风湿宁对风寒湿痹证CIA大鼠模型滑膜组织中TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨风湿宁对风寒湿痹证胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型滑膜组织中Toll样受体4/核转录因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路的影响及相关的作用机制。方法:SPF级雌性Wistar大鼠随机分为6组,分别为正常组,模型组,阳性药组(来氟米特片,2.33 mg·kg-1),风湿宁低、中、高剂量组(9.12,18.24,36.48 g·kg-1),每组9只。除正常组外,其余各组大鼠采用风寒湿外感致病因素刺激,结合牛Ⅱ型胶原乳化剂诱导的方法,制备风寒湿痹证CIA大鼠模型。造模成功后,各组大鼠给予相应药物灌胃干预,每日1次,连续4周。观察药物对大鼠关节肿胀度,酶联免疫吸附测定法(ELISA)血清类风湿因子(RF),环瓜氨酶肽(ACPA),白细胞介素(IL)-1β,IL-10,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)滑膜组织中TLR4,髓样分化因子88(My D88),NF-κB酶抑制蛋白α(IκBα),NF-κB mRNA和蛋白表达的情况。结果:与正常组比较,模型组CIA大鼠模型的关节肿胀度明显升高,血清RF,ACPA,IL-1β,TNF-α含量显著升高,IL-10含量显著降低,滑膜组织中TLR4,My D88,IκBα,NF-κB mRNA和蛋白表达显著升高(P0.05,P0.01);与模型组比较,风湿宁低、中、高剂量组可明显降低风寒湿痹证CIA大鼠模型的关节肿胀度与血清RF,ACPA,IL-1β,TNF-α含量,升高血清IL-10水平,下调滑膜组织中TLR4,My D88,IκB-α,NF-κB mRNA与蛋白表达量(P0.05,P0.01)。结论:风湿宁可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路,从而抑制IL-1β,TNF-α的产生,起到治疗RA的作用,且其疗效与药物剂量有一定相关性。     

中西医结合治疗宫内节育器致月经过多临床观察

目的:观察化瘀清热固冲汤合肾上腺色腙片治疗放置宫内节育器致月经过多的临床疗效。方法:将68例患者按随机数字表分为3组:中西药组26例,用化瘀清热固冲汤合肾上腺色腙片治疗;中药组22例,用化瘀清热固冲汤治疗;西药组20例,用肾上腺色腙片治疗。分别用药3个月经周期,停药后随访观察3个月经周期。结果:总有效率中西药组为96%,中药组为68%,西药组为60%,中西药组与中药组及西药组比较差异均有显著性(P<0.05);中医证候总积分,中西药组与中药组、西药组比较,差异均有显著性(P<0.05);月经量积分,中西药组与中药组、西药组比较,差异具有显著性(P<0.05)。结论:中西药联合治疗宫内节育器致月经过多,能显著减少月经量,改善心烦、口渴、大便干结、小便短黄、经行腹痛等瘀热证候,具有疗效优势。     

