脂多糖预处理对非酒精性脂肪性肝炎的影响

目的 探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)预处理对非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)的影响.方法 选取24只成年雄性Wistar大鼠,分为正常对照组、NASH组和LPS预处理组.NASH组饲以高糖高脂饲料;LPS预处理组饲料同肝损伤组,隔日皮下注射LPS 0.5 mg/kg;正常对照组饲以普通饲料;所有大鼠自由进食与饮水.于实验第9周末处死大鼠.制备肝组织切片,计数浸润肝组织的淋巴细胞;测定血浆内毒素水平和丙氨酸转氨酶(ALT)活性、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)含量.结果 NASH组血浆内毒素水平比正常对照组高;LPS预处理组血浆ALT水平、肝组织淋巴细胞计数与NASH组比较均显著降低;血浆TNF-α水平LPS预处理组与NASH组比较明显降低,而血浆IL-10则相反,差异有统计学意义(P＜0.05).肝组织切片HE染色结果显示,LPS预处理组与NASH组比较,肝细胞内脂肪空泡小、数量少,脂肪变性明显减轻.结论 小剂量LPS预处理与减轻NASH密切相关.其机制可能是LPS预处理影响了细胞因子的释放,导致Th1/Th2细胞因子失衡,Th1向Th2偏离,可能诱导了宿主的免疫耐受,表现为肝组织损伤减轻.

Abstract：

Objective To investigate the changes of Th1/Th2 cytokines and its relationship with lipopolysaccharide (LPS) in pretreatment of relieving nonalcoholic steatohepatitis (NASH).Methods The 24 male Wistar rats were randomly divided into 3 groups: normal control group, liver injury group and LPS pretreatment group. The rats were given normal diet in normal control group,high-sucrose and high-fat diet both in liver injury group and in LPS pretreatment group, and the rats in LPS pretreatment group were given hypodermic injection of LPS 0. 5 mg/kg every other day. The level of plasma endotoxin (ET), activity of alanine aminotransferase (ALT), content of tumor necrosis factor-α (TNF-α) and interleukin-10 (IL-10) were determined. At the end of week 9, the rats were executed, and the liver tissue slices were prepared to investigate hepatic pathologic change by hematoxylin and eosin (HE) staining.Results The level of plasma ET was significantly higher in liver injury group than in normal control group. The level of plasma ALT and infiltrating lymphocytes in liver tissue were significantly lower in LPS pretreatment group than in liver injury group. The level of plasma TNF-α was significantly lower in LPS pretreatment group compared with liver injury group.In contrast, the level of plasma IL-10 was higher (P＜0. 05). Histology with HE staining showed that hepatocyte steatosis was obviously relieved with smaller lipid droplet in LPS pretreatment group than in liver injury group. Conclusions LPS pretreatment can alleviate high-sucrose and high-fat induced NASH. The disequilibrium of Th1/Th2 cytokines may be an important part of mechanism.     

肠源性内毒素血症在大鼠代谢综合征相关疾病发生发展中的作用及其机制

目的: 探讨肠源性内毒素血症(IETM)在代谢综合征(MS)相关疾病发生发展中的作用及可能的分子机制。方法: 将64只大鼠随机分为8组,分别是3月正常对照组(3C)、3月高糖高脂组(3H)、6月正常对照组(6C)、6月高糖高脂组(6H)、9月正常对照组(9C)、9月高糖高脂组(9H)、12月正常对照组(12C)和12月高糖高脂组(12H)。测定血浆脂多糖(LPS)、游离脂肪酸(FFA)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)、巨噬细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、空腹血糖(FPG)和空腹胰岛素(FINS),并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。免疫组化方法观察脂肪组织、肝组织和胰腺组织CD68表达水平;Western blotting测定肝组织、胰腺组织中JNK1、p-JNK1、NF-κB p65、IκB、GRP78蛋白表达水平。结果: 与正常对照组相比,各阶段高糖高脂组的大鼠血清LPS、TNF-α、CRP、MCP-1、FPG、FINS和HOMA-IR的水平都升高,其差异有统计学意义;免疫组化结果显示各阶段高糖高脂组大鼠的脂肪组织、肝组织和胰腺组织CD68表达水平明显升高,且随时间推移加重;各阶段高糖高脂组的大鼠肝组织p-JNK1、NF-κB p65表达显著高于正常组,而IκB表达显著低于正常组;高糖高脂组的大鼠胰腺组织p-JNK1和NF-κB p65的表达于第6个月开始升高,第9个月、第12个月达到高峰,而IκB的表达也于第6个月开始降低。结论: IETM可能在MS相关的代谢性疾病中发挥着重要的作用,NF-κB、JNK和GRP78信号可能参与了上述过程。     

慢性肝病中甘氨酸对肝组织脂多糖结合蛋白基因表达的影响

慢性肝病发展过程中常伴有肠源性内毒素(ET)血症,内毒素是慢性肝病病变持续与加重的重要因素。因此,降低肠源性ET血症是延缓或减轻慢性肝病发展的关键之一。据报道甘氨酸(Gly)具有拮抗ET作用,但其作用机制尚不完全清楚。我们通过观察Gly对肝组织中脂多糖结合蛋白(LBP)表达的影响,探讨其拮抗ET的机制。     

