培养肝细胞,肝窦壁内皮细胞及贮脂细胞对大肠杆菌脂多糖的摄入作用

目的和方法：应用免疫荧光及激光共聚焦扫描技术，观察原代培养大鼠肝细胞、肝脏贮脂细胞及窦壁内皮细胞对不同分子结构大肠杆菌脂多糖的摄取作用。结果：无血清条件下，肝细胞、贮脂细胞、窦壁内皮细胞加入Ｓ型脂多糖（Ｓ－ＬＰＳ）及Ｒｄ型脂多糖（Ｒｄ－ＬＰＳ）培养５ｍｉｎ后，胞浆内均出现强烈抗脂多糖荧光显色；胞浆抗脂多糖荧光强度显著高于空白对照水平；且Ｒｄ－ＬＰＳ培育后肝细胞、窦壁内皮细胞胞浆内荧光强度增高幅度显著高于Ｓ－ＬＰＳ培养后的增高幅度。抗脂多糖显色局限于胞浆，胞核内未见明显着色，但经与Ｒ型多糖培养后，肝细胞核内亦出现强烈抗脂多糖荧光显色。结论：分离培养的大鼠肝细胞、贮脂细胞及肝窦壁内皮细胞对细菌脂多糖具有摄入作用，且脂多糖与这些细胞的相互作用依脂多糖分子结构不同而异     

巯基氧化剂对急性肝损伤时库普弗细胞功能的影响

目的　观察巯基氧化剂在急性肝损伤时对库普弗细胞功能的影响。方法　采用半乳糖胺 /脂多糖 (Galn/LPS)所致急性肝损伤模型 ,雄性昆明种小鼠于注射Galn/LPS(每只 4kg/g)前 1h ,腹腔注射巯基氧化剂马来酸二乙酯 (DEM)每周 5mmol/kg ,并分别于Galn/LPS注射后 6h ,测定血浆丙氨酸转氨酸 (ALT)活性、肿瘤坏死因子 (TNF) α水平、肝脏谷胱甘肽 (GSH)含量和库普弗细胞的吞噬功能。结果　DEM预处理可抑制Galn/LPS导致的血浆ALT活性、TNF α水平、库普弗细胞的吞噬功能升高。结论　巯基氧化剂DEM可通过改变肝脏GSH含量的变化 ,影响细胞氧化还原状态 ,抑制LPS导致的库普弗细胞活化 ,从而减轻肝损伤的发生     

内毒素诱发肝硬化大鼠发生肝性脑病的实验研究

目的：观察外源性内毒素诱发肝硬化大鼠发生肝性脑病的可能性及可能机制。方法：采用腹腔内小剂量内毒素一次性注射（３００μｇ／１００ｇＢＷ）诱发肝硬化大鼠发生肝性脑病。结果：小剂量内毒素腹腔内注射可以诱发肝硬化大鼠发生肝性脑病。内毒素注射后,动物一般行为状态及脑电图皆有明显变化,与其他肝性脑病模型或肝性脑病病人类似。同时,血氨和胰高血糖素水平显著升高。血浆内毒素含量与血氨、血胰高血糖素含量之间及血氨与务     

非酒精性脂肪性肝病在代谢综合征相关的2型糖尿病发病中的作用

目的: 探讨非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)在代谢综合征(MS)相关Ⅱ型糖尿病中的作用。方法: 将64只大鼠随机分为8组,分别是3月正常对照组(3NC)、3月高糖高脂组(3H)、6月正常对照组(6NC)、6月高糖高脂组(6H)、9月正常对照组(9NC)、9月高糖高脂组(9H)、12月正常对照组(12NC)和12月高糖高脂组(12H)。测定血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)、游离脂肪酸(FFA)、内毒素(LPS)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、C反应蛋白(CRP)、巨噬细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS),并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、β细胞功能指数(HOMA-β)。取肝组织和胰腺组织切片行苏木素-伊红(HE)染色和苏丹Ⅳ染色;内脏脂肪组织行苏木素-伊红(HE)染色。以TUNEL法检测胰岛内细胞凋亡水平。结果: 与正常对照组相比,各阶段高糖高脂组大鼠血清ALT、FFA、LPS、TNFα、CRP、MCP-1、FPG、FINS和HOMA-IR水平都明显升高;而HOMA-β在第6个月出现代偿性增强后进行性衰退。高糖高脂组第3-12月胰岛凋亡细胞数量逐渐增加。结论: NAFLD(特别是脂肪肝与脂肪性肝炎)可以诱发MS相关的2型糖尿病。     

