胚胎大鼠中枢神经系统神经干细胞的分离培养与观察

目的建立神经干细胞分离、培养、分化鉴定技术,观察神经干细胞增殖、分化特点.方法利用无血清培养和细胞克隆培养技术,从胚胎大鼠海马、纹状体、脊髓等区分离神经干细胞,进行体外扩增培养、传代、贴壁分化观察.采用免疫细胞化学、透射电镜检测技术,观察鉴定神经干细胞和分化的神经细胞.结果从胚胎大鼠海马、纹状体、脊髓等区分离的细胞具有增殖能力,可进行传代培养,获得的细胞克隆中有nestin表达阳性细胞,透射电镜观察见典型的干细胞特征和不对称分裂现象.贴壁分化后可以出现MAP2、NSE、GFAP和GC表达阳性的细胞.结论用上述方法分离培养的神经干细胞具有自我更新和增殖能力,并具有向神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞分化的潜能.     

氯通道ClC-2融合蛋白的原核表达及体外磷酸化

目的：检测ClC-2是否能被促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）磷酸化，为进一步研究其在细胞增殖、分化过程中的调控机制提供基础。方法：从含有家兔ClC-2cDNA的质粒pSPORT1中PCR扩增ClC-2胞浆内的羧基端DNA编码序列，构建重组载体pGEX-4T-1／ClC-2CT；重组质粒经酶切、测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21菌株；经异丙基β-D-硫代半乳糖（IPTG）诱导后，通过Gluthathion Sepharose4B亲和层析柱纯化融合蛋白；并行融合蛋白的体外磷酸化实验。结果：酶切、测序鉴定重组载体pGEX-4T-1／ClC-2CT构建正确，并纯化得到GST／ClC-2CT融合蛋白。而且该融合蛋白能被MAPK磷酸化，而GST不能被MAPK磷酸化。结论：氯通道ClC-2能被MAPK磷酸化。     

内皮细胞Rho及Rho激酶在肉瘤细胞向血管外游走过程中的作用

目的:探讨肉瘤细胞向血管外游走过程中内皮细胞Rho及Rho激酶的作用。方法: 利用肉瘤细胞向血管外游走的体外模型,观察肉瘤细胞的血管外游走状况;并测定肉瘤细胞向血管外游走过程中血管内皮单细胞层的电阻变化。结果:肉瘤细胞可以穿过血管内皮细胞游走至血管外;肉瘤细胞向血管外的游走能够引起单层血管内皮细胞的电阻下降;而内皮细胞Rho抑制剂(C3转移酶)及Rho激酶抑制剂(Y-27632)能够抑制肉瘤细胞向血管外的游走、并抑制游走过程中引起的血管内皮单细胞层电阻下降。结论: 内皮细胞Rho及Rho激酶可以通过诱导血管内皮细胞骨架蛋白的改变,来影响肉瘤细胞穿过内皮细胞间缝隙向血管外游走。     

外周血PSA、PSA mRNA联合检测在前列腺癌诊断中的临床应用

目的探讨利用外周血PSA、PSA mRNA联合检测诊断前列腺癌（PCa）的临床应用及意义。方法运用酶联免疫分析和巢式RT-PCR检测22例PCa、10例良性前列腺增生（BPH）患者,5例健康男性和5例健康女性外周血中PSA、PSA mRNA的情况。结果PCa患者血清PSA的水平与临床分期、Gleason评分有关（P〈0.05）,而与年龄无关（P〉0.05）;外周血PSA、PSA mRNA与临床分期、内分泌治疗有关（P〈0.05）,而与年龄、Gleason评分无关（P〈0.05）;22例PCa标本中PSA mRNA阳性表达15例,阳性率68%,10例BPH和10例阴性对照标本无表达。结论利用外周血PSA、PSA mRNA联合检测是一种早期发现PCa微转移,判断其临床变化过程、分期、预计复发和评价疗效的方法。     

肺癌细胞血管外游走过程中血管内皮通透性的变化

正肺癌血行转移是一个高度选择性的非随机生物学过程,包括肺癌细胞与血管内皮细胞及细胞外基质之间一系列复杂的生物学作用,其中肺癌细胞向血管外游走是肺癌血行转移的重要环节。为此,我们在体外模拟构建了肺癌细胞血行转移中的血管外游走过程,对肺癌细胞的血管外游走途径加以探讨。1材料与方法1.1实验所用细胞在包被有明胶的细胞培养皿上培养人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cell,     

