糖皮质激素受体基因转染对肺泡巨噬细胞表达炎性因子的影响

目的:分析过量表达的外源性糖皮质激素受体在调控肺泡巨噬细胞表达炎性细胞因子中的作用。方法:实验于2005-10/2006-03在解放军南京军区南京总医院呼吸病实验室完成。①选用成年健康Wistar大鼠10只,雌雄不拘。采用大鼠糖皮质激素受体真核表达质粒pCMV-rGR转染体外培养肺泡巨噬细胞,将肺泡巨噬细胞分为转染组与非转染组,其中转染组细胞在质粒转染24h后用于实验,各组对以下时相点进行观察:正常对照(加等量生理盐水)、脂多糖 地塞米松作用4,8和12h,脂多糖与地塞米松作用浓度分别为100μg/L,1×10-5mol/L,于不同时相点收集细胞。②转染24h后WesternBlotting检测细胞总蛋白和核蛋白中糖皮质激素受体蛋白表达变化。同时收集细胞培养上清,采用酶联免疫吸附法浊定细胞培养上清中肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β水平。③多组间比较用方差分析,两两比较用SNK检验。结果:①质粒转染肺泡巨噬细胞后糖皮质激素受体表达变化:转染组细胞总蛋白中糖皮质激素受体表达明显高于非转染组(3.75±0.25,1.21±0.16,P<0.01),转染组细胞核蛋白中糖皮质激素受体表达量与非转染组相近(1.15±0.12,1.09±0.11,P>0.05)。②脂多糖和地塞米松作用后核蛋白中糖皮质激素受体表达变化:脂多糖和地塞米松作用后4,8,12h转染组细胞核蛋白中糖皮质激素受体表达量分别为4.02±0.09,2.13±0.08,1.22±0.15,非转染组细胞核蛋白中糖皮质激素受体表达量分别为4.08±0.13,2.09±0.11,1.19±0.17,两组细胞核蛋白中糖皮质激素受体表达变化趋势一致,均于4h达到峰值,8h显著降低,12h达到最低,两组同时相点比较,差异不明显(P>0.05)。③脂多糖和地塞米松作用后细胞培养上清中细胞因子表达变化:转染组脂多糖和地塞米松作用后4,8,12h肿瘤坏死因子α表达分别为(32.16±3.99),(56.82±8.43),(73.34±9.97)ng/L,非转染细胞分别为(34.28±4.25),(59.82±9.65),(71.41±8.35)ng/L;转染组脂多糖和地塞米松作用后4,8,12h细胞上清中白细胞介素1β质量浓度分别为(67.57±18.37),(83.17±8.55),(97.55±8.27)ng/L,非转染分别为(62.23±15.64),(85.72±9.37),(99.07±9.25)ng/L。两组细胞上清中肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β表达随时间逐渐增加,均于12h均达到峰值,同时相点两组比较均无明显差异(P>0.05)。结论:①通过体外糖皮质激素受体基因转染可以有效地在肺泡巨噬细胞中过量表达外源性糖皮质激素受体,并且定位于胞质内。②地塞米松作用后,肺泡巨噬细胞核内糖皮质激素受体表达明显增加,但随后又出现表达下调现象。③体外基因转染后胞质中过量表达的外源性糖皮质激素受体不能发生核移位,所检测的均为内源性糖皮质激素受体。④通过基因转染而过量表达的外源性糖皮质激素受体,不能发挥正常的抑炎生物学活性。     

CD39/ATP轴调控哮喘小鼠肺泡巨噬细胞炎症小体活化的研究

目的 探讨CD39/ATP轴与哮喘肺泡巨噬细胞炎症小体活化之间的关系.方法 采用OVA致敏和激发模式建立Th2优势哮喘小鼠模型;采用LPS联合OVA致敏和OVA激发模式建立Thl7优势哮喘小鼠模型;将CD39抗体经鼻滴入至Th2优势哮喘小鼠,建立CD39阻断的哮喘小鼠模型.实验设立正常对照组、Th2优势哮喘组、Th17优势哮喘组以及CD39阻断组,每组小鼠各10只,共40只.分离各组小鼠肺泡巨噬细胞,采用流式细胞仪检测各组肺泡巨噬细胞CD39的表达,Western Blot检测巨噬细胞炎症小体分子NLRP3和caspase-1的表达,ELISA方法检测肺泡灌洗液中ATP、IL-1β的含量.结果 Th17优势哮喘组以及CD39阻断组小鼠肺泡巨噬细胞CD39表达明显下调,与之对应的是：炎症小体中NLRP3和caspase-1的蛋白表达上调和肺泡灌洗液中ATP、IL-1β含量显著增加.结论 哮喘小鼠肺泡巨噬细胞CD39表达与炎症小体活化之间存在着相关性,推测CD39/ATP轴在调控哮喘小鼠肺泡巨噬细胞炎症小体活化之中发挥重要作用.     

经鼻蝶入路垂体瘤切除术的应用效果及并发症初步研究

目的：探究经鼻蝶入路切除垂体瘤手术的临床应用效果,并观察围术期并发症的发生情况和治疗护理结果。方法择取2011年2月～2016年2月行经鼻蝶入路切除手术的垂体瘤病患16例,术后随访12个月,观察患者的治疗结果、并发症发生情况以及并发症的护理治疗结果。结果患者的手术时间为（87．19±11．05）min,术中出血量为（47．66±8．62）mL,住院时间为（14．15±3．33）日,1例（6．25％）患者发生脑脊液漏,1例（6．25％）患者发生尿崩,在7～14日的保守治疗后恢复正常。结论在显微镜下取鼻蝶为入路为患者切除垂体瘤可以取得显著的治疗效果,且术后并发症少,可谓是安全有效。