枯否细胞在非酒精性脂肪肝炎发生中的作用

目的探讨枯否细胞(Kupffer cell,KCs)在高脂饮食致小鼠非酒精性脂肪肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)发生中的作用。方法选取雌性昆明种小鼠46只,随机分为高脂组与对照组。高脂组给予高脂饮食,12周后每组取小鼠10只,腹主动脉采血后测定血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)、内毒素(LPS)水平。取肝组织用于组织病理切片的制备及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平检测。分离培养 KCs,以探讨发生 NASH 时,KCs 吞噬聚苯乙烯乳珠的能力及其在 LPS 刺激下分泌 TNF-α的变化。同时,采用 Western blot 方法研究肝组织 CD68及 KCs CD14的表达。结果 12周后组织病理学显示高脂组小鼠已发生 NASH,血清 ALT(215.70±15.65)、LPS(0.19±0.04EU/ml)及肝组织匀浆 TNF-α(4.81±0.98ng/ml)水平均明显高与对照组(53.87±6.63,0.08±0.03 EU/ml,3.73±0.67 ng/ml,t=2.87～30.11,P<0.01)。KCs 分离培养结果表明,小鼠发生 NASH时,KCs 呈活化状态,但其吞噬聚苯乙烯乳珠能力降低(高脂组为25.54±8.28,对照组为46.75±10.40,t=5.04,P<0.01),给予 LPS 刺激后 TNF-α的分泌明显增加(高脂组为84.60±14.25,对照组为60.50 8.05,t=4.17,P=0.001)。West-ern blot 结果显示,发生 NASH 时肝组织 CD68及 KCsCD14受体表达上调。结论在高脂饮食所致小鼠发生 NASH 时,虽 KCs 处于活化状态,但其吞噬功能降低而分泌 TNF-α能力则增强。提示 KCs 功能紊乱与 NASH 发生密切相关。     

过氧亚硝基阴离子在肝纤维化形成中的作用

目的：探讨过氧亚硝基阴离子（ONOO-）在肝纤维化形成过程中所起的作用。 方法： 采用复合因素建立肝纤维化（HF）动物模型的同时，用一氧化氮合酶抑制剂L-NNA（20 mg·kg－1·d－1）给大鼠灌胃（HF+NNA），于实验4周末测定血浆脂多糖（LPS）、NO2-/NO3-含量；采用免疫组化的方法检测肝组织硝基酪氨酸（NT）的表达；用VG染色观察肝组织纤维化程度。 结果： 在HF＋NNA组血浆NO水平明显低于HF组（P＜0.01），HF组NT表达最强，纤维化程度最严重。 结论： ONOO-能促进肝纤维化的发展。     

暴发性肝衰竭血脑屏障通透性改变对肝性脑病发生发展的影响

采用硫代乙酰胺所致大鼠暴发性肝衰模型，以脑组织浸泡液中Ｅｖａｎｓ蓝含量为血脑屏障通透性指标。结果表明，在肝性脑病初期血脑屏障通透性就已增加，至脑病晚期则明显增加，并伴脑水肿发生，脑组织浸泡液中Ｅｖａｎｓ蓝含量与血浆内毒素呈正相关。以上结果提示，暴发性肝衰竭时，肝性脑病发生发展与内毒素所致血脑屏障通透性增加密切相关。     

非酒精性脂肪性肝病在动脉粥样硬化发生发展中的作用

目的探讨非酒精性脂肪性肝病在动脉粥样硬化发生发展中的作用。方法 64只SD大鼠随机分为正常对照组及高糖高脂组,每组再分3、6、9个月和12个月4个时段进行观察,每时段8只。对照组喂饲基础饲料,高糖高脂组喂饲高糖高脂饲料。放射免疫法及酶联免疫吸附实验测定外周血中丙氨酸氨基转移酶、游离脂肪酸、甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、血糖、空腹胰岛素及内毒素、肿瘤坏死因子、C反应蛋白、单核细胞趋化蛋白1、一氧化氮、内皮素1的水平;摘取主动脉及肝脏组织观察病理形态学变化;CD68免疫组织化学染色单核巨噬细胞观察其在动脉壁的浸润情况;苏丹Ⅳ特殊染色观察脂质在动脉壁的异位沉积情况;Tunnel免疫组织化学染色观察内皮细胞及平滑肌细胞的凋亡情况。结果高糖高脂组大鼠甘油三酯、外周血总胆固醇、低密度脂蛋白、丙氨酸氨基转移酶及空腹血糖、空腹胰岛素水平均升高,且内毒素、C反应蛋白、肿瘤坏死因子α、单核细胞趋化蛋白1、内皮素1水平也明显升高,而高密度脂蛋白和一氧化氮水平明显降低;高糖高脂组大鼠3个月时即发生了脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎,此时动脉内皮表面出现单核细胞黏附,且内皮细胞出现散在凋亡现象;6个月时肝脏出现纤维化,动脉内皮下脂质明显沉积,单核细胞在斑块内浸润,粥样斑块形成;同时动脉内皮及平滑肌细胞的凋亡明显加重;9个月时肝脏纤维化进一步加重,动脉壁粥样斑块内大量单核细胞浸润,部分斑块出现钙盐沉积,大部分内皮及平滑肌细胞发生凋亡;12个月时肝脏发展为早期肝硬化,动脉壁粥样斑块大片钙盐沉积,内皮及平滑肌细胞发生广泛且弥漫凋亡。结论高糖高脂膳食可诱发非酒精性脂肪性肝病,并伴有肠源性内毒素血症及脂代谢紊乱和慢性炎症的发生。肠源性内毒素血症直接或间接引起内皮细胞受损及功能紊乱,启动动脉粥样硬化的发生,并随着脂质异位沉积及单核细胞浸润,加剧动脉粥样硬化的发展。     

