敌敌畏对斑马鱼的遗传毒性和生殖毒性作用表现

目的考察敌敌畏对斑马鱼遗传和生殖毒性作用表现。方法 斑马鱼成鱼分别暴露于敌敌畏0,0.95,2.85和4.65 mg.L-1溶液中,在持续染毒7和14 d后,测定斑马鱼性腺指数,显微镜下观察雄鱼精子质膜完整性;血细胞微核实验测定微核率。结果 染毒7 d后,与正常对照组相比,敌敌畏4.65 mg.L-1组斑马鱼的雌鱼性腺指数、雄性精子数量和精子质膜完整性百分比显著降低(P<0.01),血细胞微核率显著增高(P<0.01);敌敌畏2.85 mg.L-1组雄性斑马鱼精子质膜完整性百分比也显著下降(P<0.01)。染毒14 d后,与正常对照组相比,敌敌畏0.95,2.85和4.65 mg.L-1组斑马鱼的雌鱼性腺指数,雄鱼精子数量和精子质膜完整性百分比显著减少(P<0.01),敌敌畏4.65和2.85 mg.L-1组血细胞微核率显著增高(P<0.01)。敌敌畏4.65和2.85 mg.L-1染毒14 d组的雌鱼性腺指数、雄鱼精子数量和精子质膜完整性百分比及血细胞微核率显著高于同浓度7 d染毒组(P<0.01)。结论 敌敌畏对斑马鱼的遗传和生殖毒性作用及其表现说明斑马鱼有望成为遗传和生殖毒性评价模型。     

毒物及化学战剂快速检测的最佳动物模型

化学武器扩散和国际恐怖活动日益猖獗,毒物形式多种多样,且有由高浓度向低浓度,急性毒性向慢性毒性方向发展的趋势,引起了国际社会的强烈不安。为此世界各国愈发重视毒物、化学战剂快速检测技术及其防治药物的研究和开发。急需灵敏、高效、快速检测的动物模型进行评价。斑马鱼是近年来发展起来的脊椎模式生物。斑马鱼卵体及幼鱼透明,荧光染色或使用其它标记物标记可使细胞观察得更清楚。可观察到原肠期的细胞运动、脑区的形成和心跳等胚胎发育情况,发育异常的突变体也很容易被鉴别出来。全胚组织标本制作及全胚原位杂交都可以在胚胎上实施。斑马鱼胚胎发育快（从受精到孵出大约3 d）,且源于同一母体的胚胎是同步发育的,易于大量收集特定阶段的同期胚胎材料。斑马鱼具有其他生物无可比拟的优势：① 斑马鱼核苷酸序列分析基本完成,中枢神经系统、内脏器官、血液以及视觉系统在分子水平上与人有很高的同源性;② 疾病表达的相关基因与许多脊椎动物相同;③ 全年产卵、体积小,作为胚胎发育模型有丰富的研究背景;④ 使用斑马鱼胚对母体无任何影响,早期身体透明,可对发育过程直接观察;⑤ 斑马鱼胚胎和幼鱼对毒物、药物非常敏感,极微量就会有反应,最小检出量在ng[DK]·L-1级;⑥ 简便易行,只需将被检测物质放入养殖胚胎的水中或快速注射;用量很少;测试周期短;测试样本数可以很大,可以作为毒物、化学战剂的高通量筛选,以确保统计学意义上的显著性。为此,经济合作发展组织(OECD)将斑马鱼列为了健康毒性和环境毒性检测的标准鱼类。国际标准组织(ISO)已将斑马鱼推荐为河水毒性实验鱼种并制定了相应的标准(ISO07346)。利用转基因斑马鱼检测毒物或化学战剂。将毒物或化学战剂作用斑马鱼,找到差异表达基因,将靶基因及其启动子和增强子序列与荧光蛋白基因连接构建转基因斑马鱼,当毒物或化学战剂作用该斑马鱼后,荧光会变化从而显示毒性。国外已有利用芳烃受体、亲电子受体、金属等效应元件与荧光蛋白基因连接构建转基因斑马鱼,当转基因斑马鱼遇到相应物质就会发射荧光,用于检测相应环境毒物,被誉为环境检测“哨兵”和“生态灯泡”。毒物和化学战剂检测及识别能力研究,着重发展灵敏度高、识别能力强、假阳性率低、准确、特异、快速的检测和报警技术。基于斑马鱼上述特点,利用斑马鱼进行毒物和化学战剂的毒性评价,更具优势,是毒物和化学战剂毒性检测的新技术。     

细胞穿透肽介导外源物质入胞转运研究进度

细胞穿透肽(cell-penetrating peptides,CPP)是一类能够携带外源物质进入细胞的多肽,因其结构和功能的独特性和实用性,近20年里在生物医学领域得到了长足的发展.目前CPP向体内和体外输送物质的方法逐渐成熟.在基础研究领域,已成为研究细胞内分子相互作用的有用工具;在应用方面,CPP药物已进入临床前、临床Ⅰ和Ⅱ期试验,在肿瘤、中枢神经系统疾病和心血管疾病的治疗中显示出明显优势.本文对CPP的发展历程、分类、入胞机制和应用等做一综述.     

