免疫活性细胞回输前后HCV滴度及C区和E2区CTL表位变化

目的：观察免疫活性细胞回输前后慢性丙型肝炎患者外周血丙型肝炎病毒（HCV）滴度及C区和E2区CTL表位的变化情况。方法：定量PCR检测4例接受免疫活性细胞回输的慢性丙型肝炎患者外周血HCV滴度，并利用分子克隆、基因测序和计算机辅助分析技术分析不同时间点不同分离株CTL表位的变化情况。结果：4例患者在接受免疫活性细胞回输前后血清ALT水平存在不同程度波动，其差值从第2例患者的58到第1例患者的198，同时HCV滴度也发生了较大变化，其变化倍数从第3例患者的25．37倍到第4例患者的882．35倍，其对数转换值的波动幅度在1．40－2．94之间。在免疫活性细胞回输后4例患者外周血HCV滴度均出现了不同程度的一过性下降。在全部观察期内HCV C区和E2区的CTL表位编码区均未出现明确的变化。结论：机体免疫攻击状态发生改变时可引起患者体内丙型肝炎病毒滴度的变化，但不伴随目前观察的CTL表位编码基因的改变。     

阳离子脂质体对反义寡核苷酸抗乙型肝炎病毒作用的促进

目的 :考察阳离子脂质材料 3β [N (N′,N′ 二甲基胺乙基 )胺基甲酰基 ]胆固醇 (3β [N (N′,N′ dimethylaminoethane) carbamoyl]cholesterol,DC chol)与反义寡核苷酸 (antisenseoligodeoxynucleotide ,asODN)的结合能力及asODN阳离子脂质体的细胞毒性和抗病毒活性。方法 :以DC chol从水相中萃取asODN的萃取率评价不同条件下DC chol与asODN的作用力 ;通过四唑盐比色法检测含DC chol的阳离子脂质体对HepG2 2 .2 .1 5的细胞毒性 ;以酶联免疫法 (ELISA)检测细胞上清培养液中HBsAg和HBeAg的含量 ,考察不同asODN阳离子脂质体的抗病毒活性。结果 :当正负电荷比 >0 .6时 ,DC Chol能有效的从水相中萃取asODN (萃取率 80 %～ 1 0 0 % ) ;碱性条件和强离子 (Na+ /Cl-)的存在不利于DC Chol与asODN的作用 ;DC chol阳离子脂质体具有一定的细胞毒性 ,在低质量浓度时 (0 .84～ 2 6 .94mg·L-1 )脂质体的细胞毒性与DC chol浓度成正比 ;当asODN在 1 .2 5～ 5 .0 0 μmol·L-1时 ,其抗病毒活性与剂量相关 ;脂质体可提高asODN对乙肝病毒的抗病毒活性 ,其中阳离子脂质体对asODN抗病毒活性的促进作用较明显 (从 6 0 %到 95 % )。结论 :表面修饰DC Chol阳离子脂质体能有效地促进asODN的抗乙肝病毒活性。     

中国南北两城市乙型肝炎病毒基因型与血清型的构成差异

目的对我国南北两城市530份乙型肝炎(乙肝)病毒(HBV)进行血清型和基因型分型,以了解HBV基因型和血清型分布的特点和差异。方法 对黑龙江省哈尔滨市和广东省廉江市530份乙肝病毒表面抗原(HBsAg)阳性血清进行HBV DNA基因扩增,并对扩增产物直接测序,分析HBV血清亚型和基因型。结果 哈尔滨和廉江市HBV血清型以adrq为最多,分别为87.2％和73.5％,其次为adw2,分别为12.0％和25.7％,其分布差异有非常显著意义(P<0.001);两市HBV基因型均以C型为主,分别为87.8％,73.2％,其次为B型,分别为12.2％和26.1％,其分布差异有非常显著意义(P<0.001),在廉江市仅有1例D型,1例B、C混合型。结论我国南北两城市HBV血清亚型和基因型的构成较为单纯,均只有两个类型,其比例构成差异有非常显著意义。     