黄芪桂枝五物汤对阳虚寒凝型骨关节炎大鼠免疫相关细胞因子的影响

目的:研究黄芪桂枝五物汤对阳虚寒凝型骨关节炎大鼠CD4~+/CD8`+及相关细胞因子的作用。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、塞来昔布组、黄芪桂枝五物汤7 d组和黄芪桂枝五物汤14 d组,每组10只。除正常组外,各组大鼠均予冷固法复合外界环境刺激的方法复制阳虚寒凝型骨关节炎模型,共6周。造模结束前,各给药组分别灌胃给药,黄芪桂枝五物汤7 d组或14 d组分别给药7 d或14 d(30 g·kg-1),塞来昔布组给药7 d(20.82 mg·kg-1),正常组及模型组予生理盐水灌胃7 d,至造模结束。造模结束后,免疫组化法检测各组大鼠膝关节软骨诱导型一氧化氮合酶(i NOS),Ⅱ型胶原及转化生长因子-β1(TGF-β1)表达,取大鼠血液流式细胞法检测CD4~+/CD8~+,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组大鼠血液中白细胞介素-4(IL-4),C-反应蛋白(CRP)及胰岛素生长因子(IGF),低氧诱导因子1α(HIF-1α)含量。结果:与正常组比较,模型组CD4~+及CD4~+/CD8~+降低(P0.05),各用药组与模型组比较,黄芪桂枝五物汤14 d组和塞来昔布组CD4+及CD4+/CD8+升高(P0.05)。与正常组比较,模型组IL-4,CRP,HIF-1α及i NOS表达升高(P0.05),Ⅱ型胶原及TGF-β表达降低(P0.05);与模型组比较,各用药组Ⅱ型胶原及TGF-β表达升高(P0.05),IL-4水平降低(P0.05),黄芪桂枝五物汤14 d组CRP,i NOS及HIF-1α表达降低(P0.05),塞来昔布组CRP及i NOS(P0.05);各用药组之间,与塞来昔布组比较,黄芪桂枝五物汤7 d组和14 d组Ⅱ型胶原表达降低(P0.05),黄芪桂枝五物汤7 d组i NOS表达升高(P0.05)。IGF水平在各组无显著性差别。结论:黄芪桂枝五物可以调节机体免疫低下状态,并通过调节细胞因子IL-4及下游细胞因子i NOS,HIF-1α,TGF-β1等细胞因子水平的变化,对骨关节炎软骨细胞起正向修复作用。     

基于转录组测序的山茱萸次生代谢生物合成相关基因的挖掘

为探讨山茱萸中环烯醚萜等次生代谢产物合成的遗传基础,采用新一代高通量测序技术对其果实进行转录组测序,共获得得96 032条unigenes,平均长度590.53 bp;其中共有35 478条unigene能被NR,Swissprot,COG,GO,KOG,Pfam和KEGG等7个公共数据库注释。通过对注释所得的unigene进行KEGG代谢通路的分析发现,共有84个unigene与环烯醚萜类成分的生物合成有关;487条unigene参与山茱萸其他次生代谢相关物质代谢调控。研究发现,共有153条unigene参与山茱萸次生代谢产物的氧化/羟基化;72条unigene参与次生代谢产物的糖基化。该研究首次对山茱萸转录组进行了分析,并获得了山茱萸环烯醚萜类等次生代谢生物合成相关的候选基因,为山茱萸的分子生物学研究提供了丰富的数据资源,也为后续探讨候选基因的功能奠定了基础。     

黄芪桂枝五物汤对骨关节炎大鼠血管新生的作用

目的:研究黄芪桂枝五物汤对阳虚寒凝骨关节炎(osteoarthritis,OA)模型大鼠血管内皮生长因子(VEGF)及相关因子的影响。方法:60只SPF级SD大鼠随机分为正常组,模型组,塞来昔布组(20.82 mg·kg~(-1)),黄芪桂枝五物汤低、中、高剂量组(3.24,6.48,12.96 g·kg~(-1))。除正常组外,其余各组通过冷固法复合寒冷环境刺激42 d,复制OA模型。造模后,给药组分别灌胃相应药物,正常组和模型组给同等剂量蒸馏水,每天1次,连续28 d。末次给药24 h后,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清中VEGF,前列腺素E_2(PGE_2),转化生长因子β_1(TGF-β_1)水平;免疫组化染色检测左膝关节滑膜和软骨内VEGF表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测右膝关节滑膜白细胞介素-17(IL~(-1)7)和VEGF mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组血清、软骨和滑膜组织中VEGF表达均显著性升高(P0.01),同时,血清中PGE_2和TGF-β_1,滑膜组织IL~(-1)7水平均显著升高(P0.01);与模型组比较,各用药组血清、软骨和滑膜组织中VEGF表达均显著性降低(P0.05),同时,血清中PGE_2和TGF-β_1水平,滑膜组织中IL~(-1)7水平亦显著降低(P0.05);各用药组间比较,黄芪桂枝五物汤高剂量组膝关节滑膜组织IL~(-1)7较塞来昔布组升高(P0.05),黄芪桂枝五物汤中、高剂量组VEGF较塞来昔布组显著升高(P0.01),其余各组间比较均无显著性差异。结论:黄芪桂枝五物汤可能通过减轻骨关节炎大鼠血管新生相关细胞因子PGE_2和TGF-β_1等的表达而作用于VEGF,从而抑制膝骨关节处血管新生,减轻软骨损伤。     

