硬化模型中银杏叶片对Connexin43（CX43）表达的影响。方法雄性实验兔40只,随机分为5组,每组8只,对照组普通饮食,其他4组高脂饮食,同时辛伐他丁组给予辛伐他丁灌胃、银杏叶片高低剂量组给予相应剂量的银杏叶片灌胃共12周,检测血脂、主动脉病理观察动脉硬化变化情况,运用免疫组化及Western blot检测主动脉CX43的表达情况。结果银杏叶片组兔的血脂较高脂饮食组下降,动脉粥样硬化的程度较高脂组减轻;CX43的表达较高脂组减少。结论银杏叶片具有轻度的降血脂作用,在一定程度上可以减轻高脂饮食兔动脉粥样硬化程度,这种作用可能是通过下调CX43的表达来实现的。     

三氧化二砷对炎症细胞的影响及其分子机制

目的观察三氧化二砷(As2O3)对人T淋巴细胞和人树突状细胞(DCs)凋亡以及对树突状细胞表型、细胞因子分泌的影响,探索As2O3洗脱支架局部抗炎作用的有关机制。方法分离培养人T淋巴细胞,用rhGM-CSF和rhIL-4诱导单个核细胞分化为树突状细胞,流式细胞仪检测As2O3对T淋巴细胞和树突状细胞凋亡的影响;用LPS诱导树突状细胞分化成熟,流式细胞仪检测As2O3干预对树突状细胞成熟表型的影响,ELISA检测As2O3对树突状细胞分泌细胞因子的影响。结果 As2O3在1umol/L浓度时即可明显诱导人T淋巴细胞凋亡,在5umol/L浓度时可诱导树突状细胞凋亡,且均呈剂量依赖性;As2O3在低于凋亡诱导剂量时即可抑制LPS诱导的树突状细胞成熟,下调树突状细胞表面分子CD83和CD86的表达率,并减少树突状细胞IL-10、IL-12和IFN-γ等细胞因子的释放。结论 As2O3具有诱导T淋巴细胞、树突状细胞凋亡以及抑制树突状细胞的免疫成熟的作用,As2O3洗脱支架的局部抗炎作用和As2O3的上述作用有关。     

轻度冠状动脉微栓塞后TNF-α和cTnT的变化

目的冠状动脉微栓塞是急性冠脉综合征和冠心病PCI术后的不良后果,严重影响冠心病的预后。目前对早期发现和诊断冠脉微栓塞尚无较好的临床指标。本文通过检测轻度冠脉微栓塞后不同时间点TNF-α和cTnT的血清学水平,探索早期筛查冠脉微栓塞的血清学标志物。方法 12周龄健康小型猪8只,通过经皮冠脉介入法,于前降支中远端,经微导管注入微栓塞球(总计5万个,直径42μm)建立轻度冠状动脉微栓塞模型,微栓塞术前、术后2小时、6小时、1周分别采集股动脉血,以酶联免疫法(ELISA)法检测各时间点的血清TNF-α水平,以电化学发光法检测血清cTnT水平;术后1周时,处死动物,收集心肌组织标本,行四氮唑蓝染色,检测心肌梗死灶;对前壁、后壁心肌组织切片行HE染色,检测微梗死灶;同时以免疫组化法检测心肌组织中TNF-α的蛋白表达。结果与冠脉微栓塞术前(137.97±28.20pg/ml)相比,血清TNF-α在术后两小时即达到峰值(256.35±68.27pg/ml,P0.01),术后1周(103.42±16.68pg/ml)降至术前水平,而一周时TNF-α前壁心肌组织表达高于后壁;cTnT在术后6小时才升至峰值水平(0.158±0.161ng/mlvs术前0.01ng/ml,P0.05),术后1周(0.041±0.053ng/ml)仍高于术前水平。心肌HE染色示,5万微球的冠脉微栓塞不足以引起心肌微梗死灶的形成。结论相比于血清cTnT,轻度冠状动脉微栓塞后血清TNF-α水平更早达到峰值;cTnT虽然达峰偏晚,但持续时间可达一周左右,二者结合对早期发现和诊断冠脉微栓塞起重要作用。     

三氧化二砷洗脱支架诱导猪损伤冠脉平滑肌细胞凋亡

目的观察三氧化二砷（As2O3）多聚左旋乳糖酸（PLLA）涂层支架对猪损伤冠脉平滑肌细胞的凋亡诱导作用及机制。方法在6头小型家猪的冠脉内随机植入裸金属支架、PLLA涂层支架、雷帕霉素洗脱支架和As2O3洗脱支架,7天后处死,TUNEL法检测支架段血管平滑肌细胞凋亡率、免疫组化和Western blot法检测凋亡蛋白p53和增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达,体外观察As2O3对大鼠血管平滑肌细胞的凋亡诱导作用和p53表达。结果与裸支架和PLLA涂层支架相比,雷帕霉素洗脱支架和As2O3洗脱支架植入局部平滑肌细胞凋亡率以及p53表达明显增多,尤其以As2O3洗脱支架最为明显（P〈0．01）,雷帕霉素洗脱支架和As2O3洗脱支架植入局部PCNA表达较裸支架和PLLA涂层支架明显减少（P〈0．01）,但二者间无显著性差异（P〉0．05）。体外细胞培养显示As2O3呈剂量依赖性的诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡和p53蛋白的表达。结论As2O3洗脱支架具有诱导猪损伤冠脉平滑肌细胞凋亡的作用,且较雷帕霉素洗脱支架更明显,其凋亡诱导作用和增加局部细胞p53表达有关。     

