重组腺相关病毒介导的人血管内皮抑素基因治疗裸鼠子宫内膜异位症

目的 研究重组腺相关病毒介导的人血管内皮抑素(endostatin)基因对子宫内膜异位症(内异症)裸鼠模型的治疗作用.方法 构建携带人血管内皮抑素基因和增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因的重组腺相关病毒载体rAAV2-endostatin-EGFP,,将2008年11-12月在天津医科大学第二医院妇科因子宫肌瘤行子宫全切除术的12例患者的子宫内膜种植于60只裸鼠的盆腹腔内,建立内异症裸鼠模型,1周后分为3组:治疗组20只,于异位病灶局部直接注射rAAV2-endostatin-EGFP;阴性对照组20只,于病灶局部直接注射空白载体rAAV2-EGFP;空白对照组20只,于病灶局部直接注射等体积的磷酸盐缓冲液.分别于给药后1、2、3周各开腹1次,观察裸鼠盆腹腔病灶,同时留取异位病灶组织,检测各组裸鼠异位病灶中人血管内皮抑素蛋白表达情况、腺体数、微血管密度(MVD)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况;于给药后3周检测各组裸鼠血清中雌二醇、孕酮水平.结果(1)采用腹膜种植法建立内异症裸鼠模型,种植成功率达100%.给药1周后,治疗组裸鼠异位病灶平坦、中央下陷,光镜下可见腺体数减少,腺腔变窄,细胞稀疏、呈萎缩状态.(2)荧光显微镜下观察,给药后1、2、3周,治疗组裸鼠异位病灶组织腺体和间质内出现绿色荧光;而阴性对照组和空白对照组裸鼠异位病灶组织内未见绿色荧光.(3)各组裸鼠给药后1、2、3周的异位病灶内腺体数,治疗组分别为(7.8±1.9)、(7.0±1.5)和(5.5±1.7)个,均低于阴性对照组[分别为(10.1±1.7)、(10.2±2.0)和(9.8±2.4)个]和空白对照组[分别为(10.2±2.2)、(10.0±2.0)和(9.7±2.2)个],差异均有统计学意义(P<0.05);治疗组裸鼠给药后1、2、3周的异位病灶内腺体数比较,差异也有统计学意义(P<0.05).(4)各组裸鼠给药后1、2、3周异位病灶内的MVD,治疗组分别为(12.2±1.5)、(11.4±2.1)、(9.0±1.4)条,均低于阴性对照组[分别为(16.5±1.7)、(16.5±1.9)、(16.9±1.9)条]和空白对照组[分别为(16.2±1.6)、(16.0±1.6)、(16.3±1.7)条],差异均有统计学意义(P<0.05);治疗组裸鼠给药后1、2、3周异位病灶内MVD比较,差异也有统计学意义(P<0.05).(5)各组裸鼠给药后1、2、3周异位病灶中VEGF的阳性率及表达强度,治疗组分别为35%、30%、25%和1.60±0.43、1.33±0.30、1.03±0.36,均低于阴性对照组(分别为80%、75%、85%和2.43±0.53、2.43±0.29、2.66±0.45)和空白对照组(分别为85%、90%、90%和2.36±0.53、2.64±0.57、2.53±0.52),差异均有统计学意义(P<0.05);治疗组裸鼠给药后1、2、3周异位病灶中VEGF阳性率及表达强度比较,差异也有统计学意义(P<0.05).(6)给药后3周,治疗组裸鼠血清中的雌二醇、孕酮水平分别为(48±7)pmol/L、(61±8)nmol/L,分别与阴性对照组[分别为(50±9)pmol/L、(60±10)nmol/L]和空白对照组[分别为(48±7)pmol/L、(58±10)nmol/L]比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 携带人血管内皮抑素基因的重组腺相关病毒可抑制裸鼠内异症病灶的血管生成,从而抑制异位病灶的生长,而不影响体内生殖激素水平,抗血管生成基因治疗可能成为内异症治疗的新选择.     

人子宫内膜异位症裸鼠模型的建立

目的研究C57BL／6J—HBV转基因小鼠的繁育规律,并从DNA、RNA、蛋白质、病毒学角度对该品系转基因小鼠进行综合分析。方法C57BL／6J-HBV转基因小鼠以两种不同的交配方式进行繁殖,利用PCR法对每一世代仔鼠检测其阳性率。利用RT—PCR和real-time PCR对转基因小鼠肝组织中的HBV DNA进行定性和半定量检测并对HBV基因在转基因小鼠中的转录特征进行分析。利用血清ELISA和Western Blotting方法,分析HBV病毒抗原在转基因小鼠中的表达和分泌特征。结果两种交配方式窝产仔数和离乳数存在显著性差异（P〈0．05）,互交后代小鼠的阳性率高于回交后代。4只乙型肝炎病毒转基因小鼠分别与正常C57BL／6J鼠杂交进行传代,其阳性率始终保持在40％～50%,表明C57BL／6J-Tg（AlblHBV）44Bri／J型HBV已稳定整合表达,并能可靠地遗传给下一代。转基因小鼠的肝组织可稳定表达的病毒抗原并可分泌入血。结论该转基因小鼠可长期稳定高表达HBV病毒抗原,可应用于乙型肝炎病毒相关研究。     

