MMP-9血清水平及其基因-1562C/T多态性与儿童哮喘关系的研究

目的 探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9) 血清水平及其基因-1562C/T多态性与儿童哮喘的相关关系.方法 采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(SELISA)测定65例哮喘儿童(病例组)和68名健康对照儿童(对照组)血清MMP-9水平,并采用多聚酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析技术检测MMP-9基因...     

16S rRNA测序鉴定一株感染实验小鼠的表皮葡萄球菌

目的:应用16SrRNA测序及序列分析方法来鉴定一株来自实验室饲养小鼠的细菌。方法:对可疑小鼠的血液进行细菌培养,革兰氏染色观察细菌菌株的表型,PCR扩增菌株16SrRNA并进行测序,将测序序列与GenBank数据库的菌株序列进行进化树和基因距离分析。结果:本研究鉴定的菌株为革兰氏阳性表皮葡萄球菌。结论:16SrRNA基因测序鉴定细菌的方法适用于非专业研究人员;实验动物也可能含有病原体,进行动物实验时要有防护措施。     

乳胶过敏原Hev b3的克窿表达和纯化及其过敏原性检测

目的：克隆乳胶主要过敏原Hev b3基因，构建其原核表达裁体并表达和纯化重组蛋白，了解重组的Hev b3是否具有和相应IgE特异结合的过敏原特性。方法：用RT—PCR方法从新鲜海南橡胶树叶提取的总RNA中扩增出Hev b3的cDNA，将其克隆于原核表达载体pQE30质粒，转化大肠杆菌XL1-Blue，酶切和测序验证构建的载体，利用Ni—NTA柱层析纯化重组蛋白并用SDS—PAGE和Western Blot验证。结果：酶切和测序结果证实克隆了正确的Hev b3序列，重组表达并纯化的蛋白具有和特异IgE抗体结合的过敏原特性。结论：成功构建了乳胶主要过敏原的原核表达载体，并纯化了具有过敏原特性的重组蛋白，为过敏原的标准化创造了条件。     

机械刺激对骨质疏松症的影响的研究进展

骨质疏松症(osteoporosis)是多种原因引起的,以单位体积内骨组织量减少和骨的微结构改变破坏,而导致骨的脆性增加,骨韧性降低,易发骨折的一种代谢性骨病.随着中国老龄化社会的来临,平均寿命的延长,其发生率逐年上升,因其发病率高,治疗费用大等特点已成为世界性研究难题. 早期学者认为,骨质疏松骨折的发生主要与骨矿的含量有关,但目前一致认为,骨质疏松性骨折与骨强度密切相关,骨强度大小不仅与骨量有关,更与骨的内部结构更有着密切的关系,骨密度为骨的"量",而骨的微结构为骨的"质",而对于骨强度来讲,质比量更具力学意义.     

伯氏疟原虫抗原基因高效植物表达载体的构建

目的构建果实特异启动子驱动的含伯氏疟原虫裂殖子表面蛋白PbMSP4/5(Plasmodium berghei merozoitesurface protein4/5)基因的植物表达载体,并进一步提高抗原基因的表达量和免疫原性,为研制有效的转基因植物疟疾疫苗打下基础。方法分别以提取的番茄和伯氏疟原虫Anka株的基因组DNA为模板,扩增番茄果实特异表达启动子E8的核心序列(约1.11Kb)及PbMSP4/5基因(704bp),并通过重叠区扩增基因拼接法(Gene splicing by overlap extension,SOE)PCR将二者拼接,拼接后的序列为EM,并合成霍乱毒素B亚基基因CTB,共同构建重组质粒pCAMBIA1302-EM-CTB,电击法转化根癌农杆菌GV3103。结果重组质粒经酶切鉴定证明已成功转化。结论实验成功构建了以番茄果实特异启动子驱动PbMSP4/5基因、以CTB为黏膜免疫佐剂的高效植物表达载体。     

