结核分枝杆菌clpP2抗原表位预测与分析

【摘要】 目的 预测结核分枝杆菌酪蛋白酶蛋白水解亚基单位2（clpP2）的抗原表位,为结核病疫苗、药物研制等提供新的靶点。方法 以clpP2蛋白的氨基酸序列为基础,采用生物信息软件DNA Star预测二级结构;运用SWISS-MODEL在线软件进行同源建模;运用VaxiPred软件综合预测T 细胞抗原表位,用ABCpred、COBEPro和BepiPredPred 软件综合预测其B 细胞抗原表位;采用DNA Star Protean、SignalP、TMHMM在线软件和NCBI数据库分析其免疫学相关信息。结果 clpP2蛋白结构丰富,含有较多潜在细胞毒性T细胞和辅助T细胞表位; 也含有较多的B细胞线性和构象优势表位,这些区域亲水性、表面可能性和柔韧性指数都较高。结论 clpP2蛋白具有诱导免疫应答的潜能,可以作为结核监测、治疗、预防的新靶点。     

支气管内超声引导针吸活检术对肺门、纵隔淋巴结肿瘤和结核的诊断价值

目的探讨支气管内超声引导针吸活检术（EBUS-TBNA）在肺门、纵膈淋巴结恶性肿瘤和结核诊断中的应用价值。方法回顾性分析2013年1月至2016年9月在四川大学华西医院呼吸内镜中心接受EBUS-TBNA检查的553例患者的临床及病理资料,统计EBUS-TBNA对肺门、纵膈淋巴结肿瘤和结核的诊断敏感性、特异性和准确率。结果EBUS-TBNA诊断肺门、纵膈淋巴结恶性肿瘤的敏感性、特异性和准确率分别为89.2%（263/295）、100.0%（247/247）和94.1%（510/542）。针吸活检组织查见肉芽肿诊断结核的敏感性、特异性和准确率分别为65.0%（76/117）、97.2%（385/396）和89.9%（461/513）。标本组织行抗酸染色和TB-PCR的102例中,查见抗酸杆菌或TB-PCR任一项阳性诊断结核的敏感性、特异性和诊断准确率为63.7%（58/91）、90.9%（10/11）和66.7%（68/102）。结论EBUS-TBNA诊断肺门和纵膈肿瘤具有较高的敏感性和特异性,并可联合抗酸染色和TB-PCR联合诊断肺门和纵膈淋巴结结核。     

6 458例肺癌患者临床特征及诊疗现状分析

目的归纳总结原发性肺癌患者的临床特点及流行病学特征,并了解其诊断、治疗现状。方法回顾性分析2008～2014年于四川大学华西医院确诊的6 458例原发性肺癌患者临床病理资料,分析病理分型与年龄、性别、TNM分期等临床特征的相关性,并归纳总结其诊断、治疗状况。结果6 458例原发性肺癌患者中男4 291例、女2 167例;患者平均年龄为59.22岁,其中40岁以下者占5.1%（335例）,50～70岁在各病理类型中均为高发年龄段,约占所有肺癌人群的61.1%;首诊时Ⅰ期患者仅10.5%（675例）,绝大部分患者在首诊时即为Ⅳ期（53.3%）。最常见的病理类型为腺癌（3 523例, 54.44%）,其次为鳞癌（1 637例, 25.35%）及小细胞肺癌（916例, 14.18%）。在鳞癌、腺癌、小细胞癌及其他类型肺癌中,最主要的诊断方式均为纤支镜及手术等获取的标本进行病理学检查诊断;最主要的治疗手段为手术及化疗。结论近七年于我院就诊的原发性肺癌患者仍以中老年男性为主,腺癌居多;手术及纤支镜获取的标本进行病理学检查是最主要的诊断方式,而手术及化疗则是最主要的治疗手段。     