CXCR4和CathepsinD在恶性纤维组织细胞瘤中的表达及意义

目的：探讨CXCR4和组织蛋白酶D（CathepsinD）的表达与恶性纤维组织细胞瘤（MFH）转移及预后的关系。方法：选取存档的55例MFH组织标本,根据临床资料分为有转移组和无转移组,利用免疫组织化学染色检测两组原发灶中CXCR4和CathepsinD蛋白的表达情况,比较其过表达患者与低表达患者的中位生存期;利用Real—timePCR检测20例MFH有转移组和无转移组原发灶中CXCR4和CathepsinD的mRNA表达水平。结果：CXCR4和CathepsinD表达水平在转移组均显著高于无转移组（P〈0．05）;CXCR4过表达者的中位生存期均显著低于其低表达者（P〈0．05）;CathepsinD过表达者的中位生存期低于其低表达者,但差异无显著性（P〉0．05）。结论：过表达CXCR4和CathepsinD与MFH的远处转移有关,CXCR4可作为MFH预后不良的参考指标。     

乳腺癌中白细胞介素-10和血管内皮生长因子的表达及其对树突状细胞的抑制作用

目的 探讨乳腺癌中自细胞介素（IL）-10和血管内皮生长因子（VEGF）的表达及其对树突状细胞（DC）的影响。方法 应用免疫组织化学方法检测71例乳腺浸润性导管癌中IL-10和VEGF的表达及S100＋DC和CD1a＋DC的分布情况，分析它们之间的关系。结果 IL-10和VEGF的阳性率分别为69．0％（49／71）和70．4％（50／71）。S100＋13（2和CD1a＋DC的阳性率分别为76.1％（54／71）和53．5％（38／71）。IL-10表达仅与CD1a＋DC的密度呈负相关（rs=-0．244，P＜0．05），而VEGF表达与S100＋DC和CD1a＋DC的密度均呈负相关（分别rs=-0．380，P＜0．01和rs=-0．476，P＜0．01）。结论 乳腺癌细胞分泌的IL-10和VEGF可能通过抑制DC的产生和分化成熟而抑制机体对肿瘤细胞的免疫杀伤作用。     

IGF-I、IGF-IR及TGF-β3在子宫肌瘤病因学中的作用

子宫肌瘤是妇科最常见的生殖道良性肿瘤,在育龄妇女中发病率较高。近年来研究表明,肌瘤是各种复杂因素相互作用的结果,其中卵巢甾体激素是肌瘤生长的促动子,其作用可能是由局部自分泌/旁分泌产生的生长因子介导的。绝经后机体内激素水平下降,大部分肌瘤具有萎缩趋势。但临床实践中一部分患者绝经后肌瘤不但不萎缩,反而增大甚至引起临床症状而就诊,这是否和肌瘤中生长因子表达的变化有关还缺少相关研究。下面对IGF-I、IGF-IR及TGF-β3在子宫肌瘤中的病因学作用进行综述,以利于临床医师加深对子宫肌瘤病因学的理解,为绝经后肌瘤生长原因的研究提供依据。     

胆固醇酯转运蛋白的基因变异与动脉粥样硬化

人血浆胆固醇酯转运蛋白（ＣＥＴＰ）可促进外周组织中胆固醇酯（ＣＥ）向肝转运或血浆高密度脂蛋白的ＣＥ向含ＡｐｏＢ的脂蛋白转运，以及这些脂蛋白间的中性脂质交换。ＣＥＴＰ基因突变与人动脉粥样硬化相关。突变的ＣＥＴＰ基因表达产物活性缺失或下降，但引起血浆高密度脂蛋白升高，起到了抗动脉粥样硬化的作用。     

宫颈肌瘤12例临床分析

宫颈肌瘤来源于宫颈间质肌组织或血管平滑肌,是子宫肌瘤的一种特殊类型,常为单发,其发生率约占子宫肌瘤的2.2%～8%[1]。宫颈肌瘤较小时不易诊断,发现时常较大,可嵌顿于盆腔或阴道内,手     

津白Ⅰ和津白Ⅱ杂交小鼠自发性乳腺癌发生及相关机制研究

目的：观察津白Ⅰ和津白Ⅱ小鼠杂交后的杂交一代自发性乳腺癌发生，分析父系遗传和母系遗传在TAⅠ和TAⅡ自发性乳腺癌小鼠发生过程中的作用及初步探讨其机制。方法：TAⅠ雄性小鼠和TAⅡ雌性小鼠杂交，TAⅠ雌性小鼠和TAⅡ雄性小鼠杂交，产生的杂交一代分别命名为F1代和F1’代，再各自交配，记录杂交一代雌鼠发瘤情况，并与TAⅡ自发性乳腺癌相比较。结果：9只F1代雌鼠中有8只发瘤，平均发瘤时间为201天，发瘤时平均生产7．67次；8只F1’代雌鼠中有3只发瘤，平均发瘤时间为190天，发瘤时平均生产5．67次。F1代自发瘤发瘤时间明显短于F1’代和TAⅡ自发性乳腺癌小鼠（P〈0．05）。结论：母系遗传在TAⅡ自发性乳腺癌发生过程中可能具有重要的作用，F1和F1’小鼠自发性乳腺癌发生时间比TAⅡ小鼠明显缩短。Rb基因突变可能是引起TAⅡ自发性乳腺癌发生的一个较为重要原因。