梅毒螺旋体TprF蛋白B细胞表位的预测与鉴定

目的 预测和鉴定梅毒螺旋体(Tp) 膜蛋白TprF氨基端保守区(TprF^N)的优势B细胞表位,为深入研究梅毒多价表位疫苗提供依据。方法 从GenBank获取TprF^N的氨基酸序列,采用Mobyle、ABCpred和IEDB在线软件综合分析预测TprF^N的B细胞表位并人工合成多肽;表达重组蛋白TprF^N并经Western blot鉴定后免疫兔,获取血清并测定抗体效价;以TprF^N免疫兔血清、梅毒患者血清(设正常人血清和正常兔血清为阴性对照),间接ELISA测定预测的7条人工合成的B细胞表位多肽的免疫反应性和特异性。结果 软件综合预测TprF^N的P1 (43-62AA)、P2(57-71AA)、P3(81-88AA)、P4(89-103AA)、P5(125-138AA)、P6(231-251AA)、P7(268-279AA)可能为B细胞表位;表达一可溶性蛋白,WB鉴定为目的 蛋白,其免疫抗体效价为1∶12 800以上;ELISA结果显示,预测表位P1、P3与TprF^N免疫兔血清及梅毒患者血清均呈阳性反应,而与对照血清均不反应。结论 P1、P3为TprF潜在的优势B细胞表位。     

肺炎嗜衣原体临床株的分离鉴定与小鼠接种的初步观察

目的从临床标本中分离培养肺炎嗜衣原体,接种小鼠后对其进行初步观察。方法采用细胞培养法从临床标本中分离培养肺炎嗜衣原体;结合吉姆萨染色、间接免疫荧光、16SrDNA序列同源性和系统发育分析对其进行鉴定;建立动物模型对其毒力进行初步研究。结果从临床标本中分离的菌株NH001和NH002被鉴定为肺炎嗜衣原体,攻击小鼠后均产生明显肺部病理改变。结论成功分离培养出两株毒力较强的肺炎嗜衣原体菌株,为肺炎嗜衣原体相关研究提供了优质菌源。     

梅毒螺旋体Gpd重组蛋白的表达

随着基因工程技术的迅速发展和梅毒螺旋体(Tp)全基因序列的解析^[1],通过重组技术已制备多种重组Tp抗原,并被广泛应用于梅毒血清学检测的研究和试剂盒的开发^[2-5],但对于哪一种Tp蛋白抗原在临床各期梅毒的血清学诊断中具有更高的特异性和敏感性尚无一致观点。我们应用软件筛选分析,选取抗原性较强的Tp外膜蛋白GPd进行克隆表达,并以重组蛋白为包被抗原,建立间接ELISA法,评价其在梅毒血清学诊断中的应用价值。     

梅毒螺旋体致病相关蛋白的研究进展

苍白密螺旋体苍白亚种（Treponema．pallidumsubsp．pallidum,Tp）俗称梅毒螺旋体,是人类性传播疾病（STD）梅毒（syphilis）的病原体。梅毒是一种严重危害人类健康的性传染性疾病,其不仅严重损害人体的多个器官从而引起全身性损害,还可由母体经胎盘垂直传播给胎儿,引起早产、流产、     

苍白密螺旋体Tp0751黏附蛋白的表达、纯化及免疫反应性分析

目的 表达苍白密螺旋体(梅毒螺旋体)黏附蛋白Tp0751,纯化表达产物并进行免疫反应性分析,为探索Tp0751重组蛋白在梅毒致病过程中的作用奠定基础.方法 通过生物信息学分析,去除Tp0751信号肽序列,构建原核表达体进行诱导表达;Ni亲合层析柱纯化重组蛋白,Western-印迹检测其免疫反应性.结果 成功构建了PET-28a(+)-0751原核表达载体,经表达、纯化后获得了相对分子量约为26×103的融合蛋白,其表达产物占全菌总蛋白的＞30%,并且主要可溶性形式存在;Western-印迹检测其能与梅毒患者阳性血清发生特异性反应,具有良好的抗原性.结论 重组表达的Tp0751黏附蛋白为可溶性蛋白,且具有良好的免疫反应性,为进一步研究其在Tp0751黏附蛋白在梅毒致病过程中的作用和其生物学功能奠定了基础.     

梅毒螺旋体Gpd-IL-2融合基因原核表达重组体的构建、表达及免疫活性的初步研究

目的 以梅毒螺旋体(Tp)外膜蛋白基因Gpd及细胞因子佐剂IL-2为目的基因,融合构建原核表达干组体pET28a/Gpd-IL-2,表达鉴定并进行免疫活性的初步分析,为进一步开展Tp疫苗动物实验打下基础. 方法 定向克隆构建原核表达重组体pET28a/Gpd-IL-2进行诱导表达;Ni索和层析纯化重组融合蛋白后,Western blot 检测其免疫反应性;免疫新西兰兔评价重组蛋白的免疫原性. 结果 成功构建原核表达重组体pET28a/Gpd-IL-2,表达鉴定及纯化获得相对分子量约为60 kDa的融合蛋白;Western blot检测其能与梅毒阳性血清发生特异性结合,说明两融合基因之间的表达相互没受到太大影响;纯化的Gpd-IL-2重组蛋白免疫新西兰兔能诱导其产生特异性免疫应答,ELISA检测免疫血清中特异性抗体滴度在1∶6400以上. 结论 Gpd-IL-2融合基因重组蛋白具有良好的免疫活性,这为进一步开展Tp疫苗动物实验条件的优化打下一定的基础.     

