应用shRNA抑制Skp2表达对喉癌化疗的增敏作用研究

目的探讨shRNA(small hairpin RNA)抑制S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase associated protein 2,Skp2)基因表达对化疗后喉癌Hep-2细胞增殖和凋亡的影响。方法将喉癌细胞分为空质粒对照组、Skp2 shRNA组、Skp2 shRNA加化疗组、空质粒加化疗组及化疗组。应用脂质体将Skp2 shRNA转染到人喉癌Hep-2细胞,6 h后加入顺铂,培养48 h后流式细胞术检测Skp2、p27蛋白表达和细胞凋亡,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖变化,并进行比较。结果 Skp2 shRNA组与空质粒对照组比较,Skp2蛋白表达明显降低,p27蛋白表达明显增高,差异有统计学意义(P0.01,P0.05)。Skp2 shRNA加化疗组与空质粒加化疗组比较,各剂量顺铂(0 mg/L、1 mg/L、2 mg/L、3 mg/L)作用下细胞增殖抑制率均明显增高,差异均有统计学意义(P均0.01);与空质粒加化疗组(2 mg/L顺铂)比较,Skp2 shRNA加化疗组细胞凋亡率明显增加,差异有统计学意义(P0.01)。结论 Skp2 shRNA可选择性阻断细胞Skp2基因表达,联合化疗可能为喉癌的综合治疗提供新的途径。     

信号转导和转录激活因子3在喉癌组织中的表达及临床意义

目的：探讨信号转导和转录激活因子3（STAT3）及磷酸化STAT3（P—STAT3）在喉癌组织中的表达情况及活化STAT3蛋白表达与喉癌临床病理特征的关系。方法：用免疫组织化学法检测50例手术切除的喉癌组织（喉癌组）和10例癌旁正常组织（对照组）中STAT3及P—STAT3蛋白的表达。结果：喉癌组中有36例（72．0％）STAT3蛋白表达阳性,29例（58．0％）P—STAT3蛋白表达阳性,对照组均为阴性表达（均P〈0．01）。STAT3主要表达在细胞质,P—STAT3主要表达在细胞核内;STAT3及P-STAT3在低分化、临床分期较晚和有淋巴结转移的喉癌患者中阳性表达率高（P〈0．05或P〈0．01）。结论：喉癌组织中存在STAT3和P—STAT3的高表达,并与临床病理分期和淋巴结转移有关;STAT3的表达可作为判定喉癌生物学行为的一个指标。     

X-连锁凋亡抑制蛋白在顺铂诱导的喉癌Hep-2细胞凋亡中的作用

目的 探讨X-连锁凋亡抑制蛋白(x-linked inhibitor of apoptpsis protein,XIAP)在顺铂诱导喉癌Hep-2细胞凋亡中的作用和机制.方法 体外培养的Hep-2细胞,选择不同浓度的顺铂以不同时间作用于培养的细胞.利用结晶紫法、RT-PCR、流式细胞分析技术研究不同时间、浓度下细胞凋亡的发生率和XIAP、mRNA的表达及两者的相互关系.结果 正常状态下,Hep-2细胞为贴壁细胞,凋亡率低.顺铂作用后细胞凋亡率和XIAP表达水平发生明显变化,表现为XIAP表达水平的下降伴Hep-2细胞凋亡率的升高.不同药物浓度及不同时间点间相比较,细胞抑制率、XIAP的表达及凋亡率差异均有显著性意义.RT-PCR终产物分析表明,随着加药浓度的增加及药物作用时间的延长,XIAP的mRNA水平逐渐降低.相关性分析显示细胞抑制率、凋亡率与药物浓度及药物的作用时间成正相关,而XIAP的表达与药物浓度及作用时间呈负相关,XIAP的表达与调亡率呈负相关.结论 顺铂引起细胞死亡的主要方式是细胞凋亡.XIAP及mRNA在喉癌Hep2细胞中的表达与顺铂的作用浓度及作用时间有双相依赖性.通过诱发XIAP表达水平的降低使细胞的凋亡率升高是顺铂杀伤肿瘤的作用机制之一.     

