银杏叶提取物对点燃模型幼鼠学习记忆及海马NMDAR1表达的影响

目的：探讨银杏叶提取物（EGb）对癫癎点燃模型幼鼠学习记忆等认知功能的影响及其可能机制,为临床应用EGb治疗癫癎儿童认知功能障碍提供实验依据。方法：21,35日龄Sprague-Dawley幼鼠各40只,经初筛后随机分为生理盐水对照组(NS)、点燃对照组(PTZ)、EGb大(PTZ+EGb1)、中(PTZ+EGb2)、小(PTZ+EGb3)剂量治疗组,采用戊四氮（PTZ）致幼鼠点燃模型,以Y型电迷宫学习记忆行为训练及免疫组化检测方法,观察用药前后大鼠学习记忆功能和海马NMDAR1表达的变化。结果：①治疗前后大鼠电迷宫试验达标所需电击次数：治疗前不同日龄的各个点燃组与各自NS组相比,达到学会标准所需的电击次数明显增多 (P<0.01)。EGb治疗后不同剂量的各治疗组大鼠达到学会标准的次数均明显少于同龄PTZ组(P<0.01),而同龄EGb 大、中、小剂量治疗组相互比较, 达到学会标准所需的电击次数随治疗剂量的减少逐渐递增(P<0.01)。EGb各剂量治疗组与治疗前比较,达标次数明显减少(P<0.01或P<0.05),而NS组、PTZ组较治疗前没有明显差异(P>0.05)。②NMDAR1免疫组织化学染色: 各日龄PTZ组NMDAR1免疫反应产物COD值较各自NS组明显增强(P<0.01);不同日龄各治疗组与各自PTZ组比较,随治疗剂量的增加,NMDAR1免疫反应产物COD值逐渐降低,差异均有显著性(P<0.01)。结论：EGb可以明显改善发育期不同日龄点燃模型大鼠的学习记忆功能,而且剂量越大,改善作用越明显。这一作用与EGb下调反复癫癎发作后NMDAR1的过度表达有密切关系。     

激光氧液辅助治疗慢性癫痫大鼠的疗效及其对海马内超氧化物歧化酶、丙二醛的影响

目的探讨激光氧液对慢性癫痫大鼠海马组织丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的影响及其脑保护作用的部分机制。方法随机将150只21日龄SD大鼠分为模型激光氧液组(A1组)、模型糖水组(A2组)、盐水激光氧液组(C1组)、盐水糖水组(C2组)及空白对照组(B组)。模型两组采用戊四氮腹腔注射制作慢性癫痫模型,盐水两组给予等体积生理盐水,模型制作成功后分别给予激光氧液及糖水尾静脉注射,空白对照组不予任何处理;采用比色法和羟胺法分别检测海马组织中MDA含量、SOD活性;采用8h视频监控系统观测大鼠行为学变化。结果 B组、C1组、C2组大脑海马内SOD活性、MDA含量差异无统计学意义;慢性癫痫点燃模型制作成功后模型两组(A1组、A2组)SOD活性、MDA含量较非癫痫三组(C1组、C2组及B组)明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);分别给予不同干预后A2组组间各不同时间点比较SOD活性、MDA含量差异无统计学意义,A1组SOD活性、MDA含量呈下降趋势,组间治疗7d之前与7d之后差异有统计学意义(P<0.05),A1组大鼠经过激光氧液治疗后7～14d惊厥发生率显著下降,在第14天时比治疗前下降了50%。A1组与A2组比较7～14d两者表达差异均有统计学意义(P<0.05)。结论激光氧液能减少点燃导致MDA的产生,从而减少SOD代偿性增生,激光氧液能减少点燃大鼠惊厥发作次数。     

