建立ERIC-PCR技术快速分析不同耐药性鲍曼不动杆菌的同源性

目的建立肠杆菌科基因间重复序列引物PCR技术(ERIC-PCR技术)用于分析亚胺培南耐药和亚胺培南敏感鲍曼不动杆菌同源性,为判断医院内感染发生提供一种简便的新方法。方法收集2018年3-6月江苏大学附属医院重症监护室患者痰液中分离的非重复鲍曼不动杆菌80株,其中包含50株亚胺培南耐药菌株,30株亚胺培南敏感菌株。使用细菌基因组DNA提取试剂盒提取细菌基因组DNA,PCR扩增菌株ERIC序列,Quantity One软件分析不同耐药性菌株电泳条带以判断菌株同源性。结果 50株亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌可分为6种基因型,其中最多的一种基因型有24株;30株亚胺培南敏感的鲍曼不动杆菌可分为20种基因型,其中最多的一种基因型仅有3株。结论该院ICU来源的亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌的基因型较少,提示该菌株可能发生了医院内感染。ERIC-PCR技术简单、方便,可以快速分析鲍曼不动杆菌同源性,适合于在各级医院中推广。     

H2.0样同源盒基因研究进展

H2．0样同源盒基因（H1x）作为同源盒基因家族成员之一，结构上高度保守，参与造血祖细胞的增殖、分化和成熟，并参与免疫应答的调节，是T—bet的靶基因和调节基因，与多种造血系统疾病、胚胎发育异常性疾病等有关。     

人RORγtm RNA实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

目的: 建立检测人RORγt(retinoid-related orphan receptor gammat) mRNA的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR, qRT-PCR)方法.方法: 根据人RORγt mRNA的保守序列设计特异性引物,提取经PMA和离子霉素刺激的人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)总RNA,并逆转录成cDNA,与pMD-18T载体连接构建质粒标准品.采用qRT-PCR方法检测RORγt mRNA水平,并评价该方法的线性、特异性及重复性.应用该方法检测Graves病(Graves′ disease, GD)患者外周血中RORγt mRNA的相对表达.结果:该方法标准曲线的相关系数为0.998,融解曲线分析显示单个峰,pMD18T-RORγt质粒标准品高、低拷贝数的批内、批间变异系数分别为6.5%,8.4%和9.6%,11.2%.初步研究表明GD患者组RORγt mRNA的相对表达水平明显高于健康对照组(t=-3.72, P<0.01).结论: 建立的检测人RORγt mRNA的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法灵敏、特异且重复性好,为临床应用提供了实验基础.     

消化道肿瘤患者外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的检测

CD4 CD25 调节性T细胞(regulatory T,Treg)是一类维持机体免疫动态平衡的T淋巴细胞亚群,具有免疫无能性和免疫抑制性特点[1-2]。本文对不同的消化道肿瘤、组织类型及治疗前后外周血CD4 CD25 Treg细胞的变化进行观察,以探讨CD4 CD25 Treg细胞的临床意义。1对象与方法1.1研究对象     

铜绿假单胞菌外膜蛋白OprF基因的克隆与原核表达

[目的]克隆铜绿假单胞菌OprF基因,并进行原核表达,以期进一步开展铜绿假单胞菌基因工程疫苗的研究. [方法]利用PCR技术从铜绿假单胞菌基因组中扩增出OprF基因.采用T-A克隆构建pMD18-T-OprF重组质粒,测序正确后经BamH Ⅰ、Hind Ⅲ双酶切获得OprF片段,插入到表达载体pET32a,获得pET32a-OprF重组表达质粒并在表达宿主菌E.Coli BL21中诱导表达,利用Ni-NTA柱对目的蛋白进行纯化,通过SDS-PAGE电泳和蛋白质印迹进行鉴定. [结果]克隆OprF基因(459 bp)并经DNA测序证实,表达重组蛋白OprF并获得纯化蛋白,经SDS-PAGE电泳和蛋白质印迹鉴定正确.[结论]成功克隆了OprF基因并获得原核表达物,为铜绿假单胞菌的致病性研究和开展基因工程疫苗的研制奠定了基础.     

Runx3及其免疫调节作用的研究进展

Runx3作为Runx转录因子家族成员通过对细胞发育、信号转导等生物学作用的调控,参与淋巴细胞、树突状细胞等免疫细胞的分化、增殖和成熟,影响着Th1／Th2的平衡、树突状细胞的迁移和B细胞功能,且对肿瘤细胞具有明显的抑制作用,其作为重要的免疫调节和抑瘤基因正引起人们的广泛关注。     

脐带间质干细胞与壳聚糖支架的生物相容性研究

探讨脐带间质干细胞与壳聚糖支架的生物相容性。分离培养脐带间质干细胞,将其种植到壳聚糖支架上,观察细胞在支架上的形态特征,并检测细胞黏附性和细胞增殖活性。脐带间质干细胞能够在壳聚糖支架上黏附生长,并保持良好的细胞形态,与对照组相比,其黏附率和细胞增殖活性均无显著性差异。脐带间质干细胞与壳聚糖支架之间具有良好的生物相容性,可应用于复合材料的制备。     

IL-25与免疫相关疾病关系的研究进展

IL-25又称为IL-17E,是细胞因子IL-17家族的成员之一,主要由活化的Th细胞和肥大细胞所分泌。与其他家族成员不同,IL-25能够诱导Th2型细胞因子如IL-4、IL-5和IL-13的产生,介导Th2类免疫应答,还能够影响Th17细胞的分化并调节自身免疫性疾病的发生发展。总之,IL-25在多种免疫性疾病的发生发展中都发挥着重要的作用。     

Th9细胞:一种新型效应性CD4+T细胞亚群

长期以来, 人们认为IL-9是Th2类细胞因子, 作用于多种炎症细胞和组织细胞, 在对抗寄生虫感染和诱导变应性疾病, 尤其是过敏性哮喘中发挥着重要的作用.近来研究发现, 机体内存可能在着一群新型的不同于已知的Th1、 Th2及Th17的CD4+ Th细胞亚群, 具有分泌IL-9和IL-10的能力, 有学者称之为"Th9"细胞.由于IL-9主要由Th9细胞分泌, 这就需要对原本归于Th2类的生理或病理改变机制进行重新探讨, 以阐明Th9细胞在细胞免疫中的作用.现就Th9细胞的生物学功能及与相关疾病的关系进行简要综述.     

小鼠树突状细胞过继转移抗原作用的实验研究

用绵羊红细胞免疫小鼠，取其脾脏分离树突状细胞产针这些带有抗原信息的ＤＣＳ经尾静脉注射给小鼠，以观察ＤＣＳ过继转移抗原的作用。结果表明，各试验组小鼠抗体形成细胞及血清中ＳＲＢＣ效价明显高于对照组，Ｐ〈０．０１，再次免疫ＤＣ组抗ＳＲＢＣ效价高于初次免疫ＤＣ组Ｐ〈０．０５，ＤＣＳ具有过断转移抗原的作用。