实验性急性肝衰竭时门脉高压发生机制的研究

目的：阐明急性肝衰竭时门脉高压的发生与肠源性内毒素血症和肝内微循环障碍的关系。方法：动态观察皮下注射硫代乙酰胺大鼠门脉血流动力学、血浆内毒素、内皮素－１、肿瘤坏死因子－α及台盼蓝肝脏原位灌流等。结果：随着给注射时间的延长,血浆内毒素水平、ＡＬＴ和ＬＤＨ明显升高,血浆及肝组织ＴＮＦ－α和ＥＴ－１显著增多,台盼蓝灌流时间明显延长。肝组织可见肝窦直径显著变窄,肝细胞肿胀变性坏死使肝窦被挤压。结论：肠源性内毒素血症及其引发的肝微循环障碍在急性门脉高压形成中具有重要作用。     

肠源性内毒素血症对重症急性胰腺炎胰腺病理变化的影响

目的探讨肠源性内毒素血症(IETM)与胰腺病理变化之间的关系。方法将Wistar大鼠40只,雌雄不拘,随机分为假手术(SO)组(8只)和模型组(32只),后者又分为3、12、24和36 h组,每组8只,观察血浆内毒素(ET)和胰腺病理评分的情况。结果血浆ET和血清淀粉酶(AMY)含量于造模后3 h明显升高,与SO组相比差异具有统计学意义(P<0.01),此后各时间点逐渐增高,提示3 h开始有IETM形成,随着IETM水平的升高,胰腺病变程度逐渐加重。结论IETM可促使胰腺病理损害加重。     

肝纤维化大鼠血浆脯肽酶变化及其与肠源性内毒素血症的关系

参照Ｂｒｏｓｅｔ及Ｍｙａｒａ法测定大鼠肝纤维化过程中脯氨酸肽酶（ＰＬＤ）的动态变化，并探讨肠源性内毒素血症与其相互关系及其变化的临床意义。结果表明：肝纤维化发生发展过程中ＰＬＤ早期增高显著，并与内毒素水平变化相关。提示ＰＬＤ释放增多与内毒血症引起的肝损害有关，ＰＬＤ可作为肝纤维化标志物。     

枯否细胞功能状态与CD14表达的关系

目的　探讨KCs的功能状态与CD14表达的关系。方法　采用卡介苗 (BCG)致免疫性肝损伤的动物模型 ,并应用SDS -PAGE电泳和Westernblot印迹分析枯否细胞表面CD14的表达。结果　BCG可诱导肝KCsCD14表达上调 ,且其表达强度与枯否细胞的活化程度及肝损伤程度呈正相关。结论　KCsCD14的表达与KCs活化状态密切相关 ,提示通过调整KCs的功能状态可能减轻LPS等致肝损伤作用     

