去泛素化酶USP13在癌症中的研究进展

泛素特异性蛋白酶13(USP13)是USP去泛素化酶家族成员之一,属于半胱氨酸蛋白酶超家族.USP13通过介导底物去泛素化过程,抑制底物泛素-蛋白酶体途径降解,进而参与细胞周期、自噬、天然免疫等多种生理过程的调节.近年来,关于USP13是癌症发生的重要调节因子的报道越来越受到关注.该文系统综述了USP13调控不同癌症的...     

BCR-ABL嵌合基因和佛波酯对EDAG基因表达的影响

目的：EDAG基因是一种与造血细胞发育、分化、恶变相关的新基因，观察具有诱导造血细胞分化的外源刺激剂佛波酯和BCR-ABL嵌合基因分别作用于K562细胞后对EDAG基因表达的影响。方法：实验于2005年在解放军军事医学科学院放射医学研究所杨晓明实验室进行。用聚合酶链反应的方法从人的血液基因组中分离出EDAG基因的调控区2200bp片段，将其克隆到pGL3-basic的含有荧光素酶报告基因的质粒中，转染K562细胞。用佛波酯诱导细胞分化；转染BCR-ABL嵌合基因两种不同的方法，通过检测荧光素酶报告基因的方法，观察用两种不同的方法处理细胞后对EDAG基因表达的影响。结果：①佛波酯诱导K562细胞分化36，48h后EDAG基因表达下调，基因活性分别降低2．5倍和3倍。②转染BCR-ABL嵌合基因到K562细胞24h后，发现EDAG基因表达下调，基因活性降低2．5倍。结论：诱导剂佛波酯和BCR-ABL嵌合基因可以影响EDAG基因在白血病细胞系K562中的表达。     

Toll样受体5激动剂CBLB502蛋白的辐射防护作用

目的研究CBLB502蛋白辐射防护作用。方法 HCT116细胞经CBLB502刺激后,Western印迹法检测NF-κB入核,碱性磷酸酶报告基因法检测CBLB502对NF-κB报告基因的激活。150只C57BL/6J小鼠接受8.0 Gy60Coγ射线照射前随机分为PBS,WR2721,CBLB502 0.02、0.05和0.2 mg/kg共5组,观察小鼠受照后30 d存活率和平均生存时间。另外40只小鼠接受6.5 Gy60Coγ射线照射前随机分为PBS、WR2721、CBLB502 0.2 mg/kg组和正常对照组,照射前1 d和照后30 d内检测外周血细胞。结果 CBLB502可明显促进HCT116细胞NF-κB入核(P<0.01)并呈剂量依赖性激活NF-κB报告基因(r=0.998 3)。CBLB502显著提高8.0 Gy60Coγ射线照射后小鼠的存活率,PBS,WR2721,CBLB502 0.02、0.05和0.2 mg/kg组小鼠照后30 d存活率分别为0、83.3%、13.3%、66.7%和100%;照射后小鼠平均存活时间除0.02 mg/kg给药组与PBS对照相比无差异外,其余各给药组较PBS对照组有显著提高。6.5 Gy60Coγ射线照射后小鼠外周血白细胞、红细胞、血红蛋白和血小板急剧下降,CBLB502 0.2 mg/kg组上述指标降低持续时间较照射对照组明显缩短,开始恢复时间提前,各指标最低值亦明显高于照射对照组。结论 CBLB502蛋白具有体外生物学活性并对急性放射病小鼠有明显的辐射防护作用。     

人甘油激酶慢病毒干涉载体的构建和表达

构建人甘油激酶（GK）基因RNA干扰（RNAi）慢病毒载体,获得稳定下调GK表达的慢病毒。方法 将具有干涉效果的siRNA序列克隆入慢病毒核心质粒pSicoR中,并转染293T细胞进行病毒包装,用慢病毒感染293T细胞并应用FACS测定病毒滴度。以GK干涉慢病毒感染人肝细胞系L02细胞后,应用Western blotting方法检测GK的表达。 结果 成功构建GK干涉慢病毒pSicoR-GK载体并获得慢病毒颗粒,病毒滴度检测可达3×107pfu/ml,GK 蛋白质表达水平下调至对照的约 20%。 结论成功构建人GK基因RNAi慢病毒,为后续GK生物学功能研究奠定基础。     