肢体缺血后处理对脑缺血大鼠神经功能恢复和神经细胞增殖的作用

目的探索非侵入式肢体缺血后处理（NLIP）对脑缺血大鼠的脑保护作用和损伤侧皮质区神经细胞的表达与分布。方法SD大鼠110只随机分成假手术组(n=10), 缺血再灌注损伤组（I/R组,n=50）,NLIP组（治疗组,n=50）。I/R组和治疗组动物采用线栓法制备大脑中动脉栓塞（MCAO）模型（假手术组不插入线栓）,治疗组于再灌注即刻给予NLIP处理（改良的缺血弹性带股动脉近端加压阻断股动脉10 min,再通10 min,循环3次）,术后3 d、7 d、14 d、21 d、28 d分别称取大鼠体质量,并进行行为学评估后处死大鼠取脑组织,免疫组织化学染色检测各时点缺血脑皮质中的双皮质素（DCX）和胶质细胞原纤维酸性蛋白（GFAP）的表达,Western blot检测缺血脑皮质中微管相关蛋白2（MAP2）的表达。结果假手术组动物术后1 ~3 d表现出轻度的体质量下降和行为学缺损,术后1 d出现上肢肌力减弱,之后开始恢复。与假手术组比较,以上神经缺损在I/R组和治疗组动物中更加明显（P<0.05）,术后3 d到21 d逐渐缓解,到术后28 d时接近假手术组水平。与I/R组相比,治疗组动物体质量在术后2~7 d有明显恢复（P<0.05）,动物上肢肌力在14~28 d有明显改善 (P<0.05),治疗组行为学评分在各时点与I/R组差异无统计学意义。与假手术组比较,I/R组和治疗组脑皮质缺血区周围DCX阳性细胞和GFAP阳性细胞随时间推移逐渐增多,伴随胞体肥大和突起变长加粗,分别在术后21 d和28 d大量增殖并聚集在脑皮质缺血区周围。I/R组和治疗组在术后3 d缺血脑皮质中MAP2表达量下降,但与假手术组差异无统计学意义（P>0.05）,之后逐渐上调,术后14 d和21 d时高于假手术组（P<0.05）。治疗组MAP2表达量在术后7~28 d高于假手术组（P<0.05）,在术后7 d时高于I/R组（P<0.05）。结论NLIP可减轻脑缺血大鼠神经行为学异常和促进缺血周围区神经细胞的增多。     

Msp对人非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力影响的 实验研究

目的 探讨巨噬细胞刺激蛋白(macrophage stimulating protein, Msp)对人非小细胞肺癌细胞株PC14增殖、迁移和侵袭能力影响的研究。方法 构建Msp编码基因st1 真核表达载体,将st1 导入Msp（-）和RON（-）人非小细胞肺癌细胞株PC14,并用G418筛选出稳定表达的细胞株。通过RT-PCR方法检测已转染st1 载体PC14细胞中st1 的表达,用Western blot检测Msp在PC14、PC14-st1 -pEGFP-N1、PC14-pEGFP-N1中的表达水平,同时检测RON在PC14和RON(+)细胞SKBR-3中的表达情况。通过计算RAW 264.7（小鼠单核巨噬细胞）和SKBR-3细胞在各转染组细胞培养上清液的刺激下穿过Transwell 微孔膜的细胞数来评价Msp的生物学活性。利用MTT法检测Msp对PC14细胞增殖力的影响,采用Transwell小室和基质胶侵袭实验观察Msp对PC14细胞迁移和侵袭能力的影响。结果 转染st1 基因后,形成PC14-st1 -pEGFP-N1,稳定表达st1 mRNA及蛋白,其本身的增殖能力被明显抑制,迁移能力和侵袭能力均较PC14和PC14-pEGFP-N1降低。它还通过旁分泌的方式对RON (+)阳性的癌细胞RAW264.7和SKBR-3的迁移起促进作用。结论 Msp表达可降低人非小细胞肺癌细胞PC14的增殖、迁移和侵袭能力,却对RON (+)阳性的癌细胞迁移通过旁分泌的方式有促进作用。     

