IRX5促进肝癌细胞的侵袭迁移及其与miR-136-5p靶向关系的验证#br#

摘要：目的 探讨易洛魁族同源盒基因5（IRX5）对肝癌细胞侵袭与迁移的影响,并验证其与miR-136-5p的靶向 关系。方法 取对数生长期肝癌 SMMC7721 细胞,过表达 IRX5 实验设空载质粒（pcDNA3.1）组和过表达 IRX5 （pcDNA3.1-IRX5）组,敲低 IRX5实验设阴性对照（sh-NC）组和敲低 IRX5（sh-IRX5）组。采用 Western blot验证 IRX5 过表达和敲低效率;采用划痕实验和 Transwell 实验检测 IRX5 对肝癌细胞迁移与侵袭的影响;采用 miRanda、 Targetscan生物信息学软件预测 IRX5结合的 miRNA和位点;构建野生型和突变型 IRX5 3'UTR双荧光素酶报告基因 质粒,采用酶切、基因测序方法鉴定重组质粒是否构建成功。取对数生长期 293T 细胞,设野生型质粒+阴性对照 （IRX5-3'UTR-Wt+NC）组和野生型质粒+miR-136-5p（IRX5-3'UTR-Wt+miR-136-5p）组,突变型质粒+阴性对照 （IRX5-3'UTR-Mut+NC）组和突变型质粒+miR-136-5p（IRX5-3'UTR-Mut+miR-136-5p）组,双荧光素酶报告系统检 测各组荧光素酶活性。结果 过表达 IRX5组 IRX5蛋白表达水平、细胞迁移及侵袭数量均高于空载质粒组,敲低 IRX5组IRX5蛋白表达水平、细胞迁移及侵袭数量均低于阴性对照组（均P＜0.05）。成功构建IRX5基因3'UTR野生 型和突变型双荧光素酶报告质粒;双荧光素酶实验结果显示,IRX5-3'UTR-Wt+miR-136-5p组双荧光素酶活性低于 IRX5-3'UTR-Wt+NC 组（P＜0.01）,IRX5-3'UTR-Mut+miR-136-5p 组与 IRX5-3'UTR-Mut+NC 组差异无统计学意 义。结论 IRX5可促进肝癌细胞的侵袭与迁移,IRX5是 miR-136-5p的一个靶基因,miR-136-5p可能通过 IRX5的 3'UTR抑制肝癌细胞的侵袭与迁移。