注射用头孢呋辛钠的安全性试验研究

目的：通过对注射用头孢呋辛钠的安全性试验研究,评价其用药的安全性。方法：分别进行豚鼠全身过敏性试验,家兔血管、肌肉刺激性试验及溶血性试验,观察注射用头孢呋辛钠是否可引起过敏和对血管、肌肉的刺激性,是否具有溶血作用。结果：注射用头孢呋辛钠给药后未出现过敏反应,静脉注射、肌内注射均未见明显刺激性,亦未见溶血及凝集反应。结论：安全性试验研究表明,注射用头孢呋辛钠用药安全可靠。     

羊膜及羊膜来源细胞应用于组织再生工程的研究进展

组织再生可分为体外组织再生和体内组织再生。体外组织再生是于体外设计、构建人体组织,并用于移植,以替换或修复病损组织。体内组织再生是把含有活细胞成分或不含细胞成分的装置植入体内,以诱导和促进功能组织的再生。这一方法除了要求设计、制备新型生物活性材料以提供细胞粘附和生长的基质外,还需要生长因子等辅助生物材料诱导组织再生。因此,细胞、支架和生长因子就成为构建工程组织的3个关键因素。羊膜具有很多特性,使其可作为组织工程中的支架;另外,羊膜本身就可以表达多种生长因子。就细胞来源而言,     

小鼠组织因子原核质粒的构建和重组蛋白的表达

目的 体外扩增小鼠组织因子基因cDNA序列,构建小鼠组织因子重组原核表达质粒,在大肠杆菌中诱导表达.方法 根据基因库提供的基因序列设计克隆扩增小鼠组织因子cDNA基因序列的引物,利用原位反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术扩增获得小鼠组织因子cDNA基因,通过内切酶酶切和T7酶连接,将小鼠组织因子cDNA序列插入原核表达质粒pQE30多克隆位点中.筛选的重组质粒经酶切和DNA序列测定证实正确后,转染感受态大肠杆菌,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并通过10%聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白印迹法进行鉴定.结果 琼脂糖凝胶电泳发现扩增的小鼠组织因子cDNA序列相对分子量大小和预期值相一致,重组质粒酶切结果和预期值相符,DNA序列测定显示质粒的目的基因阅读框架准确无误.用IPTG诱导可以有效诱导重组蛋白质在大肠杆菌中表达,表达的重组蛋白质相对分子量与预期值相一致.结论 成功构建了小鼠组织因子的原核表达载体,并在大肠杆菌中诱导了有效表达,为将组织因子应用于治疗和功能研究奠定了基础.     

伯氏疟原虫裂殖子表面蛋白PbMSP4/5基因高效植物表达载体的构建

[目的] 构建果实特异性启动子驱动的含伯氏疟原虫裂殖子表面蛋白PbMSP4/5(Plasmodium berghei merozoite sHrface protein 4/5)基因的植物表达载体,进一步提高目的基因的表达量,为研制有效的转基因植物疟疾疫苗打下基础. [方法] 分别以提取的番茄和伯氏疟原虫的基因组DNA 模板,通过SOE PCR,即重叠区扩增基因拼接法(gene splicing by overlap extension)拼接番茄果实特异表达启动E8的核心序列(约1.11 Kb)及PbMSP4/5基因(704bp),拼接后的序列为EM.用EcoRI和Hind Ⅲ分别双酶切EM序列及表达载体pCAMBIA1302,连接转化,得到的重_组质粒pCAMBIA1302-EM用电击法转化根癌农杆菌GV3103. [结果] 重组质粒经PcR及酶切鉴定证明已成功转化.[结论] 本实验成功构建了番茄果实特异性启动子驱动PbMSP4/5基因的植物表达载体.     

HIV-1 Tat基因在pEGx-KG中的融合构建及原核表达

目的:在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达融合的Tat蛋白。方法:用PCR方法从HIV cDNA文库中扩增出Tat基因,并将其插入到表达载体pEGx-KG中,转化到E.coli中进行融合表达,表达产物用蛋白电泳和Western-blot进行鉴定。结果:成功地构建了重组质粒pEGx-KG-Tat,重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中得到高效表达。蛋白电泳和Western-blot分析表明,在相对分子质量(Mr)为38.9kDa处有1条特异性的带。结论:GST基因与HIV-1 Tat基因的融合构建,使Tat蛋白在大肠杆菌中得到高效表达,为艾滋病的防治研究奠定了基础。