肺癌细胞血管外游走状况的实验研究

正肺癌血行转移是一个高度选择性的非随机生物学过程,包括肺癌细胞与血管内皮细胞及细胞外基质之间一系列复杂的生物学作用。其中肺癌细胞向血管外游走是肺癌血行转移的重要步骤。为此,我们在体外模拟构建了肺癌细胞血行转移中的血管外游走过程,并对肺癌细胞的血管外游走状况加以探讨。     

北沙参的生物学与化学成分的研究进展

北沙参是伞形科植物珊瑚菜属珊瑚菜Glehnia littoralisFr.Schmidt ex Miq.的干燥根,别名海沙参、野香菜根、莱阳参等,是著名的中药材,具有养阴润肺、祛痰止咳等功效[1].北沙参始载于<神农本草经>,列为上品,明代<本草纲目>列为五参(人参、党参、玄参、丹参、沙参)之一.清代<本经逢原>把沙参分为南,北沙参二种,日:.沙参有二种,北者质坚性寒,南者体虚力微."今多用北沙参.北沙参幼嫩的茎叶均可食用,也是一种很有发展前途的保健蔬菜.     

正常前列腺间质细胞对前列腺癌细胞糖代谢水平的影响

目的:观察不同区正常前列腺间质细胞对前列腺癌细胞的作用,并探讨其对糖代谢水平的影响。方法:抽取2012-03~2013-11本院在激素下培养的非依赖性前列腺癌细胞DU145作为研究样本,正常前列腺间质细胞分别选择外周带组织以及移形带组织,经体外培养后抽取培养液上清液进行DU145细胞的培养,并采用MTT法测定不同区位下前列腺癌细胞生长增殖的抑制效果,并采用Western印迹法对前列腺癌细胞进行测定,分析不同区位下间质细胞对前列腺癌细胞糖化代谢水平的影响。结果:A组的前列腺癌细胞数目(125±14)×10~4个明显高于B组的(78±6)×10~4个与对照组的(57±3)×10~4个,B组的细胞数量明显高于对照组,组间比较差异具有统计学意义(P<0.05);A组的LDHA、PKM-2、PDH、HK-2水平显著高于B组与对照组,组间比较差异显著,具有统计学意义(P<0.05);B组的LDHA、PDH、HK-2水平显著低于对照组,组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:不同区带下的间质细胞对前列腺癌细胞的生长增殖以及糖代谢具有不同的作用,外周带间质细胞具有生长及糖代谢促进作用,而移行带间质细胞则起到一定的抑制作用。     

华支睾吸虫病患者血清IL-2、sIL-2R、TNF-α的测定及临床意义

ＩＬ 2、ｓＩＬ 2Ｒ和ＴＮＦ α是重要的炎症和免疫反应介质 ,参与多种感染性疾病的免疫反应。在华支睾吸虫病患者中这些细胞因子的水平及作用如何 ,国内外尚未见报道。为此 ,作者等测定 3 0例华支睾吸虫病患者血清中ＩＬ 2、ｓＩＬ 2Ｒ和ＴＮＦ α的含量 ,并初步探讨其临床意义。1　研究对象选择华支睾吸虫成虫冷浸抗原皮内实验阳性 ,且粪检虫卵阳性 ,但未经治疗并排除其它肝病的患者 3 0例 (为实验组 ) ,其中男性 19例 ,女性 11例 ,年龄最大者 65岁 ,最小者 2 2岁 ,平均年龄为 3 8.81± 12岁。每位患者空腹采静脉血 ,常规分离血清 ,保存于…     

丙型肝炎病毒感染人端粒酶逆转录酶基因转导后细胞的研究

用丙型肝炎病毒阳性血清感染人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因转导后人外周血单个核细胞(PBMC),以 期建立长期存活的HCV体外复制细胞模型。将hTERT基因导入正常人PBMC,丙型肝炎阳性血清直接感染转导后 的细胞,RT-PCR检测细胞内HCV RNA正、负链的表达。hTERT基因转入PBMC内,RT-PCR测定其在mRNA水平 有表达,丙肝阳性血清感染后,检测到细胞内HCV RNA正链持续出现,负链问断出现。hTERT基因转导后的。PBMC, 用丙型肝炎阳性血清感染后,病毒在细胞内持续存在并复制,初步建立了长期存活的HCV体外复制细胞模型。