PKH26荧光标记大鼠内皮祖细胞在慢性损伤肝内迁移示踪

背景:课题组早期研究发现门静脉回输内皮祖细胞可以改善肝纤维化,但是将其应用于临床尚有很多问题需要解决,如回输路径、细胞的分布情况等.目的:探讨PKH26荧光标记的大鼠内皮祖细胞在慢性肝损伤肝内迁移过程中的示踪.设计、时间及地点:细胞学体内实验,于2008-08/2009-02在北京大学人民医院肝病研究所完成.材料:SPF级健康成年SD大鼠100只,由解放军军事医学科学院动物中心提供.红色荧光染料PKH26为SIGMA公司产品.方法:取16只大鼠,贴壁法分离培养内皮祖细胞,并行PKH26体外标记.实验设立3组:正常对照组4只大鼠,不进行任何干预;二甲基亚硝胺组40只大鼠,通过腹腔注射二甲基亚硝胺10 mg/kg建立肝纤维化模型:四氯化碳组40只大鼠,通过四氯化碳/橄榄油灌胃建立肝纤维化模型.造模后,二甲基亚硝胺组、四氯化碳组大鼠经尾静脉注入1 mL PKH26标记的内皮祖细胞悬液(1×106个细胞).主要观察指标:PKH26标记率和细胞存活率,通过荧光共聚焦显微镜观察大鼠损伤肝内内皮祖细胞的迁移及CD31的表达.结果:流式细胞仪检测结果显示PKH26标记的内皮祖细胞阳性率为99%,荧光显微观察发现锥虫蓝染色后PKH26标记细胞存活率均>90%.输注1 d后,两种慢性肝损伤模型中的肝内均可见PKH26标记阳性的细胞出现在肝小叶内,并且随时间延长阳性细胞数增加.PKH26标记阳性的细胞主要存在于沿纤维分布的血管内皮和肝小叶内的窦内皮,且血管内皮可见CD31/PK26双阳性细胞.结论:PKH26可以在体外成功标记大鼠内皮祖细胞,并在损伤肝内示踪.     

北京某综合三甲医院对COVID-19疑似和非疑似患者进行SARS-CoV-2核酸筛查结果分析

目的 以北京综合三甲医院为例,对新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疑似患者和非疑似患者的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸筛查结果进行分析,为COVID-19的实验室诊断提供实验依据.方法 SARS-CoV-2核酸检测的咽拭子标本来自2595例患者,COVID-19疑似患者81例,非疑似患者2514例.咽拭子标...     

CD37基因在不同肿瘤细胞中的表达

目的了解CD37基因在正常组织、肝细胞、肝癌组织和各种肿瘤细胞中的表达情况。方法运用RT-PCR方法检测睾丸组织、肝癌组织、癌旁组织和11种肿瘤细胞株和正常肝细胞中CD37的表达。结果CD37在MCF-7、HeLa、MEL-ED1、Huh7、HLE、NCI-H446、BGC-823、SK-N-SH、LS-174-T、CNE、Eca-109和L-02细胞株中均不表达;而在睾丸组织、肝癌组织、癌旁组织、Burkitt's淋巴瘤细胞Naml-wa和肝癌细胞HepG2中均表达。结论CD37的表达可能与某些肿瘤如Burkitt's淋巴瘤和肝细胞癌的发生有关。     

肿瘤特异性肿瘤/睾丸抗原在肝癌组织中的表达

目的 研究7种主要肿瘤/睾丸(CT)抗原MAGE-1、MAGE-3、MAGE-4、MAGE-10、NY-ESO-1、SSX-2、SCP-1在原发性肝细胞癌(HCC)患者癌组织中的表达、编码基因的变异状况及与临床指标的关系。 方法 收集30例肝癌患者的癌和癌旁组织,采用特异性引物逆转录聚合酶链反应检测7种CT抗原的表达,并对PCR产物进行测序分析。结果 在30例HCC患者中,MAGE-1、MAGE-3、MAGE-4、MAGE-10、NY-ESO-1、SSX-2、SCP-1在癌组织中的表达率分别为66.7％、70.0％、20.0％、36.7％、40.0％、33.3％和33.3％,而癌旁没有表达。癌组织中至少表达1种、2种和3种CT抗原的阳性率分别为90.0％、70.0％和53.5％。我国肝癌表达的7种CT抗原编码基因与国外报道的相比,同源性非常高。MAGE-10和SCP-1的表达与甲胎蛋白的水平相关,MAGE-3和SSX-2表达与平均年龄相关。 结论 7种CT抗原在HCC患者癌组织中均有表达,阳性率为20.0％-70.0％,其编码基因序列高度保守。一些CT抗原的表达与临床指标存在相关性。     

