小鼠VCAM-1真核表达质粒的构建及表达

目的:构建小鼠血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)基因真核表达质粒,了解该质粒是否能在真核细胞中有效表达.方法:以小鼠胚肝组织总RNA为模板,通过RT-PCR扩增小鼠VCAM-1全段基因cDNA,应用基因工程技术将扩增的cDNA片段插入pcDNA3.1( )真核表达质粒,构建重组真核表达质粒pcDNA-mVCAM,经限制性内切酶酶切分析及测序鉴定正确后,用脂质体转染技术转染CHO细胞,用Western Blot鉴定该质粒是否能够在真核细胞中表达相应的目的蛋白质.结果:成功扩增了小鼠VCAM-1全长基因cDNA,酶切和测序证明正确构建了重组真核表达质粒pcDNA-mVCAM,Western Blot方法证实该质粒能在CHO真核细胞中正确表达目的蛋白.结论:成功构建了小鼠VCAM-1基因的真核表达质粒载体,为进一步研究VCAM-1的新功能和免疫治疗奠定了基础.     

FGF受体信号转导及其临床应用研究进展

成纤维细胞生长因子受体（FGFRs）是一类穿膜的酪氨酸激酶受体,均为单链的糖蛋白分子。由细胞外区、跨膜区和细胞内区组成。成纤维细胞生长因子（FGFs）的生物活性是通过与FGFRs结合来启动细胞内信号转导。受体的活化导致受体酪氦酸自磷酸化作用的产生。FGFs／FGFRs在不同组织中。通过复杂的信号传递路径对细胞的增殖、分化和移行进行调节。由于它们具有广泛的生物学功能,因此在临床应用上具有重要作用。     

108例支气管哮喘患者MMP-9和TIMP-1血清水平变化及相关性分析

目的探讨支气管哮喘(哮喘)患者MMP-9和TIMP-1血清水平变化及其相关关系。方法采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测52例急性哮喘患者(急性组)、56例慢性哮喘患者(慢性组)和来自同期海南医学院附属医院健康体检中心的60名健康对照者(对照组)的MMP-9和TIMP-1血清水平,并对结果进行相关分析。结果急性组、慢性组与对照组比较,MMP-9和TIMP-1血清水平明显增高(P<0.05)。MMP-9与TIMP-1血清水平存在明显的相关关系(r=0.632,P<0.05)。结论 MMP-9与TIMP-1关系密切,并且参与了气道重塑的过程,其血清水平对哮喘的病情评估具有指导意义。     

弓形虫MIC8基因对弓形虫病的免疫保护性研究

目的观察弓形虫MIC8基因对弓形虫病免疫保护性的效果。方法用PCR方法扩增弓形虫MIC8基因,定向克隆到真核表达质粒pEGFP-N1中,构建重组表达载体pEGFP-MIC8;MIC8-EGFP转染293T细胞,荧光显微镜观察表达情况;然后分别用质粒pEGFP-MIC8、pEGFP-N1空载体及生理盐水肌肉注射免疫BALB/c小鼠,共免疫3次,末次免疫3周后用弓形虫RH株速殖子感染免疫小鼠。结果 PCR扩增弓形虫MIC基因序列正确,构建的重组表达载体pEGFP-MIC8鉴定正确,荧光显微镜下观察到重组质粒能够在293T细胞中表达。弓形虫攻击感染后,质粒pEGFP-MIC8免疫小鼠与对照组相比,小鼠的存活时间有一定的延长。结论构建的真核表达重组质粒pEGFP-MIC8对抗击弓形虫攻击感染能够激发一定的免疫保护性。     

阿仑膦酸钠对机械应力下大鼠成骨细胞骨架修复的影响

目的探讨阿仑膦酸钠对机械应力下大鼠成骨细胞骨架修复的作用。方法将原代培养的sD大鼠颅骨成骨细胞分为空白组、阿仑膦酸钠组和雌激素组。施加应力后阿仑膦酸钠组和雌激素组分别用相应药物的含药血清培养,空白组给予常规血清培养。培养1,24h后采用激光共聚焦显微镜检测细胞的形态学变化及荧光强度变化。结果应力施加后培养1h,各组细胞的荧光强度差异无统计学意义（P〉0．05）;各组细胞的形态变得不规则,细胞骨架松散,有少许细胞死亡脱落。培养24h,阿仑膦酸钠组的荧光强度[（103．7±5．1）]明显高于雌激素组[（94．2±8．4）]和空白组[（78．7±2．4）],差异均有统计学意义（均P〈0．05）。阿仑膦酸钠组的细胞形态趋于规则,边缘清晰,细胞骨架趋于整齐。结论阿仑膦酸钠和雌激素能修复机械应力对大鼠成骨细胞的损伤,以阿仑膦酸钠作用更为明显。     

