梅毒螺旋体重组蛋白Tp0463的表达与抗原性鉴定

目的表达梅毒螺旋体（Tp）重组蛋白Tp0463（rTp0463）并鉴定其抗原性,为进一步探讨其在梅毒血清学诊断和免疫保护中的作用奠定基础。方法 PCR扩增Tp0463基因,构建原核表达重组体pET-28a（＋）/Tp0463,转化宿主菌诱导表达重组蛋白,Ni-NTA亲和层析法纯化蛋白,Westernblot鉴定表达产物的抗原性。结果成功构建了原核表达重组体pET-28a（＋）/Tp0463,经诱导高效表达了一分子量大约为16KDa的重组蛋白,以包涵体表达形式为主,纯化蛋白的纯度〉90%;Westernblot结果显示纯化蛋白能被梅毒患者混合血清特异性识别。结论高效表达了rTp0463,该重组抗原有良好的抗原性。     

核内M-CSF对NIH3T3细胞内微丝的影响

目的建立M-CSF核内稳定表达的NIH3T3细胞系,探讨核内M-CSF对细胞骨架的影响。方法经脂质体介导核内定位表达重组体pCMV/M-CSF转染NIH3T3细胞,G418筛选后,用Rt-PCR、免疫细胞化学鉴定其在真核细胞中的表达及定位分布,用考马斯亮蓝染色细胞微丝测定M-CSF进入细胞核后对细胞骨架的影响。结果RT-PCR结果显示转染pCMV/M-CSF的NIH3T3细胞能稳定表达M-CSFmRNA;免疫细胞化学结果显示表达的M-CSF定位于NIH3T3细胞核。考马斯亮蓝染色结果显示转染pCMV/M-CSF的NIH3T3细胞内微丝数量减少,排列紊乱。结论核内M-CSF可引起NIH3T3细胞内微丝数量减少,排列紊乱。     

梅毒螺旋体粘附素Tp0751重组菌影的构建与鉴定

目的 构建梅毒螺旋体(Tp)粘附素Tp0751的重组大肠埃希菌菌影(E.coli bacterial ghosts,EBG),为深入评价其在抗Tp感染中的潜在免疫保护作用奠定基础。方法将含有噬菌体PhiX174裂解基因E的质粒pHH43转化E.coli DH5α,42 ℃温控诱导使其形成EBG并计算裂解效率,用琼脂糖DNA电泳和透射电镜(TEM)鉴定EBG。构建含有裂解基因盒E-box、膜锚定序列E′-linker及Tp0751目的基因的原核双表达重组质粒pET28a-E′-Tp0751-E-box,28 ℃诱导重组E.coli BL21表达Tp0751并用Western Blot鉴定;42 ℃诱导形成重组EBG(rEBG),计算裂解效率并用DNA电泳和TEM鉴定。结果构建的EBG裂解率为98.13%,DNA电泳未观察到DNA条带,TEM显示绝大部分细菌都裂解成缺乏胞浆成分的细胞空壳并保持活菌基本形态。rEBG在28 ℃时高效表达重组Tp0751蛋白,且仅与梅毒患者血清特异性结合; 42 ℃下其rEBG裂解率为96.37%,电泳和TEM鉴定结果与EBG的相似。结论成功构建表达Tp粘附素Tp0751的rEGB,其所表达目的蛋白具有良好免疫反应性。     