核酸染料Goodview、Gelred和Gelsafe对斑马鱼胚胎发育的毒性作用

目的 研究核酸染料Goodview、Gelred和Gelsafe对斑马鱼胚胎发育的影响.方法 将受精后时间(hpf)为3hpf的斑马鱼胚胎随机分组,分别加入0、0.01％、0.02％、0.04％、0.08％、0.16％和0.32％浓度的Goodview、Gelred和Gelsafe 3 种核酸染料,观察3种核酸染料对斑马鱼胚胎发育的影响,记录胚胎48 hpf心率,计算72和96 hpf孵化率,96 hpf死亡率及畸形率;同时观察了4、24和48 hpf 3种染料穿透胚胎膜的情况.结果 Goodview、Gelred和Gelsafe 3种核酸染料半数致死浓度(LC50)分别为0.037％、0.092％和0.130％.3种核酸染料0.04％～0.32％浓度组的胚胎48 hpf心率、72和96hpf孵化率、96hpf死亡率和畸形率与对照组相比都存在显著差异,3种核酸染料96 hpf死亡率、72和96 hpf孵化率还存在剂量-效应关系.Gelsafe0.08％～0.32％浓度组部分幼鱼出现心囊水肿和脊柱弯曲,0.32％Gelred组染毒后还出现眼点发育不全,Goodview 0.04 ～0.16％浓度组部分幼鱼除心囊水肿和脊柱弯曲外,还出现尾部发育不全等畸形表征.0.01％ Goodview4 hpf能穿透胚胎膜进入胚胎内,随着浓度和时间增加,胚胎内荧光增强.而Gelred和Gelsafe 0.32％浓度下4 hpf未发现明显荧光蓄积点,24hpf和48 hpf仍未发现.结论3种核酸染料对斑马鱼胚胎发育有毒性,随着使用浓度的增加毒性增加.     

17β-雌二醇对斑马鱼初期胚体节形成影响的研究

目的探讨17β-雌二醇(E2)对斑马鱼初期胚胎的毒性作用。方法用1．0、2．5、50、7．5、10、25、50μmol／L的E给受精后3h的斑马鱼胚染毒，进行形态学观察及原位杂交。结果胚胎在受精后48h，5．0、7．5、10、25、50μmol／L试验组的死亡率分别是0％、36％、6．4％、100％、100％。在7．5、10μmol／L染毒组出现脊柱弯曲、心囊水肿、血流停滞等畸形。使用MyoD探针．观察到体节数的减少及MyoD基因表达明显减弱。结论E2有致死、引起体节生成障碍，致使脊柱弯曲等致畸形作用。而且体节生成障碍可能是由于E2对MyoD基因的影响所致。     

铅诱发雏鸡红细胞核浓缩

目的给新生鸡雏进行铅染毒，观察铅引起的红细胞核浓缩情况。方法设立标准饲料对照组、标准饲料染毒组、低Ca对照组以及低Ca染毒组。染毒后的不同时间点，测定血铅浓度及细胞核浓缩情况。结果标准饲料铅染毒组第2天血铅浓度达到最大值57．7μg/g；低钙铅染毒组血铅浓度第4天达到最大值37．2μg／g；标准饲料染毒组与低Ca染毒组同时在第4、6、8天观察到显著的核浓缩，核浓缩在染毒第6天达到高峰。约20％红细胞核浓缩，同时两染毒组的无核红细胞显著增加。观察低Ca对照组与低Ca染毒组的红细胞DNA电泳，低Ca染毒组DNA呈梯凳状，被分割成大小不等的DNA片段。结论铅直接作用于鸡红细胞，引起细胞核浓缩。预示红细胞核浓缩是脱核的一个过程。     

冰片对斑马鱼胚胎发育的安全性评价

目的:研究冰片对斑马鱼胚胎发育的影响。方法:以斑马鱼胚胎为模型,二甲基亚砜为助溶剂,制备冰片溶液(33.6、67.1、134.3、268.5、537.0、1 074.0μmol/L,即冰片①、②、③、④、⑤、⑥组),并且设空白对照组,以受精后小时(hpf)为时间段,对3hpf胚胎进行暴露染毒处理,每24 h更换1次冰片溶液,分别在8、24、48、72、96 hpf时间点以显微镜观察班马鱼胚胎发育形态,测定24 hpf斑马鱼胚胎自主抽动次数、48 hpf心率、孵化率、畸形率和死亡率。实时荧光定量聚合酶链反应法检测斑马鱼胚胎Sepn1基因表达的情况。结果:与空白对照组比较,冰片④、⑤、⑥组斑马鱼胚胎48 hpf出现脊柱弯曲、心囊水肿、卵黄囊水肿,游泳异常的毒性症状;冰片②、③、④、⑤、⑥组斑马鱼胚胎24 hpf自动抽动次数减少;冰片④、⑤、⑥组斑马鱼胚胎24 hpf心率减少;在48 hpf时,冰片①、②、③、④、⑤、⑥组斑马鱼胚胎孵化率降低;在72 hpf时,冰片②、③、④、⑤、⑥组斑马鱼胚胎孵化率降低;在96 hpf时,冰片⑤、⑥组斑马鱼胚胎孵化率降低;冰片④、⑤、⑥组斑马鱼胚胎96 hpf畸形率增加;24 hpf后,冰片④、⑤、⑥组斑马鱼胚胎死亡率降低;冰片④组Sepn1 mRNA表达增强,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:高剂量冰片对斑马鱼胚胎发育有明显影响,且呈现一定的时间依赖性。建议婴幼儿、孕妇和哺乳期的妇女长时间或大剂量使用含冰片的药物均应谨慎。     