癫痫持续状态大鼠海马内Notch通路对HIF-1α调控位点的研究

目的研究低氧诱导因子-1α(HIF-1α)及Notch信号通路下游基因HES1在发育期癫痫持续状态(SE)大鼠海马内的表达变化,探寻Notch信号通路对于HIF-1α的调控位点。方法 176只21日龄SD大鼠随机分为生理盐水对照组(NS组)、戊四氮(PTZ)致SE模型组(PTZ组)、Notch信号通路特异性抑制剂(DAPT)干预组(DAPT组)。PTZ组大鼠腹腔注射PTZ溶液制作SE模型,NS组注射等剂量的生理盐水作为对照,予安定腹腔注射终止SE发作。造模成功后分别于0.5、1、2、4、8 h断头取脑分离双侧海马组织,采用RT-PCR法检测HES 1、HIF-1αm RNA的表达;于2、4、8、12、24 h断头取海马,采用Western blot法检测蛋白的表达。DAPT组在开始造模前30 min腹腔注射DAPT溶液,分别于造模成功后2 h、8 h断头取海马组织,采用RT-PCR法检测2 h时HES1、HIF-1αm RNA的表达,用Western blot法检测8 h时蛋白的表达。结果 SE后的各个时间点,大鼠海马内HES1、HIF-1αm RNA和蛋白表达是增高的,与同一时间的NS组相比差异有统计学意义(P?0.05);与同一时间点的PTZ组比较,DAPT组的HES1、HIF-1αm RNA和蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论在发育期大鼠SE发作后的海马内,HES1基因可能是Notch信号通路中对HIF-1α表达的调控位点。     

银杏叶提取物对发育期癫(癎)大鼠学习记忆的影响

目的 研究银杏叶提取物(EGb)对托吡酯(TPM)引起的发育期癫(癎)大鼠学习记忆功能损害的影响.方法 在徐州医学院实验动物中心对28日龄SD大鼠32只,经初筛后随机分为4组,每组8只,随机选1组,作为正常对照组(NS组),其余3组用戊四氮(PTZ)制作点燃模型,致癫(癎)发作后随机选取1组作为癫(癎)点燃模型组(PTZ组),一组给予TPM为(TPM组),另一组给予EGb和TPM(EGb+TPM组)干预.观察点燃过程及治疗过程中各组大鼠的发作情况,以Y迷宫评价各组大鼠治疗前后的学习记忆能力.结果 TPM组较NS组、PTZ组在Y型迷宫中达标学会天数增多;EGb+TPM组较TPM组在Y型迷宫中达标学会天数减少;EGb+TPM组、TPM组在用药后较PTZ组的癫(癎)发作次数减少.结论 TPM可明显减少癫(癎)大鼠的发作次数与程度,但其对癫(癎)大鼠学习记忆能力有损害;EGb可以改善癫(癎)大鼠的学习记忆能力.     

应用荧光定量PCR法快速诊断柯萨奇病毒性脑炎

目的：采用逆转录PCR结合荧光探针对体外RNA扩增和检测技术即荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）方法测定脑脊液中柯萨奇病毒（CBV）的数量，诊断柯萨奇病毒性脑炎。方法：采用CBV FQ-PCR诊断试剂盒，以一种完全闭管式的PCR和荧光探针杂交技术相结合所产生的实时检测定量PCR法，检测了113例临床诊断为病毒性脑炎患儿的脑脊液标本。结果：46例脑脊液FQ-PCR CBV阳性患者中，CBV拷贝数与临床病情轻重呈正相关，在病程早期CBV阳性率较高。结论：FQ-PCR法可用于柯萨奇病毒性脑炎的早期诊断，对指导治疗和疗效观察有一定的临床意义。     

戊四氮诱导发育鼠癫癎持续状态后海马神经发生及MK-801的影响

目的：探讨戊四氮诱导发育期大鼠癫癎持续状态(SE)后对海马内齿状回颗粒细胞神经发生的影响以及N-甲基D-天冬氨酸受体(NMDAR)拮抗剂MK-801对此结果的抑制作用,从而研究癫癎发作后发育脑海马内神经发生及NMDAR在神经发生中的作用。方法：SD大鼠7,14,21,28d4个日龄组共216只,每组均为54只,每个日龄组大鼠随机分SE组、MK-801组和正常对照组,每组18只。采用5-溴脱氧尿核苷(BrdU)标记新生细胞,再以β微管蛋白Ⅲ(TuJ1)、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)分别标记早期神经元和胶质细胞的单、双标免疫组织化学方法,检测PTZ诱导癫癎持续状态后发育鼠海马齿状回(dentategyrus,DG)神经发生,并用MK-801治疗后观察对其的影响。结果：BrdU注射后第7天和第14天,SE组各日龄幼鼠齿状回BrdU阳性细胞数明显高于同日龄的正常对照组,其中约有80%同时表达TuJ1;MK-801组BrdU阳性细胞数较SE组明显减少(P<0.01),而在第28天三组之间BrdU阳性细胞数无明显差异(P>0.05)。结论：癫癎发作可增加幼鼠齿状回颗粒细胞的神经发生,而NMDAR在癫癎后的神经发生中起着促进作用。     

