重组腺病毒介导的肌浆网钙ATP酶在大鼠心肌细胞的过表达

目的：为研究和评估SERCA2a在充血性心力衰竭的基因治疗中的价值和SERCA2a转基因对心力衰竭病生理的影响。方法：采用重组腺病毒AdEasy系统，构建了含SERCA2a cDNA的重组病毒载体rAd-trSER-CA2a。感染培养的乳鼠心肌细胞，以RTPCR和Western Blotting检测SERCA2a在心肌细胞中的表达。结果：经PCR法和Southern确定目的基因SERCA2a存在于rAd-trSERCA2a基因组中，且连续传代保持其遗传稳定性。感染组心肌细胞SERCA2a蛋白mRNA和蛋白含量分别为对照的4．6倍和1．5倍。结论：我们成功地构建了含SER-CA2a的重组腺病毒rAd-trSERCA2a，该病毒可有效介导SERCA2a在心肌细胞中的表达。     

应用果蝇翼斑试验测试4种除草剂的遗传毒性

每日有大量的除草剂释放到环境中,可能出现对人类遗传物质的潜在危险性。当前,象这类除草剂有1000种以上,许多学者报告表明其中一些除草剂有遗传毒性,因此有必要使用不同的测试方法评价这类化学物的遗传毒性。本文作者应用果蝇翼斑试验研究4种常用     

新型包装材料偏二氯乙烯诱发人外周血淋巴细胞SCE的研究

本文报告应用人外周血淋巴细胞姐妹染色单体互换(SCE)试验对偏二氯乙烯单体(VDC)的细胞遗传毒性进行了检测。研究结果表明,VDC剂量1.5mg/ml和3mg/ml组的SCE发生率与阴性对     

悬浮颗粒物的诱变性与抗诱变性

在研究悬浮颗粒物的诱变性过程中,作者发现悬浮颗粒物甲醇提取液中未被蓝棉吸附的部分具有抗诱变性,经鉴定为长链脂肪酸。     

食品包装材料中化学物向食品迁移和安全评价

本文就国内外食品包装材料中化学物向食品中迁移和安全评价的研究进展作一综述,主要从食品模拟物的选择、样品制备、样品中诱变剂提取方法、迁移物的测定方法、迁移物的诱变性检测及影响迁移的诸因素等方面予以阐述。一、食品模拟物的选择要选择能精确地反映提取物的特性的简单的食品模拟物是困难的,更困难的是天然产品,其组分的差异取决于气候、营养状况、收获季节等,而且,最多数的模拟物能充分说明有限的组分差异。例如,欧共体规定了四种溶剂:蒸馏水、3%醋酸、15%乙醇及精馏橄榄油(olive oil),其中采用橄榄     

SARS病毒N蛋白特异性单链抗体的筛选

目的 利用大容量人源性SARS单链抗体库筛选N蛋白的特异性单链抗体。方法利用RT-PCR的方法克隆了SARS病毒的N蛋白基因，克隆入原核表达载体pBV220，在大肠杆菌DH5a中进行表达并经离子交换色谱纯化后得到了纯度达95％以上的N蛋白，然后以此蛋白包被25cm^2组织培养瓶，对SARS单链抗体库进行先松弛，后严谨的筛选、富集，进行4轮筛选后对所筛的抗体进行ELISA鉴定。结果经过4轮的筛选、富集，得到了1株高亲和力的N蛋白单链抗体N18。结论在对SAILS疾病的早期检测或筛查、SARS病毒的生活周期及发病机理的研究中N18将起到重要的作用。     

“清、消、补、养”中医序贯疗法辨治小儿反复功能性便秘

小儿功能性便秘是儿科常见的消化系统疾病,其反复发作的基本病机为“热、积、虚”。治疗需采用“清、消、补、养”动态序贯疗法。疗程早期以清消之法清热消积通下;疗程中期以补法健脾养阴;疗程后期则以养法调理体质。以中医序贯辨治方案治疗小儿便秘,既可使大便得以通下又可顾护脾胃,同时指导患儿养成良好的生活方式,减少疾病复发。     

白介素-18基因修饰人脑胶质瘤U87／hIL-18细胞的建立

目的构建人白介素18（hIL-18）基因真核表达载体质粒,建立hIL-18基因修饰并星稳定表达的人脑胶质瘤U87／hIL-18细胞。方法从人淋巴细胞cDNA文库钓取hIL-18基因后行PCR扩增,利用pcDNA3．1（＋）质粒为载体,构建hIL—18真核表达质粒pcDNA3．1／hIL-18。将构建的重组质粒转染人胶质瘤细胞U87,采用G418筛选单克隆细胞株,ELISA检测培养上清中的hIL-18蛋白含量,提取细胞RNA,RT—PCR方法检测hIL-18基因在U87／hIL-18细胞中的表达。结果所得hIL-18 cDNA序列与GeneBank比对一致,构建的质粒经PCR、酶切及测序鉴定正确。质粒转染U87细胞后,经加压筛选获得hIL-18基因稳定、高效表达的U87／hIL-18单克隆细胞株,细胞培养72h的上清中,hIL—18蛋白含量达131．2pg／ml,且RT—PCR结果显示细胞中hIL-18基因表达呈阳性。结论成功构建hIL-18真核表达质粒pcDNA3．1/hIL-18,并建立U87／hIL-18单克隆细胞株,为hIL-18基因修饰的胶质瘤疫苗研究打下了基础。     

AFP介导慢病毒载体治疗荷人肝癌裸鼠移植瘤的实验研究

目的 构建甲胎蛋白（AFP）介导的以沉默胰岛素样生长因子1型受体（IGF1R）和表达野生型p53（Wtp53）的重组慢病毒,探讨该慢病毒载体对肝癌干细胞CD45-CD90+双靶点基因系统（IGF1R和Wtp53）和对体内肝癌生长的抑制作用。方法 从肝癌细胞Hep3B系中分离出肝癌干细胞CD45-CD90+细胞亚群,用携带AFP-Wtp53-pPRIME-miR30-shRNA-IGF1R融合基因的慢病毒进行体外转染。利用RT-PCR和Western blotting检测IGF1R、WtP53在细胞内的表达,将荷人肝癌的移植瘤裸鼠随机分为空白对照组（腋下接种未感染任何病毒的CD45-CD90+细胞）、空载体对照组（腋下接种感染空载体慢病毒pPRIME的CD45-CD90+细胞）和实验组（腋下接种感染空载体慢病毒AFP-WtP53-pPRIME-miR30-shRNA-IGF1R的CD45-CD90+细胞）,检测各组的IGF1R表达,微血管密度和细胞凋亡程度。结果 成功构建anti-AFP介导的慢病毒;qRT-PCR和Western blotting检测显示,anti-AFP介导的慢病毒能表达Wtp53并同时干扰IGF1R的表达。体内实验显示,与空白对照组和空载体对照组相比,实验组肿瘤的潜伏期较长,肿瘤体积较小,瘤组织的IGF1R水平、微血管密度较低,但凋亡指数较高,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 anti-AFP介导的慢病毒可高效特异性转染肝癌干细胞CD45-CD90+ 双靶点基因系统,起到杀伤肝癌干细胞及抑制肝癌体内生长的作用。