肠源性内毒素血症在代谢综合征相关的动脉粥样硬化所致的心肌损伤研究

目的探讨肠源性内毒素血症在代谢综合征相关的动脉粥样硬化所致的心脏损伤的发生机制。方法 SD大鼠64只随机分为对照组和模型组,各32只;每组再随机分为3月、6月、9月、12月4个时段进行实验观察,每时段8只。对照组喂饲基础饲料,模型组喂饲高糖高脂饲料。应用放免法及酶联免疫吸附实验测定外周血内毒素及相关的炎症介质肿瘤坏死因子α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)、巨噬细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的表达以及甘油三酯、总胆固醇、游离脂肪酸、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、空腹血糖、空腹胰岛素的表达;并观察主动脉及心脏病理形态学变化;免疫组织化学染色CD68及Tunnel观察巨噬细胞在心肌的浸润及心肌凋亡情况;苏丹IV特殊染色观察脂质在心肌细胞内和心肌肌束间的异位沉积情况。结果模型组大鼠从第3月即发生了内毒素血症和胰岛素抵抗;同时出现了中心性肥胖、脂代谢紊乱、高血糖症及高胰岛素血症等代谢综合征,病理形态学显示模型组随鼠龄增加,主动脉发生脂质异位沉积及典型的动脉粥样斑块的形成;心肌细胞内及心肌肌束间于第6个月出现显著的脂质沉积,在第9～12月加重至严重程度,心肌细胞凋亡于6月组明显发生,第9～12月组发生较广泛凋亡。结论高糖高脂膳食可诱导肠源性内毒素血症和胰岛素抵抗的发生,可能在代谢综合征及其相关的疾病如动脉粥样硬化及其相关的心肌损伤中起重要作用。     

三氯化钆对肝缺血再灌注损伤的影响

目的探讨库普弗细胞(KCs)功能封闭对肝缺血再灌注损伤的影响。方法雄性Wistar大鼠随机分为三组:对照组:只开腹,不做其他任何处理;缺血再灌注(I/R)组:术前24,48h经鼠尾静脉注射等量0.9%氯化钠溶液(pH3.5);三氯化钆(GdCl3)+I/R组:术前24,48h经鼠尾静脉注射0.5%GdCl3溶液(10mg/kg)。第3天进行肝脏部分缺血再灌注手术(约70%肝血流)。缺血45min后,再灌注3,6h,乙醚麻醉后,开腹进行无菌无热源腹主动脉采血,肝左叶用10%甲醛溶液固定,肝中叶包裹后置-70℃冰箱保存,制备匀浆用于丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、肿瘤坏死因子(TNF)-α含量的测定。结果缺血45min后,再灌注3,6h,GdCl3+I/R组血浆丙氨酸转氨酶活性、肝脏MDA及TNF-α含量均显著低于I/R组(P<0.01),而GSH含量则明显高于肝损伤组(P<0.01)。结论GdCl3可保护肝缺血再灌注损伤。     

重症急性胰腺炎时肠源性内毒素血症与TNF-α、IL-1β、NO及MDA之间的相关性研究

目的探讨肠源性内毒素血症(IETM)与肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素-1β(IL-1β),一氧化氮(NO)及自由基(FR)之间的关系。方法将Wistar大鼠(260±20)g 40只,雌雄不拘,随机分为假手术(SO)组(n=8)和模型组(n=32),模型组又分为3 h,12 h,24 h和36 h组,每组8只,观察血浆内毒素(ET)和血清TNF-αI、L-1β、血浆NO和自由基含量的变化。结果血浆ET水平与血清TNF-αI、L-1β和血浆NO含量于造模后3 h明显升高,自由基于造模后12 h明显升高,与SO组相比均具有统计学意义(P<0.01),此后各时间点逐渐增高,提示3 h开始有IETM形成,血浆ET水平和血清TNF-α和IL-1β及血浆NO和自由基含量呈明显的正相关关系(r=0.749,0.858,0.781,0.706,P<0.01)。结论IETM可促使血清TNF-αI、L-1β及血浆NO和自由基含量的增加,后者对胰腺又造成“二次打击”,加重病情的发展。