独行菜磷酸甲羟戊酸激酶LaPMK基因克隆、生物信息学分析及原核表达

目的从独行菜Lepidium apetalum中克隆萜类合成途径关键酶磷酸甲羟戊酸激酶(phosphomevalonate kinase,PMK)基因,进行序列分析和原核表达。方法根据独行菜转录组数据中La PMK基因序列设计特异性引物,克隆得到La PMK基因的开放阅读框(open reading frame,ORF),构建p ET32a-La PMK原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中用IPTG诱导表达La PMK融合蛋白。结果 La PMK基因ORF全长为1 518 bp(Genbank注册号KT004541),编码505个氨基酸。生物信息学分析结果显示La PMK蛋白没有跨膜区,不含信号肽,位于细胞质中,含有GHMP激酶家族特异的N末端和C末端的保守结构域。系统进化树结果显示La PMK蛋白与芜菁的PMK蛋白具有92%的序列相似性,亲缘关系较近。构建p ET32a-La PMK原核表达载体,在大肠杆菌中成功表达La PMK融合蛋白。结论克隆了La PMK基因,建立其稳定的原核表达体系,为La PMK蛋白纯化、抗体的制备,进一步研究La PMK基因在独行菜萜类合成途径中的作用奠定了基础。     

老年人常用认知筛查量表及其应用现状

介绍常用的老年人认知筛查工具,并说明认知筛查量表操作的注意事项,对常用的老年人认知筛查工具进行比较,以期为研究者选用适合的量表做一参考。     

靶向分化相关基因NDRG1的siRNA表达载体的构建

水平降低.结论:成功构建了针对NDRG1基因的siRNA表达载体.     

基于网络药理学和分子对接探讨大花红景天在2型糖尿病合并阿尔茨海默病中应用的潜在分子机制

目的 利用网络药理学结合分子对接探讨大花红景天（Rhodiola crenulata, RC）在2型糖尿病（type2 diabetes mellitus, T2DM）合并阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease, AD）中应用的潜在分子机制。方法 2022年3月-8月通过多个公共数据库筛选T2DM和AD的靶基因、RC的有效活性成分及靶点。筛选出RC抗T2DMAD的主要活性成分和核心基因,并对关键基因进行基因本体功能富集分析以及京都基因和基因组数据库通路富集分析。采用AutoDock Vina进行分子对接并计算结合能。结果 共得到5 189个T2DM相关基因和1 911个AD相关基因,交集结果显示T2DM-AD相关基因有1 418个。RC的活性成分有48个,相应的靶基因有617个。RC与T2DM-AD的交集基因共有220个。RC抗T2DM-AD的主要活性成分包括山奈酚、毡毛美洲茶素、大花红天素等,调控的关键基因有ESR1、EGFR、AKT1等,主要富集于低氧诱导因子-1信号通路、雌激素信号通路和血管内皮生长因子信号通路等。RC的主要活性成分与关键基因的分子对接结合能均小于-...     

环状RNA CDR1as在小鼠巨噬细胞泡沫化中的作用机制

目的 研究环状RNA CDR1as在小鼠巨噬细胞泡沫化中的表达水平及其作用机制.方法 体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞,分为对照组和不同浓度氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导组,分别用完全培养基和25、50、100μg/mL的ox-LDL对RAW264.7细胞进行诱导.采用油红O染色观察细胞内脂质情况,实时...