梅毒螺旋体纤连蛋白结合蛋白Tp0136前炎症活性的研究

目的 初步研究梅毒螺旋体纤连蛋白结合蛋白Tp0136潜在的前炎症活性。方法构建重组质粒pET-28a/Tp0136并诱导其表达目的蛋白;将不同浓度(1、2、5、10 μg/mL)的rTp0136分别刺激THP-1源性巨噬细胞,ELISA法分别检测其产生前炎症细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的水平;并同时用二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)预先处理巨噬细胞,检测相应细胞因子分泌量。结果成功构建了pET-28a/Tp0136重组质粒,并诱导表达和纯化出rTp0136;重组蛋白能诱导巨噬细胞产生IL-1β、IL-6和TNF-α,并且呈浓度和时间依赖性;重组蛋白刺激经PDTC预处理后的巨噬细胞,其IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌水平分别降至32%、35%和27%。结论rTp0136可诱导巨噬细胞产生前炎症细胞因子,该过程可能受NF-κB调控。     

螺旋体脂蛋白免疫调节机制研究进展

梅毒、莱姆病和细螺旋体病是威胁人类健康的主要螺旋体病。然而,对此类疾病的免疫机制尚未充分阐明。螺旋体通过各种结构,例如脂多糖(LPS)、表面脂蛋白和糖脂与宿主相互作用。尽管螺旋体抗原如LPS和糖脂可能在其感染时有助于炎症反应,但梅毒螺旋体(Tp)和伯氏疏螺旋体(Bb)缺乏LPS。脂蛋白是表达于所有螺旋体的最丰富的蛋白,往往决定螺旋体与环境作用的方式。脂蛋白可促进炎症反应、调节固有免疫应答和适应性免疫应答,并有助于螺旋体粘附在宿主中或中肠上,或逃避免疫系统。然而,大多数螺旋体脂蛋白功能尚未明确。本文综述螺旋体脂蛋白在免疫逃逸和免疫激活方面的免疫调节作用,将有助于阐明螺旋体病的固有免疫致病机制,以及与螺旋体疾病疫苗发展和螺旋体病炎症反应有关的适应性免疫机制。     

护理学专业微生物学二段式多元化教学模式的实践

突破传统的医学微生物学教学模式,确立以专业特点为主体、以临床应用结合为核心的教学理念,以课堂教学模式改革为突破口,开展＂二段式多元化＂教学模式的探索,促进护理学专业学生主动学习的兴趣和综合能力的提高.     

RIPK1/RIPK3依赖的细胞程序性坏死在清除兼性胞内菌感染中的作用

程序性坏死是一种与炎症相关的细胞死亡模式,与依赖半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶调控的凋亡不同,这种细胞死亡模式受受体互作蛋白激酶(RIPK)1和3调控。在兼性胞内菌感染过程中,宿主会运用多种策略使隐藏在细胞内的兼性胞内菌重新暴露于抗菌机制面前。许多研究报道表明宿主细胞的程序性坏死是其中一种重要的策略,有助于兼性胞内菌感染的清除。在本文中,我们将探讨在宿主细胞内发生的由RIPK1/RIPK3途径介导的程序性坏死机制,以及其在清除兼性胞内菌感染中的意义。     

感染依赖性抗原Tp0470的鉴定及在梅毒诊断中的应用

为筛选新型梅毒诊断抗原,以改进梅毒早期诊断及预后判断血清学诊断方法,本研究在鉴定Tp0470蛋白为感染依赖性抗原的基础上,建立基于Tp0470的ELISA方法,检测468份临床血清标本,并与TPPA、LZ-ELISA及RPR结果比较,初步评价该蛋白的诊断价值;同时对Tp0470-ELISA A₄₅₀值与RPR滴度进行相关性分析。结果显示:Tp0470-ELISA的灵敏度和特异度分别为95.32%和95.66%,ROC分析其AUC值为0.907。与TPPA、LZ-ELISA及RPR结果相比,Tp0470-ELISA的符合率分别为95.51%(kappa=0.907)、94.87%(kappa=0.897)、88.67%(kappa=0.771)。Tp0470-ELISA的A₄₅₀值与RPR滴度的相关系数为0.38,P=0.96。以上结果表明基于Tp0470蛋白的ELISA在梅毒血清学诊断中具有较高的潜在应用价值。     

梅毒螺旋体重组蛋白Tp0608的表达与鉴定

目的表达梅毒螺旋体(Tp)重组蛋白Tp0608(rTp0608)并鉴定其抗原性,为深入探讨其在梅毒血清学诊断中的价值奠定基础。方法 PCR扩增Tp0608全长基因,构建原核表达重组体pET-28a(+)/Tp0608,转化宿主菌诱导表达rTp0608,Ni-NTA亲和层析法纯化蛋白,SDS-PAGE分析蛋白表达形式与纯度,Western blot鉴定rTp0608的抗原性。结果原核表达重组体pET-28a(+)/Tp0608在宿主菌内经诱导表达了分子量大约为38 kDa的重组蛋白,以包涵体表达形式为主,纯化蛋白的纯度>95%;Western blot结果显示纯化蛋白能被梅毒患者混合血清特异性识别。结论 PET-28a(+)表达载体高效表达了rTp0608,该重组抗原有良好的抗原性。     