核酸染料Goodview、Gelred和Gelsafe对斑马鱼胚胎发育的毒性作用

目的研究核酸染料Goodview、Gelred和Gelsafe对斑马鱼胚胎发育的影响。方法将受精后时间（hpf）为3hpf的斑马鱼胚胎随机分组,分别加入0、0.01%、0.02%、0.04%、0.08%、0.16%和0.32%浓度的Goodview、Gelred和Gelsafe 3种核酸染料,观察3种核酸染料对斑马鱼胚胎发育的影响,记录胚胎48 hpf心率,计算72和96 hpf孵化率,96 hpf死亡率及畸形率;同时观察了4、24和48 hpf 3种染料穿透胚胎膜的情况。结果 Goodview、Gelred和Gelsafe 3种核酸染料半数致死浓度（LC50）分别为0.037%、0.092%和0.130%。3种核酸染料0.04%～0.32%浓度组的胚胎48 hpf心率、72和96 hpf孵化率、96hpf死亡率和畸形率与对照组相比都存在显著差异,3种核酸染料96 hpf死亡率、72和96 hpf孵化率还存在剂量-效应关系。Gelsafe 0.08%～0.32%浓度组部分幼鱼出现心囊水肿和脊柱弯曲,0.32%Gelred组染毒后还出现眼点发育不全,Goodview0.04～0.16%浓度组部分幼鱼除心囊水肿和脊柱弯曲外,还出现尾部发育不全等畸形表征。0.01%Goodview 4 hpf能穿透胚胎膜进入胚胎内,随着浓度和时间增加,胚胎内荧光增强。而Gelred和Gelsafe 0.32%浓度下4 hpf未发现明显荧光蓄积点,24hpf和48 hpf仍未发现。结论 3种核酸染料对斑马鱼胚胎发育有毒性,随着使用浓度的增加毒性增加。     

人源表皮生长因子变构体对实验性阿尔采默病的治疗作用

目的：为了赋予hEGF新的特性，对hEGF结构进行改造，构建hEGF变构体，使其能够穿越细胞膜并且能够通过血脑屏障，为脑神经退行性疾病的治疗研究提供可能性。结果：成功地构建了hEGF变构体的分泌型表达载体，并在原核细胞中完成了有生物活性的可溶性表达。对其生物活性进行研究，实验结果表明，本实验表达的hEGF变构体能够穿越细胞膜及通过血脑屏障。动物行为学测定，Morris水迷宫实验表明hEGF变构体能够缩短AD模型小鼠及自然老化小鼠的潜伏期，穿梭箱实验表明hEGF变构体能够减少AD模型小鼠及自然老化小鼠被电击的时间，证明能够改善AD模型小鼠及自然老化小鼠的学习记忆能力；海马神经干细胞检测，hEGF变构体能够增加AD模型小鼠海马齿状回nestin的表达量；GFAP的表达量减少；Brdu的参入量明显增加。证明具有促进AD模型小鼠海马神经干细胞增殖作用；正电子断层扫描（positron emission tomography，PET）实验，治疗AD模型大鼠脑的亮区比未治疗的AD模型鼠分布面积大，证明能显著增加葡萄糖代谢。结论：hEGF变构体对实验性阿尔采默病具有治疗作用。hEGF的改构从而使hEGF有了新的实用性研发前景。     

人蛋白C突变体转基因小鼠的建立及乳腺表达

蛋白C（PC）是体内重要的抗凝物质，对静脉血栓扩大、动脉血栓形成、脓毒血症、内毒素血症和弥散性血管内凝血等均具有预防和治疗作用。近年来研究发现蛋白C还具有抗炎作用。血栓疾病及其并发症严重威胁着人类的健康，每年约有1300万人死于血栓疾病及其并发症。脓毒症的死亡率高达30—50％，全球每天有1400人死于严重脓毒症，每年其治疗费用多达76亿美元。所以，进行PC的研究不仅具有重要的医学意义，还具有广阔的市场前景：目前，治疗用PC多为血浆中提取的浓缩剂，人血浆的PC含量较低（3～5mg／L），从血浆中提取PC数量有限，且PC浓缩剂仍存在病毒污染的可能性。因此，利用生物反应器生产重组人蛋白C（rhPC）成为人们关注的热点。