脂多糖预处理对非酒精性脂肪性肝炎的影响

目的 探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)预处理对非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)的影响.方法 选取24只成年雄性Wistar大鼠,分为正常对照组、NASH组和LPS预处理组.NASH组饲以高糖高脂饲料;LPS预处理组饲料同肝损伤组,隔日皮下注射LPS 0.5 mg/kg;正常对照组饲以普通饲料;所有大鼠自由进食与饮水.于实验第9周末处死大鼠.制备肝组织切片,计数浸润肝组织的淋巴细胞;测定血浆内毒素水平和丙氨酸转氨酶(ALT)活性、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)含量.结果 NASH组血浆内毒素水平比正常对照组高;LPS预处理组血浆ALT水平、肝组织淋巴细胞计数与NASH组比较均显著降低;血浆TNF-α水平LPS预处理组与NASH组比较明显降低,而血浆IL-10则相反,差异有统计学意义(P＜0.05).肝组织切片HE染色结果显示,LPS预处理组与NASH组比较,肝细胞内脂肪空泡小、数量少,脂肪变性明显减轻.结论 小剂量LPS预处理与减轻NASH密切相关.其机制可能是LPS预处理影响了细胞因子的释放,导致Th1/Th2细胞因子失衡,Th1向Th2偏离,可能诱导了宿主的免疫耐受,表现为肝组织损伤减轻.

Abstract：

Objective To investigate the changes of Th1/Th2 cytokines and its relationship with lipopolysaccharide (LPS) in pretreatment of relieving nonalcoholic steatohepatitis (NASH).Methods The 24 male Wistar rats were randomly divided into 3 groups: normal control group, liver injury group and LPS pretreatment group. The rats were given normal diet in normal control group,high-sucrose and high-fat diet both in liver injury group and in LPS pretreatment group, and the rats in LPS pretreatment group were given hypodermic injection of LPS 0. 5 mg/kg every other day. The level of plasma endotoxin (ET), activity of alanine aminotransferase (ALT), content of tumor necrosis factor-α (TNF-α) and interleukin-10 (IL-10) were determined. At the end of week 9, the rats were executed, and the liver tissue slices were prepared to investigate hepatic pathologic change by hematoxylin and eosin (HE) staining.Results The level of plasma ET was significantly higher in liver injury group than in normal control group. The level of plasma ALT and infiltrating lymphocytes in liver tissue were significantly lower in LPS pretreatment group than in liver injury group. The level of plasma TNF-α was significantly lower in LPS pretreatment group compared with liver injury group.In contrast, the level of plasma IL-10 was higher (P＜0. 05). Histology with HE staining showed that hepatocyte steatosis was obviously relieved with smaller lipid droplet in LPS pretreatment group than in liver injury group. Conclusions LPS pretreatment can alleviate high-sucrose and high-fat induced NASH. The disequilibrium of Th1/Th2 cytokines may be an important part of mechanism.     

肠源性内毒素血症在大鼠代谢综合征相关疾病发生发展中的作用及其机制

目的: 探讨肠源性内毒素血症(IETM)在代谢综合征(MS)相关疾病发生发展中的作用及可能的分子机制。方法: 将64只大鼠随机分为8组,分别是3月正常对照组(3C)、3月高糖高脂组(3H)、6月正常对照组(6C)、6月高糖高脂组(6H)、9月正常对照组(9C)、9月高糖高脂组(9H)、12月正常对照组(12C)和12月高糖高脂组(12H)。测定血浆脂多糖(LPS)、游离脂肪酸(FFA)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)、巨噬细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、空腹血糖(FPG)和空腹胰岛素(FINS),并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。免疫组化方法观察脂肪组织、肝组织和胰腺组织CD68表达水平;Western blotting测定肝组织、胰腺组织中JNK1、p-JNK1、NF-κB p65、IκB、GRP78蛋白表达水平。结果: 与正常对照组相比,各阶段高糖高脂组的大鼠血清LPS、TNF-α、CRP、MCP-1、FPG、FINS和HOMA-IR的水平都升高,其差异有统计学意义;免疫组化结果显示各阶段高糖高脂组大鼠的脂肪组织、肝组织和胰腺组织CD68表达水平明显升高,且随时间推移加重;各阶段高糖高脂组的大鼠肝组织p-JNK1、NF-κB p65表达显著高于正常组,而IκB表达显著低于正常组;高糖高脂组的大鼠胰腺组织p-JNK1和NF-κB p65的表达于第6个月开始升高,第9个月、第12个月达到高峰,而IκB的表达也于第6个月开始降低。结论: IETM可能在MS相关的代谢性疾病中发挥着重要的作用,NF-κB、JNK和GRP78信号可能参与了上述过程。