基于梅毒核酸疫苗pcD/Tp92的不同接种策略

目的 评估基于梅毒核酸疫苗pcD/Tp92的各接种优化策略对新西兰兔梅毒螺旋体(Tp)皮肤感染的免疫保护效应.方法 核酸疫苗pcD/Tp92采用2次肌内注射免疫或肌内注射初免鼻饲加强的免疫方式结合黏膜佐剂CpG ODN及Tp92重组蛋白,分别或联合免疫新西兰兔.酶联免疫吸附法(ELISA)检测各接种策略组免疫期间(0~8周)兔特异性抗体产生及变化水平,免疫8周后兔鼻咽部、阴道黏膜SIgA产生水平及兔脾细胞IL-2、γ干扰素(IFN-γ)诱导水平,噻唑蓝法(MTT)检测兔脾淋巴细胞增殖水平.记录各组在初次免疫后第10周兔皮下接种Tp标准株感染后接种部位感染早期皮损的变化.结果 采用pcD/Tp92核酸疫苗肌内注射初免,CpG-ODN联合Tp92重组蛋白抗原鼻饲新西兰兔加强免疫的接种策略组(C2组)分别与pcD/Tp92疫苗肌注组(A2组),pcD/Tp92疫苗肌注初免,pcD/Tp92鼻饲加强免疫组(B1组)或结合黏膜佐剂CpG ODN联合免疫的接种策略组(B2组)相比,既能促进pcD/Tp92核酸疫苗在兔体内免疫期间(8周)诱生更高特异性抗体水平(C2组:1.825±0.175;A2组:1.372±0.322;B1组:0.893±0.297;B2组:1.294±0.124;P<0.05),IL-2(C2组:154.7±14.6;A2组:112.3±13.4;B1组:76.6±21.5;B2组:97.3±18.7;P<0.05)及IFN-γ(C2组:277.4±24.4;A2组:232.8±25.3;B1组:165.7±22.6;B2组:211.3±24.6;P<0.05)分泌水平,以及更高的T细胞增殖分化水平(SI C2组:3.57±0.24;A2组:3.08±0.22;B1组:2.12±0.14;B2组:2.88±0.18;P<0.05),还能刺激更高的黏膜特异性SIgA抗体,导致最低Tp感染部位皮损Tp阳性率(6.67%)及溃疡病灶形成率(6.67%)从而达到有效的保护作用.结论 pcD/Tp92核酸疫苗肌内注射初免,CpG ODN联合Tp92重组蛋白鼻饲加强免疫的接种策略能在新西兰兔体内诱导最强的黏膜免疫和免疫保护效应.     

梅毒螺旋体Tp0453重组蛋白的表达及在梅毒血清学诊断中的初步应用

目的克隆、表达梅毒螺旋体（Tp）外膜蛋白Tp0453，建立间接ELISA法，探讨其在梅毒血清学诊断中的应用。方法构建重组质粒pQE32／Tp0453，IPTG诱导表达，SDS-PAGE和免疫印迹鉴定表达结果；Ni-NTA亲和层析法纯化重组蛋白，间接酶联免疫吸附试验（ELISA）检测人血清中特异性IgG抗体。结果成功构建了重组质粒pQE32／Tp0453；SDS-PAGE检测诱导产物显示有一分子量约为32000的特异蛋白带，免疫印迹检测其只与Tp IgG抗体具有阳性反应；重组蛋白用作ELISA包被抗原检测Tp阴阳性参比血清，特异度和灵敏度均为100％；检测患者血清中特异性IgG抗体结果与TPPA法符合率为98．2％。结论表达的Tp043重组蛋白具有较好的免疫反应活性，可望用于梅毒的血清学诊断。     

梅毒螺旋体Tp0453重组蛋白的表达纯化及免疫活性研究

目的表达梅毒螺旋体膜蛋白Tp0453(28-288 aa),纯化表达产物并进行免疫活性分析,为探索Tp0453重组蛋白在梅毒血清学诊断中的应用提供实验依据。方法通过生物信息学分析,挑选Tp0453抗原的优势表位,进行诱导表达;以W estern-b lot和间接ELISA法检测重组蛋白的免疫反应性;用重组蛋白免疫新西兰家兔,评价其免疫原性。结果纯化后获得了相对分子量约为32×103的融合蛋白。W estern-b lot检测其能与梅毒患者阳性血清发生特异性反应;同时以重组蛋白为包被抗原建立间接ELISA法,检测梅毒诊断试剂参考血清,其阴阳性符合率均为100%。用纯化的Tp0453重组蛋白免疫新西兰家兔,能诱导其产生特异性免疫应答,ELISA法测定免疫血清中特异性抗体滴度在1∶1280以上。结论基因重组表达的Tp0453重组蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性,为进一步研究其在梅毒血清学诊断中的应用和其生物学功能奠定了基础。