过表达HSF1及ASK1基因对H2O2刺激后心肌细胞内ROS水平的影响

目的研究热休克因子1(HSF1)及凋亡信号调节激酶1(ASK1)对过氧化氢(H_2O_2)刺激后心肌细胞内活性氧簇水平(ROS)变化的影响。方法对不同组培养心肌细胞分别单独转染质粒HSF1,ASK1,及共转染HSF1 ASK1,48h待其充分表达后用1 mmol/LH_2O_2刺激心肌细胞30min,检测细胞内ROS水平,并与相应转染后未刺激组及未转染的对照组比较,观察ROS水平的变化。结果(1)所有H_2O_2刺激组心肌细胞内ROS水平均高于相同转染条件下的非刺激组(P<0.05);(2)相同H_2O_2刺激条件下,各组ROS水平:HSF1组低于对照组(P<0.05),ASK1组与对照组无显著差异,HSF1 ASK1组与单转HSF1组相比有升高的趋势;(3)相同H_2O_2刺激条件下,各组刺激后比刺激前ROS水平增高的幅度:HSF1组低于对照组(P<0.05),ASK1组与对照组无显著差别,HSF1 ASK1组与单转HSF1组相比有升高的趋势。结论在H_2O_2刺激条件下,HSF1可通过降低心肌细胞内的ROS水平来发挥细胞保护作用,而ASK1对细胞内ROS水平无影响,但其可干扰HSF1对ROS的抑制作用。     

纯化人源骨髓单克隆间充质细胞移植更利于梗死心脏功能恢复

目的通过制备大鼠心肌梗死模型,分别移植经纯化了的人源骨髓单克隆间充质干细胞(SCMSCs)、未纯化的间充质细胞和单个核细胞及外周血单个核细胞,旨在比较SCMSCs移植是否更有利于心脏功能改善。方法应用磁珠分选和极限稀释细胞培养方法获取SCMSCs,利用贴壁培养方法得到未纯化的骨髓间充质细胞,利用梯度密度离心法得到骨髓单个核细胞和外周血单个核细胞。流式细胞仪分析所得细胞特性后,将其移植到梗死心脏。术后1个月,应用血流动力学技术检测大鼠心脏功能,随后取材,以免疫荧光检测移植细胞的分化情况,用碱性磷酸法计算血管密度。结果流式分析结果显示,SCMSCs99%以上表达间充质干细胞标记蛋白,阴性表达造血细胞标记蛋白。功能检测显示,移植SCMSCs心脏收缩功能(LVdP/dtmax)较明显高于其他各组。血管计数显示,SCMSC组血管密度明显高于其他各组。免疫荧光结果显示,移植的SCMSCs向心肌细胞和血管内皮细胞转化效率明显高于其他骨髓细胞,外周血细胞并不发现分化。结论经纯化均一的SCMSCs移植较目前常用的未纯化、不均一的干细胞移植更利于梗死心脏收缩功能恢复。     

芪苈强心胶囊通过抑制血管紧张素Ⅱ改善压力超负荷致小鼠心肌肥厚

目的探讨探讨芪苈强心胶囊是否通过抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)表达改善压力超负荷下小鼠心肌肥厚。方法小鼠行升主动脉缩窄手术(TAC)建立心肌肥厚模型,8-10周龄野生型雄性小鼠(WT)和雄性血管紧张素原基因敲除小鼠(ATG-/-)随机分为假手术组、生理盐水组、芪苈强心胶囊三组,TAC组小鼠给予生理盐水或1.0mg/(kg.d)药物灌胃处理。术后2周行心超及血流动力学检查,同时分析心肌组织学指标以及肥厚相关基因表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆和心肌组织AngⅡ浓度,,蛋白印迹法检测磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)及血管紧张素Ⅱ-1型(AT1)受体表达。结果 WT和ATG-/-小鼠TAC后2周,主动脉血压及左室收缩末期压显著升高,芪苈强心胶囊对其均无影响。WT小鼠中,此药显著抑制TAC介导AngⅡ的升高(P<0.05),抑制TAC介导的左室前壁,左室后壁增厚以及心肌细胞横截面积(CSA)和纤维化面积增大,同时抑制肥厚相关基因、AT1受体和p-ERK表达上调(P<0.05),;ATG-/-小鼠中,在AngⅡ缺失的情况下,TAC两组间左室前后壁、CSA、纤维化面积以及肥厚相关基因、AT1受体和p-ERK...     

奥美沙坦不依赖血管紧张素Ⅱ改善压力超负荷诱发的小鼠心脏肥大

目的探讨奥美沙坦在无内源性血管紧张素II(AngII)情况下能否抑制压力超负荷导致的小鼠心脏肥厚。方法通过缩窄升主动脉(TAC)构建小鼠压力超负荷心脏肥大模型。8-10周龄野生型(WT)和血管紧张素原基因敲除(ATGKO)小鼠各随机分为3组:假手术组,生理盐水组和奥美沙坦组。TAC两周后,对小鼠心脏进行超声及病理形态学检测,同时测量左心室压力、全心/体重比值以及相关肥大基因检测。结果相对于假手术组,生理盐水组心脏肥厚各项指标值明显变大(P0.05)。奥美沙坦组心脏肥厚的各项指标值均显著低于生理盐水组(P0.05);在WT小鼠和ATGKO小鼠可见相似结果。结论奥美沙坦在无内源性AngII的条件下也能有效抑制压力超负荷所致心肌肥厚,其作用机制可能是不依赖于AngII而直接抑制压力超负荷触发的AT1受体的活化。