CNTF在周围神经损伤及再生中的表达和分布

目的：探讨周围神经损伤及修复后神经干睫状神经营养因子（CNTF）的表达及分布，方法：以犬喉返神经损伤及修复再生为实验模型，采用原位杂交及免疫组织化学技术，结合图像分析技术检测CNTFmRNA及其蛋白反应产物的灰度及面积。结果：正常神经CNTF位于神经膜细胞中，神经切断后远段神经CNTF表达迅速下降，6周后消失，随着神经的再生CNTF表达逐渐增加，表达产物分布于包绕再生轴突及髓鞘的神经膜细胞质中，CNTF蛋白还出现于再生的轴突中，神经再生完成后，表达仍明显低于正常状态，近段神经干也出现类似远段的改变。结论：再生神经CNTF的表达呈下调型并与轴突再生有关，CNTF的重分布为神经再生提供合适的微环境。     

胶质细胞源性神经营养因子受体

胶质细胞源性神经营养因子能够促进多种神经细胞特别是多巴胺能神经元及运动神经元存活。胶质细胞源性神经营养因子的信号传递受体是RET受体酪氨酸激酶,受体α亚基是它与RET相互作用的媒介。胶质细胞源性神经营养因子生物学活性的发挥需要RET与受体α亚基同时存在。     

神经营养素激活的细胞内信号传导

神经营养素首先与细胞表面的Trk受体结合,诱导受体酪氨酸激酶激活。酪氨酸磷酸化的Trk通过与许多信号传递分子形成复合物而介导信号向下游传递。Ras的激活与神经营养素诱导的细胞分化密切相关。不依赖Ras的信号传导通路可能在神经元的存活、电兴奋性和细胞间粘连中具有重要作用。神经营养作用的特异性可能源自于神营养因子信号传递过程的差异。     

重组睫状神经营养因子对周围神经再生中多种细胞的作用

为了解重组睫状神经营养因子 ( CNTF)对周围神经再生中多种细胞的作用 ,用硅管套接切断的成年大鼠坐骨神经 ,在受损神经局部一次性给予重组睫状神经营养因子 :用免疫组织化学 ABC法结合计算机图像分析观测再生神经中 GAP-4 3、S10 0、CD68、MHC- 免疫反应阳性物质的变化。与生理盐水对照组相比 ,证明 CNTF组再生神经中上述四种物质显著增多。结果提示重组睫状神经营养因子能促进轴突的再生、Schwann细胞的迁入、单核细胞的渗出和活化     

周围神经再生时重组CNTF对受损神经元 STAT3表达和酪氨酸磷酸化的作用

目的 研究周围神经再生时，重组睫状神经营养因子(CNTF)对受损神经元JAK-STAT途径和酪氨酸磷酸化的作用。方法 用硅管套接切断的成年大鼠坐骨神经，术时在受损神经局部给予重组CNTF，用免疫组织化学ABC法结合计算机图像分析研究STAT3、磷酸化酪氨酸(PTyr)免疫反应阳性物质在L3～5段脊髓前角外侧核和L5脊神经节神经元中的分布和相对含量。结果 与生理盐水组相比，CNTF组脊髓前角外侧核神经元胞核STAT3和胞膜PTyr阳性物质的含量更高，脊神经节神经元胞浆和胞核，PTyr阳性物质的含量更高。结论 重组CNTF能激活和强化受损运动神经元的JAK-STAT途径，增强受损神经元的酪氨酸磷酸化。     

神经系统疾病的干细胞治疗

神经干细胞 (ｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ ,ＮＳＣｓ)的发现 ,改变了以往认为成年哺乳动物中枢神经系统神经元不能再生的认识 ,成为神经系统疾病的一种新治疗策略而备受关注。干细胞治疗包括了干细胞取材、体外扩增、调控分化、植入等基本过程。本文拟在啮齿类ＮＳＣｓ研究结果比较基础上 ,循着干细胞治疗的流程 ,对人ＮＳＣｓ取材、扩增、分化及应用研究概况等方面加以综述 ,以阐示神经系统疾病干细胞治疗的前景。1　人神经干细胞的来源人ＮＳＣｓ可有 3种来源 :胎脑组织、胚胎干细胞和成年脑组织。目前研究中所用的ＮＳＣｓ一般取材于…     