细胞角蛋白8 GFP/Puro 双标干涉慢病毒系统的构建及对细胞凋亡的影响

目的构建细胞角蛋白8（CK8）的双标慢病毒干涉载体,获得高滴度慢病毒颗粒,感染HCT116细胞建立稳定株,检测CK8
敲低对细胞凋亡的影响。方法将CK8 的siRNA序列插入慢病毒表达载体GV248,并与包装质粒PMD、SPA共转染293T细
胞,36、48 h分两次收集慢病毒上清,应用流式细胞术检测病毒滴度。获得的病毒感染HCT116细胞,用嘌呤霉素筛选阳性细胞,
Western blotting检测干涉效果。采用Annexin V/PI染色检测干涉CK8对化疗药物顺铂诱导的细胞凋亡的影响。结果与结论
成功构建CK8干涉慢病毒载体并得到干涉稳定株,在HCT116细胞中干涉CK8 使细胞对顺铂引起的凋亡更加敏感。
     

在人-小鼠异种移植模型中提高人红细胞产生效率条件的优化

本研究旨在探讨在建立人-小鼠异种移植模型中提高人红细胞产生效率的条件。本研究从三个方面分别进行条件优化：①受体免疫缺陷小鼠品系选择,分别对NOD／SCID和NOD／SCID／IL2rγnull两种小鼠品系进行移植,考察移植后不同品系小鼠嵌合率和人红细胞发育情况;②考察照射剂量和照射方法对小鼠生存率的影响;③优化人造血干细胞培养条件及感染方法,检测重建率及红细胞产生率。结果表明,移植后4周检测小鼠骨髓细胞显示,NOD／SCID／IL2rγnull小鼠人CD45比例可达（51．4±13．9）％,并能检测到人红细胞（5．98±3．46）％;利用x射线分2次对小鼠进行总剂量2．5Gy的照射,照射后小鼠生存率可以达到100％;利用新鲜脐带血分离的CD34＋细胞,不经过冻融和分选过程,在分离后72h内完成转染和移植过程,移植后嵌合率可达（51．4±13．9）％,并且人红细胞产生的效率为（5．98±3．46）％。结论：利用x射线分两次照射NOD／SCID／IL2rγnull小鼠后通过尾静脉注射2×10^5个细胞,新鲜分离的人脐带血CD34＋细胞在移植前缩短体外培养时间（≤72h）,有利于提高免疫缺陷小鼠体内人红细胞产生效率。     

登革病毒感染小鼠细胞免疫功能的变化

登革病毒感染小鼠细胞免疫功能的变化郭庆福詹轶群周洁李胜华梁小兵代庆华为探讨细胞免疫在登革热和登革出血热发病中的作用，用Ⅱ型登革病毒的鼠脑毒种（约１０６ｃｐｕ）静脉感染成年ＢＡＬＢ／ｃ小鼠为模型，并以注射同剂量正常鼠脑的小鼠为对照，分成不同时间组，每组...     

核糖体蛋白RPS3 Ser209影响NF-κB转录活性及其与DNA结合能力

目的：构建人核糖体蛋白RPS3及其Ser209突变体的真核表达载体,初步探讨RPS3Ser209突变体对NF－κB转录活性及其DNA结合能力的影响。方法采用高保真PCR扩增RPS3的CDS序列,克隆入pcDNA－3．1myc－HisB载体,构建RPS3－myc表达载体。以构建成功的RPS3－myc质粒为模板,采用点突变方法构建RPS3Ser209突变体RPS3S209A－myc表达载体。报告基因实验检测RPS3及RPS3S209A对NF－κB转录活性的影响;共聚焦显微镜观察RPS3及RPS3S209A的细胞定位;EMSA 实验检测 RPS3及RPS3S209A的 DNA结合能力。结果成功构建RPS3－myc及RPS3S209A－myc真核表达载体,与野生型RPS3相比,RPS3S290A入核显著减少,其对NF－κB的激活显著降低,对NF－κB的DNA结合能力的影响显著下降。结论核糖体蛋白RPS3在NF－κB信号通路中的作用依赖于其第209位丝氨酸。