蝓贝爽咽梅对口咽部常见病原菌的杀菌效果及毒性实验观察

目的　检验蝓贝爽咽梅中所含蛞蝓、浙贝母等中草药对口腔咽喉常见病原菌的杀菌性能及可能毒性。方法　以不同浓度混悬液对金黄色葡萄球菌、乙型链球菌、甲型草绿色链球菌、白色念珠菌作用几个时间段 ;草珊瑚含片作为对照。按毒性安全性评价标准对浸制乌梅所用中草药浸制液进行毒性评价。结果　 1∶10稀释的蝓贝爽咽梅药液对以上几种病原菌作用 10min杀菌率分别达 98.74 %、10 0 %、10 0 %、5 1.70 %。同浓度稀释的草珊瑚药液作用 10min的杀菌率分别为 6 2 .33%、5 7.4 4%、6 2 .4 7%、4 4.5 6 %。蝓贝爽咽梅药液与草珊瑚药液对 4种细菌杀菌效果用统计学分析对比有显著性差异 (P <0 .0 0 0 1)。毒性试验验证蝓贝爽咽梅无毒性。结论　蝓贝爽咽梅对口腔咽喉常见病原菌有较强的杀菌效果 ,杀菌性能优于草珊瑚含片 ;对皮肤粘膜无刺激性 ,对人体无毒副作用     

梅毒螺旋体融合双价DNA疫苗的构建及其免疫活性研究

目的 构建含有梅毒螺旋体Gpd和Tp92抗原编码基因的真核表达重组体,并检测其在兔体内的免疫应答效果。方法 定向克隆构建双基因融合真核表达重组体pcDNA3.1(+)/Gpd-Tp92,用免疫组化技术检测其在HeLa细胞中的表达;同时将其与先期构建的pcDNA3.1(+)/Gpd、pcDNA3.1(+)/Tp92真核表达重组体分别免疫新西兰兔,ELISA检测免疫兔特异性抗体产生水平和脾细胞IFN-γ诱导水平,MTT法检测兔脾细胞增殖水平。结果 pcDNA3.1(+)/Gpd-Tp92在HeLa细胞中能有效表达。新西兰兔分别接种3种核酸疫苗后,均能产生特异性抗体,第3次免疫后2周抗体最高滴度均可达1:1024及以上,免疫后兔脾细胞受相应蛋白刺激有明显增殖反应,细胞培养上清中IFN-γ水平显著升高。检测指标均显著高于空质粒对照组和空白对照组(P<0.05)。3组核酸疫苗组抗体诱导水平差异无统计学意义,但Gpd-Tp92融合核酸疫苗组刺激机体引发特异性淋巴细胞增殖能力较之两单基因核酸疫苗组有明显提高。结论 梅毒螺旋体真核表达重组体pcDNA3.1(+)/Gpd-Tp92的成功构建及对新西兰兔产生强特异免疫应答的有效刺激,为梅毒DNA疫苗的研究奠定一定的实验基础。     

浅谈现代科技革命对病原生物学研究的影响和推动

分子生物学、免疫学、细胞生物学等基础学科的发展,使病原生物学各病原体的研究已不仅仅停留在器官、细胞水平,而是深入到蛋白质、基因水平,这也极大地推动了病原生物学在诊断、治疗、致病机制、预防和流行病学方面研究的扩展与深入。     