弓形虫ROP5基因与基因佐剂IL-12对小鼠免疫保护性

目的 观察弓形虫ROP5基因疫苗和基因免疫佐剂IL-12共免疫对昆明小鼠所诱导的免疫保护性。方法 大量制备重组质粒pcROP5和pcmIL-12,以100 μg的剂量同时免疫昆明小鼠,PBS组和pcDNA3.1空质粒组作为对照。用ELISA法测定免疫鼠血清中特异性抗体IgG、IgG亚型的表达水平及细胞因子IFN-γ、IL-4的含量,MTT法测定淋巴细胞转化率,观察小鼠受攻击感染弓形虫后的存活时间。结果 质粒pcROP5和pcmIL-12共免疫小鼠3次后,与pcROP5质粒单独免疫组和对照组相比,IL-12基因佐剂的共免疫提高了免疫鼠血清中特异性抗体IgG及IgG亚型IgG2a的表达水平,提高了细胞因子IFN-γ的含量,增加了淋巴细胞的转化率,但IgG1和IL-4的表达水平变化不大;攻击感染后,质粒pcROP5和pcmIL-12共免疫组小鼠存活时间显著延长。结论 弓形虫ROP5基因与基因佐剂pcmIL-12共免疫能增强对小鼠的免疫保护性。     

大肠埃希菌JM109表面抗原 Ag43基因敲除与鉴定

目的：敲除大肠埃希菌JM109表面抗原43（Ag43）基因并对其进行鉴定。方法采用Sigma公司的TargeTron基因敲除系统和Ag43基因特异设计的PCR引物扩增获得突变Ⅱ组内含子RNA蛋白复合体（RNP）基因序列,然后将这段基因序插入表达RNP的质粒pACD4K‐C中,获得Ag43特异的重组RNP质粒pACD4K‐Ag43。最后将pACD4K‐Ag43转化JM109,经过IPTG诱导表达将Ⅱ组内含子插入Ag43特异的部位。结果通过软件分析发现插入Ⅱ组内含子的最佳位点位于碱基1812和1913之间,琼脂糖凝胶电泳发现PCR扩增的突变Ⅱ组内含子RNP基因序列分子量大小和预期值（350 bp）相一致,用NheⅠ和HindⅢ二种酶切分析重组质粒pACD4K‐Ag43结果和预期值相符,PCR扩增相应产物和基因测序显示Ⅱ组内含子特异地插入Ag43基因碱基序列的1812／1913位点。结论成功地将大肠埃希菌JM109中的基因敲除,为更进一步深入研究Ag43基因的功能和将其作为制备重组Ag43嵌合蛋白的宿主菌奠定了基础。     

以Endoglin为靶点的新型免疫偶联物的抗肿瘤作用

目的 观察抗Endoglin(END)单克隆抗体与阿霉素(ADM)偶联物的抗肿瘤作用.方法 采用MBS(m-maleimidobenzoyl-N-hydroxysuccinimide ester)为交联剂制备END-ADM偶联物,MTT法测定其在体外对肿瘤细胞增殖的抑制作用,以小鼠肝癌H22细胞皮下移植瘤模型观察其在体内抑制肿瘤生长的效果.结果 等细胞毒性剂量的偶联物END-ADM与ADM对体外培养的肝癌细胞杀伤作用差异不大.动物实验中ADM 0.4 mg/kg对H22肝癌的抑制率为29.33%,而等细胞毒性剂量的END-ADM偶联物的抑瘤率达到86.67%,抑制作用显著增强(P<0.05),与ADM相比,偶联物还可显著延长荷瘤小鼠的中位生存时间(P<0.05).结论 END-ADM偶联物对小鼠肝癌H22细胞皮下移植瘤的抑制作用比ADM显著增强,可能成为新型的抗肿瘤靶向药物.     

小剂量右美托咪定对宫颈癌微创手术患者恶心呕吐影响的研究

目的 探究小剂量右美托咪定对宫颈癌微创手术患者恶心呕吐的影响.方法 选取2014年6月至2016年6月海南省中医院收治的122例宫颈癌微创手术患者为研究对象,将患者采用随机数表法分为对照组和观察组,各61例.麻醉诱导前观察组患者经1 min静脉注射0.1μg/kg右美托咪定,对照组患者给予等量生理盐水.对比两组患者围术期各项指标、恶心呕吐分级和不良反应发生情况.结果 两组患者的麻醉时间、手术时间、睁眼时间、自主呼吸恢复时间、拔除气管导管时间比较,差异无统计学意义(P>0.05).观察组患者术中心率(HR)最低值低于对照组患者,心动过缓发生率高于对照组患者,差异有统计学意义(P<0.05).T2时刻(术后1.0 h)观察组患者恶心呕吐分级(PONV)Ⅱ级构成比显著低于对照组T2时刻PONVⅡ级构成比,T4时刻(术后24.0 h)观察组患者恶心呕吐发生率显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).对照组患者的躁动发生率高于观察组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 小剂量右美托咪定能够显著缓解宫颈癌微创手术患者术后恶心呕吐,并能够降低躁动发生率,且不会影响麻醉效果,但容易发生心动过缓.