巨颅伴皮层下海绵样囊肿性脑白质病的病变基因定位于染色体22q13.3上250kb区域内

目的 :巨颅伴皮层下海绵样囊肿性脑白质病 (MLC)是近来被证实的一种新的常染色体隐性遗传病 ,该病的可能病变基因被确定在染色体 2 2qtel上的 3 cM区域内 ,通过研究将病变基因的可能范围进一步缩小。方法 :收集 3 3个家庭中的 3 9例MLC病人 ,对其中能提供丰富遗传信息的 1 2例家庭成员 ,运用 7个微卫星标识和 4个单核苷酸多态性标识进行连锁分析和单倍体型分析。结果 :在重组值为 0 0 2下微卫星标识 3 55c1 8的最大两点LOD值是6 65;采用单倍体型分析进一步将位于 2 2qtel上的MLC病变基因的关键位置缩小在 2 50kb内。结论 :MLC病变基因位于 2 2qtel上 2 50kb内 ,有 4个候选基因被考虑。另外 ,由于其中一个家庭成员存在遗传异质性 ,故考虑MLC可能存在第二个病变基因位点。     

抗癫(癎)药对婴儿痉挛症患儿外周血P-糖蛋白170表达的影响

目的 探讨抗癫(癎)药物(AEDs)对婴儿痉挛症(IS)患儿外周血淋巴细胞中多药耐药基因表达产物P-糖蛋白170(P-gp170)表达水平的影响.方法 应用流式细胞术检测IS患儿P-gp170的表达,根据其治疗方案不同,分为A组(托吡酯,n=6)、B组(丙戊酸钠+托吡酯,n=9)、C组(丙戊酸钠+氯硝西泮,n=6)、D组(托吡酯+氯硝西泮,n=7)、E组(健康对照组,n=8).分别于治疗前、治疗后3个月和6个月检测各组患儿外周血P-gp170表达水平.结果 A、B、C、D组在3个时间点P-gp170表达均较E组显著增高(Pa＜0.001).A、B组3个时间点P-gp170表达水平比较差异均无统计学意义,C、D组6个月时P-gp170表达较治疗前及治疗后3个月显著增高(Pa＜0.05).结论 IS患儿P-gp170外周血表达增高.丙戊酸钠和托吡酯对其表达无明显影响,而氯硝西泮长期应用可能增加P-gp170的表达.     

多巴胺β羟化酶基因多态性与淮海地区汉族人群注意力缺陷多动障碍关联分析

目的 通过多巴胺β羟化酶(DβH)基因rs1611115、rs1108580多态性位点的筛查,探索DβH基因多态性与中国淮海地区汉族人群儿童注意力缺陷多动障碍(ADHD)的相关性.方法 采用病例-对照研究,应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析技术,对入选的50例汉族注意缺陷多动障碍患儿及50例正常儿童的rs1611115、rs1108580位点的基因型进行检测,利用ELISA法检测DβH活性.结果 rs1611115位点3种基因型比较,差异无统计学意义(χ2=0.434,P=0.805);等位基因之间比较差异也无统计学意义(χ2=0.385,P=0.535).rs1108580位点的3种基因型比较,差异有统计学意义(χ2=7.062,P=0.029),但等位基因之间比较,差异无统计学意义(χ2=2.000,P=1.157).结论 淮海地区ADHD患儿中存在rs1611115及rs1108580位点突变基因,但单个rs1611115位点可能与ADHD疾病无关.rs1108580突变位点单独存在时并不起作用,只有它处于纯合状态时才与ADHD相关.