海毒螺旋体外膜蛋白Gpd的基因型分析及其重组蛋白的免疫原性鉴定

目的构建梅毒螺旋体（Treponema pallidum，Tp）外膜蛋白Gpd基因的原核表达载体，检测其表达产物的免疫原性，并比较梅毒螺旋体各菌株Gpd基因序列的同源度。方法 从Tp Nichols株基因组模板中PCR扩增Gpd基因，与 GenBank登录的序列做blast比较，定向克隆构建原核表达重组体pET28b( )-Gpd，转入大肠杆菌ril表达菌，SDS-PAGE分析重组蛋白的表达，Western-blot检测重组蛋白的免疫原性。结果 载体上所连目的基因片段序列与GenBank登录的Nichols株Gpd基因序列完全一致,同其他病原性密螺旋体菌株登陆序列比较同源度为98%～100%。SDS-PAGE检测诱导产物显示有一Mr约为41 kDa的特异蛋白带，免疫印迹技术检测其能与梅毒阳性标准血清反应。结论 Tp原核表达重组体pET28b( )-Gpd成功构建，且能够在ril表达菌中融合表达，为进一步研究该蛋白的生物学功能奠定了一定的实验基础。     

梅毒患者血清IL-1β、IL-8表达水平与血清反应素滴度的相关性分析

目的 探讨不同临床分期梅毒患者血清白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和白介素-8(interleukin-8,IL-8)表达水平与梅毒血清反应素滴度的相关性。 方法 收集40例健康体检者血清、120例梅毒患者血清(分为一期梅毒组、二期梅毒组和隐性梅毒组),采用酶联免疫吸附试验检测各组血清中IL-1β、IL-8 水平,比较各组间IL-1β和IL-8表达水平的差异,采用梅毒甲苯胺红不加热血清试验(toluidine red unheated serum test,TRUST)检测梅毒患者血清反应素滴度,根据TRUST滴度将梅毒患者分为高滴度组和低滴度组,比较各组间IL-1β和IL-8表达水平的差异。 结果 各组血清IL-1β、IL-8表达水平差异有统计学意义(P＜0.05),其中二期梅毒组血清IL-1β[15.10(10.63,19.16)]pg/ml和IL-8[108.67(69.96,139.79)]pg/ml明显高于一期梅毒组、隐性梅毒组和正常组;高滴度组IL-8[86.03(62.25,144.94)]pg/ml明显高于低滴度组[57.21(52.16,86.13)]pg/ml,差异有统计学意义(P＜0.05),但高滴度组IL-1β[11.12(7.18,15.96)]pg/ml与低滴度组[8.43(6.93,14.05)]pg/ml比较差异无统计学意义(P＞0.05);二期梅毒患者血清IL-8水平与反应素滴度呈正相关(r=0.625,P＜0.05)。 结论 梅毒患者血清IL-1β和IL-8在一期梅毒、二期梅毒和隐性患者中均呈高水平表达,且IL-1β和血清IL-8表达水平变化与梅毒的病程进展有一定的相关性。     

重组梅毒螺旋体黏附素在小鼠模型中的免疫原性及免疫保护性研究

目的观察重组梅毒螺旋体(Tp)黏附素Tp0751(rTp0751)、Tp0136氨基端(rTp0136N)、Tp0435(rTp0435)诱生C57BL/6小鼠适应性免疫应答水平及免疫后抑制Tp在小鼠体内播散情况,为筛选梅毒疫苗候选分子提供依据。方法表达和纯化重组蛋白rTp0751、rTp0136N和rTp0435。将C57BL/6小鼠随机分为PBS对照组、rTp0751组、rTp0136N组、rTp0435组,分别以PBS、rTp0751、rTp0136N及rTp0435免疫各组小鼠3次；ELISA检测各组小鼠免疫血清特异性IgG抗体水平；流式细胞术(FCM)检测末次免疫后2周小鼠脾细胞胞内白细胞介素-4(IL-4)与干扰素-γ(IFN-γ)含量；实时荧光定量PCR(qPCR)检测Tp攻击6周后小鼠心、脾、脑组织中Tp的DNA载量。结果各免疫组小鼠血清特异性IgG抗体随免疫时间增加而逐渐升高并于首次免疫第6周达到峰值。FCM检测结果显示各免疫组淋巴细胞胞内CD4＋IFN-γ＋与CD8＋ IFN-γ＋含量均高于PBS对照组(P＜0.01),CD4＋T细胞产生IL-4水平均极低。qPCR检测结果显示,在脾脏、心脏和脑组织中,rTp0751与rTp0136N组Tp-DNA载量均低于PBS对照组(P＜0.05),rTp0435组与PBS对照组之间无明显差异。结论rTp0751、rTp0136N、rTp0435均具有良好的免疫原性,Tp0751、Tp0136N有望为梅毒候选疫苗分子。