梅毒螺旋体黏附素Tp0751 核酸菌影的构建及免疫原性研究

目的:构建梅毒螺旋体(Tp)黏附素Tp0751 的重组真核大肠埃希菌菌影(EBG)并检测其在免疫鼠中的免疫原性,为探讨新型梅毒疫苗奠定基础。方法:构建pcDNA3.1(+) / Tp0751 真核表达载体,将其装载入已构建的空EBG 中,形成重组核酸菌影pcD/ Tp0751-BG,计算装载率;将核酸菌影转染鼠源性巨噬细胞RAW264.7,Western blot(WB)鉴定目的蛋白表达。将雌性BALB/ c 鼠随机分为A(PBS)、B(空EBG)、C(空pcDNA3.1)三个对照组和D(pcD/ Tp0751)、E(pcD/ Tp0751-BG)、F(pcD/ Tp0751-BG+rTp0751)三个实验组,各组间隔两周肌注免疫共三次,检测特异性血清IgG 及生殖道黏膜SIgA、小鼠脾细胞增殖水平和分泌IFN-γ水平。结果:重组真核质粒对菌影的装载率为76.1%;WB 显示此转染细胞能有效表达重组目的蛋白。D、E、F 实验组小鼠特异性血清IgG 与生殖道SIgA 效价均随免疫次数增加而增加,各时间点均显著高于三个对照组(P<0.01),于末次加免后第8 周达到峰值,此时F 组IgG 与SIgA 效价分别为1 :102 400 与1 :12 800;首次加免2 周后,E、F 组均显著高于D 组(P<0.01);末次加免2 周后,F 组显著高于E 组(P<0.01)。末次加免后第8 周,D、E、F 组的刺激指数(SI)值与IFN-γ水平均分别显著高于三个对照组(P<0.01);E、F 组均分别显著高于D 组(P<0.01);F 组分别均高于E 组(P<0.05)。结论:Tp0751 真核质粒菌影具有良好的免疫原性,在小鼠体内诱生了有效的系统和黏膜的体液应答以及系统细胞免疫应答;异源加免较同源加免免疫效果更好。     

梅毒螺旋体外膜蛋白Gpd在Hela细胞中的表达及鉴定

目的 构建梅毒螺旋体（Tp）外膜蛋白甘油磷酸二酯磷酸二酯酶基因（Gpd）的真核表达载体peDNA3．1（＋）-Gpd，鉴定其在Hela细胞的表达，为开展TpDNA疫苗动物实验打下基础。方法 用PCR从TpNichols株基因组中扩增Gpd基因，构建真核表达重组质粒pcDNA3．1（＋）-Gpd，脂质体介导转染入Hela细胞，以免疫组化及跳tern-blot检测在Hela细胞中的表达。结果 双酶切及DNA测序显示重组质粒含有1059bp的目的基因片段，读码框架正确，无突变。该重组质粒在Hela细胞能有效表达分子量为41kDa的目的蛋白，重组蛋白能-9梅毒螺旋体阳性血清反应。结论 构建的质粒peD-NA3．1（＋）-Gpd成功地在体外真核细胞中表达。     

基于心电-脉搏波的心血管疾病识别研究

为实现心血管疾病的早期筛查,降低心血管疾病临床检测的成本。本研究基于上肢脉搏波传导速度（PWV）及脉搏波相关血液动力学基础理论,采集了总计51人的脉搏波与心电信号数据,提取了包括3种PWV和脉搏波特征参数总计16个特征参数,将不同的PWV与脉搏波特征组成3个样本特征数据集,分别建立了基于K近邻学习（KNN）和支持向量机（SVM）的心血管疾病识别模型。KNN模型分类准确率为66.28%,SVM模型分类准确率为84.3%,并通过对比不同PWV对模型性能的影响,确定了用于血管评估的最优脉搏波传导速度pwvm。研究表明基于SVM建立的分类模型对心血管疾病识别有一定可靠性,为低成本的心血管疾病早期筛查提供了新思路,也为穿戴式心血管系统监测提供了基础。     

基于BP神经网络的胰岛素评价预测模型

在糖尿病的研究和治疗中,血糖异常不仅会严重影响机体生理功能,也会损伤机体组织,所以研究胰岛素评价预测模型对维持血糖平衡具有重要的临床意义。为理性地认识胰岛素对血糖的调节作用,本文通过食蟹猴口服葡萄糖耐量试验(OGTT)获得血糖-胰岛素代谢系统的相关数据,经过对数据的筛查和预处理,选择胰岛素功能评价指标作为胰岛素特征参数,根据食蟹猴的糖耐量水平,建立基于BP神经网络胰岛素预测模型,得到的胰岛素评价指标预测值与真值有较好的相关性。该模型利用血糖值和生理参数评价胰岛素分泌情况,用以评估和预测胰岛素在血糖调节过程中的作用,为糖耐量评估提供参考信息,辅助糖尿病诊断。