重组大鼠质粒pEGFP-GDNF的构建和在脊髓内表达的实验研究

采用RT PCR方法从大鼠胎脑组织总RNA中扩增出该基因的全序列cDNA ,并以融合蛋白方式克隆到增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)报告基因的真核表达载体中 ,成功构建了重组质粒 pEGFP GDNF在体表达载体。采用基因注射法将阳离子脂质体DC Chol和pEGFP GDNF基因混合后转染至大鼠胸段脊髓组织中 ,观察GDNF在大鼠脊髓中的表达。RT PCR结果表明注射局部GDNFmRNA表达增加。荧光显微镜下观察发现 ,注射局部灰质和白质神经细胞内均有较多绿色荧光蛋白表达。本研究结果提示 ,阳离子脂质体介导GDNF体内转基因的方法是可行的 ,EGFP可作为报告基因观察GDNF在体内的表达。     

睫状神经营养因子对大鼠去神经骨骼肌的营养作用

目的：通过测定SD大鼠坐骨神经离断后比目鱼肌（SOL）和趾长伸肌（EDL）肌纤维横截面积,观察持续给睫状神经营养因子（CNTF）对神经骨骼肌萎缩的影响。结果：SD大鼠坐骨神经离断后,持续给0．2mg/kg.d的CNTF20天后,损伤侧SOL和EDL肌纤维横截面积分别比实验对照组高27％（P＜0．01）和14％,SOL肌纤维横截面积比EDL增加的幅度大,而给予0．05mg/kg.d的CNTF20天后,动物肌纤维横截面积与实验对照组无明显差异。结论：CNTF可显著改善坐骨神经离断后SD大鼠骨骼肌的萎缩,并且CNTF效应的强弱与用药剂量和肌肉类型有关,0．2mg/kg.dCNTF作用明显强于0．05mg/kg.dCNTF,慢肌（SOL）比快肌（EDL）对CNTF更敏感。     

关于阿尔茨海默病的机制研究：Mint2基因在PC12细胞中的表达功能及其作用的初步研究

目的：获得高表达Mint2蛋白的PC12稳定表达株，观察Mint2蛋白对PC12细胞形态的影响，深入研究阿尔茨海默病的发病机制。方法：用PCR方法将Mint2基因亚克隆至真核表达载体pcDNA3．1A，构建真核表达载体peDNA3．1A—Mint2；采用脂质体lipofectamine 2000介导，将重组载体转染入PC12细胞，G418筛选稳定克隆；用RT—PCR和Westernblot检测外源基因Mint2在PCI2细胞中的转录及表达，并观察Mint2蛋白对PC12细胞形态的影响。结果：成功构建了真核表达载体pcDNA3．1-Mint2；并获得了稳定表达Mint2蛋白的PC12-Mint2基因工程细胞株；Mint2对PC12细胞具有明显的促分化和促胞体增大的神经营养作用。结论：Mint2可在PC12细胞中有效表达，目对PC12细胞形态有明显影响，这为进一步研究Mint2生物学功能及其作用机制奠定了基础。     

慢病毒介导碱性成纤维细胞生长因子在大鼠羊膜上皮细胞中的表达和分泌

目的 探讨以慢病毒作为载体,将带有分泌肽的人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因片段转入大鼠羊膜上皮细胞(AECs)中,构建能稳定表达并分泌bFGF多肽的细胞载体. 方法 取妊娠晚期SD大鼠的羊膜组织进行AECs原代培养,用免疫荧光细胞化学和RT-PCR法鉴定;构建包含人神经生长因子(NGF)分泌肽-bFGF编码基因的慢病毒载体,并行慢病毒包装,用病毒上清对传代大鼠AECs进行感染并筛选,经免疫荧光细胞化学、RT-PCR及酶联免疫吸附法(ELISA)检测基因转染效果,体外培养观察基因转染后的细胞生长活性;用基因转染细胞的培养上清对PC12细胞进行培养,检测所分泌bFGF多肽的生物学活性. 结果 所培养的大鼠AECs经鉴定能表达上皮特异性标志物CK-19、神经类细胞标志物巢蛋白(nestin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)以及细胞多能性标志分子SSEA-4、Oct-4、Nanog、Sox2、波形蛋白(vimentin)等;经感染并筛选后扩增培养的大鼠AECs在mRNA水平及多肽水平均能检测到目的 基因bFGF的表达,筛选后的转染细胞生长活性较未转染细胞明显提高,其培养上清能明显促进PC12细胞的生长和分化. 结论 用慢病毒作为载体能成功将bFGF基因转染入大鼠AECs中,所建立的基因修饰AECs能表达并分泌bFGF多肽,具有较强的生长活性及神经营养活性.