急性主动脉夹层患者血清儿茶酚胺质量浓度与氧合指数的 相关性研究

目的 探索急性主动脉夹层（acute aortic dissection,AAD）患者是否存在血清儿茶酚胺质量浓度的升高,以及患者血清儿茶酚胺质量浓度与氧合指数（oxygenation index,OI）的关系。HTH]方法 2013年4~12月期间,纳入3组患者（A组38例AAD患者、B组28例升主动脉瘤患者、C组22例心绞痛患者）为研究对象,收集所有患者一般临床资料,测定OI并采集血液标本测定肾上腺素（adrenaline,AD）、去甲肾上腺素（noradrenaline,NA）、内毒素（endotoxin,ET）的血清质量浓度。通过对3组患者上述指标的对比分析,观察AAD患者血清儿茶酚胺质量浓度是否升高;采用直线相关分析AAD患者血清儿茶酚胺质量浓度与ET质量浓度以及OI的关系。HTH]结果 3组患者一般临床资料差异无统计学意义。A组患者血清AD、NA、ET质量浓度均高于B组和C组（ P<0.001),OI低于B组和C组（ P<0.001)。采用直线相关分析发现AAD患者血清AD及NA质量浓度均与ET质量浓度存在正相关性,而与OI呈负相关性。结论 血清儿茶酚胺浓度的升高可能与AAD患者急性肺损伤有关。     

EMA-PCR技术快速鉴别死活腺病毒的初探

目的 探讨采用叠氮溴化乙锭（EMA）联合聚合酶链反应（PCR）快速鉴别死活腺病毒的方法。方法将不同稀释度的病毒接种至生长良好的单层细胞上,通过细胞病变效应（CPE）的发生情况计算病毒滴度;将3种腺病毒和新城疫鸡瘟病毒分别制备成106 PFU/mL的母液并梯度稀释备用,提取DNA后用PCR扩增后进行凝胶电泳,观察目的片段的扩增结果;分别用0 μg/mL、70 μg/mL、120 μg/mL和150 μg/mL的EMA处理灭活后的腺病毒,提取DNA进行PCR,观察目的片段的电泳结果;用120 μg/mL的EMA处理107 PFU/mL、106 PFU/mL、105 PFU/mL、104 PFU/mL、103 PFU/mL的腺病毒,观察PCR和凝胶电泳结果。结果 104 PFU/mL及以上滴度的病毒DNA PCR后得到阳性条带,其他滴度的病毒DNA PCR后未检测到阳性条带;3个型别的腺病毒（共8个分离株）的DNA均扩增出目的条带,新城疫鸡瘟病毒的DNA未扩增出目的条带;120 μg/mL及150 μg/mL的EMA抑制灭活腺病毒DNA 扩增,未得到阳性条带;120 μg/mL EMA不影响107 PFU/mL、106 PFU/mL、105 PFU/mL的腺病毒活病毒DNA扩增,得到阳性条带。结论 本研究证实EMA-PCR方法可快速鉴别死活腺病毒,能有效避免单纯PCR检测腺病毒产生的假阳性结果。     

嗜肺军团菌mip/flaA二联优势抗原表位基因融合表达载体的构建及表达

目的 选取嗜肺军团菌mip/flaA优势抗原表位基因,构建mip/flaA二联优势抗原表位基因融合表达载体,并在原核系统中表达,为后续制备嗜肺军团菌蛋白疫苗提供初步的实验基础。方法 运用生物信息学方法对Mip和FlaA蛋白的二级结构和表面特性如理化性质、亲水性、可塑性、抗原指数以及胞外区等方面进行分析,选择其活性表位可能存在的区域为优势抗原表位区。通过PCR扩增和T4连接酶构建pET-mip、pET-flaA和pET-mip/flaA优势抗原表位基因融合表达载体,并诱导其在大肠杆菌中表达。结果 Mip和FlaA都存在多个潜在的抗原表位位点,选取其优势抗原表位区域进行克隆和表达获得成功,并成功表达了mip/flaA二联优势抗原表位融合蛋白。结论 DNA Star软件和Expasy在线蛋白分析系统能够成功预测嗜肺军团菌Mip和FlaA 抗原的表位;选取其优势抗原表位成功构建了pET-mip/flaA二联原核表达载体,并高效表达。