喉癌中细胞凋亡与凋亡相关基因Survivin及p53的研究

细胞凋亡同肿瘤的发生、发展以及临床治疗关系密切。Survivin是凋亡抑制蛋白的一种,而p53是典型的抑癌基因,二者的表达异常可能是肿瘤发生、发展的重要因素。本研究应用DNA原位末端标记技术（Tunel）检测喉癌细胞凋亡指数（AI）,免疫组织化学方法检测喉癌组织Survivin、p53蛋白的表达,探讨喉癌组织中凋亡程度与临床病理参数及Survivin、p53表达的相关性,并对Survivin、p53在肿瘤发展中的作用进行探讨。     

JAK激酶抑制剂AG490联合顺铂对喉癌细胞STAT3信号转导通路的抑制作用

目的:探讨Stat3信号转导通路在药物治疗喉癌中的作用机制.方法:应用JAK激酶抑制剂AG490与顺铂(DDP)处理喉癌细胞系Hep-2细胞,Western Blot检测Stat3信号转导通路成员表达,MTT法检测细胞增殖状态,流式细胞技术检测细胞周期与凋亡.结果:AG490与DDP可以抑制喉癌细胞增殖,促进喉癌细胞凋亡(P=0.008),联合应用AG490与DDP可以起协同作用,喉癌细胞Stat3信号转导通路成员表达与活性明显下降.结论:JAK激酶抑制剂AG490与DDP联合应用可能为治疗喉癌提供了新的理论基础.     

有效抗生育低剂量雷公藤糖浆对佐剂性关节炎大鼠免疫功能的影响

为全面观察具有抗生育作用的低剂量雷公藤糖浆对机体免疫功能的影响,在研究其对正常小鼠免疫功能影响这一早期工作基础上,观察其对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis, AA)大鼠免疫功能的影响,实验结果表明,AA大鼠脾T淋巴细胞ConA诱导增殖反应和产生白细胞介素2(Interleukin2, IL-2)能力与正常对照组相比明显降低(P<0.01);AA大鼠腹腔巨噬细胞(macrophage, Mφ)产生白细胞介素1(interleukin 1, IL-)能力与正常对照组相比明显提高(P<0.01)。有效抗生育低剂量雷公藤糖浆对AA大鼠脾T淋巴细胞ConA诱导增殖反应和产生IL-2能力以及腹腔Mφ产生IL-1能力均无明显影响。上述结果提示有效抗生育作用的低剂量雷公藤糖浆对AA大鼠免疫功能无明显影响。     

凋亡抑制蛋白c-IAP1在喉癌中的表达及其与细胞凋亡的关系

目的检测c-IAP1在喉癌中的表达,并探讨其与喉癌细胞凋亡的关系及其在喉癌发生发展中的作用。方法应用免疫组织化学方法检测40例喉癌组织和8例癌旁正常喉黏膜组织c-IAP1的表达。用末端脱氧核苷酸转移酶介导的X-dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测喉癌细胞凋亡率。结果喉癌组织c-IAP1蛋白表达阳性率与癌旁正常喉黏膜组织比较有显著差异(P<0.01)。c-IAP1蛋白表达阳性率与患者年龄(P=0.297)、性别(P=0.906)、吸烟史(P=0.303)无明显关系。病理分级为Ⅰ级的喉癌组织中c-IAP1蛋白表达阳性率与病理分级为Ⅱ、Ⅲ级的喉癌组织比较,差异无显著意义,P>0.05;肿瘤临床T分期为Ⅰ-Ⅱ期喉癌组织中c-IAP1蛋白表达阳性率与临床T分期为3-4期喉癌组织比较,差异无显著意义P>0.05。c-IAP1蛋白表达 组、c-IAP1蛋白表达 组和c-IAP1蛋白表达 组AI值比较,有极显著差异性(F=30.715,P<0.01)。结论c-IAP1的表达可能与喉癌的发生发展密切相关,其表达抑制了喉癌细胞凋亡。     

有效抗生育低剂量雷公藤糖浆对佐剂性关节炎大鼠免疫功…

为全面观察具有抗生育作用的低剂量雷公藤糖浆对机体免疫功能的影响，在研究其对正常小鼠免疫功能影响这一早期工作基础上，观察其对佐剂性关节炎（ＡＡ）大鼠免疫功能的影响，实验结果表明，ＡＡ大鼠脾Ｔ淋巴细胞ＣｏｎＡ诱导增殖反应和产生白细胞介素２（ＩＬ－２）能力与正常对照组相比明显降低（Ｐ〈０．０１）；ＡＡ大鼠腹腔巨噬细胞（Ｍφ）产生白细胞介素１（ＩＬ－１）能力与正常对照组相比明显提高（Ｐ〈０．０１）。有效抗     

肽段在肿瘤治疗应用中的展望

近年来 ,随着组合化学 (CombinatorialChemistry)的发展 ,人们确定了许多肿瘤抗原及其优势决定簇。在此基础上设计的以小肽段为核心的肿瘤疫苗及治疗性药物 ,在体内外实验中取得了极大的成功 ,有些已经开始应用于临床。