PKH26荧光标记大鼠内皮祖细胞在慢性损伤肝内迁移示踪

背景：课题组早期研究发现门静脉回输内皮祖细胞可以改善肝纤维化，但是将其应用于临床尚有很多问题需要解决，如回输路径、细胞的分布情况等。 目的：探讨PKH26荧光标记的大鼠内皮祖细胞在慢性肝损伤肝内迁移过程中的示踪。 设计、时间及地点：细胞学体内实验，于2008-08/2009-02在北京大学人民医院肝病研究所完成。 材料：SPF级健康成年SD大鼠100只，由解放军军事医学科学院动物中心提供。红色荧光染料PKH26为SIGMA公司产品。 方法：取16只大鼠，贴壁法分离培养内皮祖细胞，并行PKH26体外标记。实验设立3组：正常对照组4只大鼠，不进行任何干预；二甲基亚硝胺组40只大鼠，通过腹腔注射二甲基亚硝胺 10 mg/kg建立肝纤维化模型；四氯化碳组40只大鼠，通过四氯化碳/橄榄油灌胃建立肝纤维化模型。造模后，二甲基亚硝胺组、四氯化碳组大鼠经尾静脉注入1 mL PKH26标记的内皮祖细胞悬液(1×106个细胞)。 主要观察指标：PKH26标记率和细胞存活率，通过荧光共聚焦显微镜观察大鼠损伤肝内内皮祖细胞的迁移及CD31的表达。 结果：流式细胞仪检测结果显示PKH26标记的内皮祖细胞阳性率为99%，荧光显微观察发现锥虫蓝染色后PKH26标记细胞存活率均>90%。输注1 d后，两种慢性肝损伤模型中的肝内均可见PKH26标记阳性的细胞出现在肝小叶内，并且随时间延长阳性细胞数增加。PKH26标记阳性的细胞主要存在于沿纤维分布的血管内皮和肝小叶内的窦内皮，且血管内皮可见CD31/PK26双阳性细胞。 结论：PKH26可以在体外成功标记大鼠内皮祖细胞，并在损伤肝内示踪。     

干扰素刺激基因ISG20真核表达载体的构建及其抗丙型肝炎病毒复制作用的研究

目的：研究IFN—α抗HCV的作用机理及了解ISG20是否参与介导IFN-α对HCV的抑制作用。方法：用RT—PCR法及融合PCR法分别获得野生型及突变型ISG20cDNA，并将其克隆到真该表达载体pcDNA3．1上，转染含HCV复制子的Huh7细胞进行瞬时表达，通过Northern blot及Western blot分别检测HCVRNA及NS5A蛋白水平，研究表达ISG20对HCV复制子的影响。结果：构建的野生型及突变型ISG20真核表达载体在mRNA水平及蛋白水平的表达均得到证实，并且发现表达野生型ISG20对HCV复制子RNA有抑制作用。结论：成功克隆及表达了ISG20，并对其抗病毒作用进行了初步研究，提示ISG20可能介导IFN-α对HCV的抑制作用。     

粒细胞集落刺激因子动员对大鼠内皮祖细胞体外扩增的影响

背景：内皮祖细胞在缺血性疾病治疗应用中存在数量低的问题，许多细胞因子影响其动员效果和功能。 目的：观察粒细胞集落刺激因子动员对体外扩增骨髓源性内皮祖细胞数量及功能的影响。 设计、时间及地点：细胞学体外观察，于2007-08/2008-03在北京大学人民医院肝病研究所完成。 材料：SPF级健康成年SD雄性大鼠16只，随机分为动员组和对照组，8只/组。重组人粒细胞集落刺激因子为麒麟鲲鹏生物药业有限公司产品。 方法：实验前动员组大鼠皮下注射经生理盐水稀释的重组人粒细胞集落刺激因子10μg/kg，2次/d，共5 d。采用密度梯度离心法分别从两组大鼠骨髓获取单个核细胞，洗涤后按2×107/孔接种在包被大鼠纤连蛋白的6孔板上，采用贴壁法纯化得到内皮祖细胞。 主要观察指标：骨髓单个核细胞集落数及细胞表型，骨髓源性内皮祖细胞贴壁情况及细胞表型，通过DiI-acLDL摄取、体外血管生成进行内皮祖细胞功能学鉴定，透射电镜观察细胞超微结构。 结果：与对照组比较，动员组骨髓单个核细胞集落增多，CD45+/CD34+、CD133+和Flk-1+阳性率均明显升高（F=5.655~61.892，P < 0.05）。培养第7，9天与对照组比较，动员组骨髓源性内皮祖细胞贴壁数、CD45+/CD34+、CD133+和Flk-1+阳性率均明显升高（F=5.694~38.879，P < 0.05）。贴壁细胞F1TC-UEA-1/Dil-acLDL双荧光染色阳性率为90%，接种于Matrigel包被的培养板24 h后形成毛细血管索样结构，胞质内有Weibel-Palade小体存在。 结论：粒细胞集落刺激因子动员能增加骨髓源性内皮祖细胞的数量，并促进其分化、增殖功能。