转基因小鼠常见传染病血清学液相芯片技术多重检测方法的建立

目的制备小鼠MHV、LCM、ECT和HANT液相芯片,建立转基因小鼠传染病抗体的xMAP多重检测方法。方法将荧光微球分别与小鼠MHV、LCM、ECT和HANT蛋白进行偶联,并且对最佳蛋白偶联量、检测抗体最佳工作浓度和Streptavidin-PE最佳工作浓度进行优化,制备小鼠MHV、LCM、ECT和HANT液相芯片,对56个转基因小鼠血清样品、阴性血清、阳性血清和质控血清进行xMAP多重检测。并应用传统的ELISA方法对xMAP检测结果进行验证。结果 1)小鼠MHV、LCM、ECT和HANT蛋白的最佳偶联量分别为20μg、20μg、40μg和20μg,检测抗体最佳浓度分别为2μg/mL、2μg/mL、2μg/mL和4μg/mL;Streptavidin-PE抗体最佳浓度均为2μg/mL;(2)xMAP检测结果显示,14号、23号、55号和56号转基因小鼠血清MHV MFI值和index值均高于质控血清,其余小鼠血清的MFI值和index值均低于质控血清,表明14号、23号、55号和56号转基因小鼠MHV抗体阳性,其余小鼠MHV、LCM、ECT和HANT抗体阴性;(3)ELISA检测结果显示,14号、23号、55号和56号转基因小鼠MHV A450值和index值均高于质控血清,其余小鼠血清的A450值和index值均低于质控血清,表明14号、23号、55号和56号转基因小鼠MHV抗体阳性,其余小鼠MHV、LCM、ECT和HANT抗体阴性,该ELISA检测结果与xMAP检测结果相一致。结论建立的xMAP多重检测技术可应用于转基因小鼠的传染病检测。     

主动脉弓狭窄致大鼠慢性心力衰竭模型的建立及病理过程观察

目的观察主动脉弓狭窄致大鼠心力衰竭的病理过程变化。方法沿胸骨剪断大鼠左侧第二根肋骨开胸,于头臂干和左颈总动脉之间行主动脉弓缩窄术(transverse aortic constriction,TAC)建立慢性心力衰竭模型24只,另取大鼠8只行假手术。假手术组于术后12周,模型组分别在TAC术后4周、8周、12周时进行超声心动、血流动力学检测和N端前脑钠素(N-terminal pro-brain natriuretic peptide,NT-pro BNP)测定,并进行心肌组织病理学观察。结果模型组在TAC术后4周时NT-pro BNP显著增加、8周达到峰值(P0.05)、12周时呈下降趋势;超声心动图结果显示,模型组TAC术后4周时射血分数(ejection fraction,EF)、短轴率(fraction shortening,FS)显著升高、左心室收缩末期容积(left ventricular end systolic volume,LVESV)显著减小(P0.05),8周时EF显著升高(P0.05),12周时EF显著降低、左心室舒张末期容积(left ventricular end diastolic volume,LVEDV)、LVESV显著增加(P0.05);血流动力学检测显示,模型组在TAC术后左室最大收缩速率(left ventricular pressure maximal rate of rise,dp/dtmax)降低、左室最大舒张速率(left ventricular pressure maximal rate of fall,﹣dp/dtmax)升高(P0.05);病理学观察显示,模型组TAC术后4周时心肌细胞肥大、排列紊乱,8周时心肌间结缔组织增生、炎症细胞浸润,12周时心肌细胞凋亡、胶原纤维沉积。结论主动脉弓狭窄致大鼠心力衰竭模型在TAC术后4周时心肌出现代偿性肥厚,8周时心肌出现失代偿的初期反应,12周时出现心肌纤维化,形成不可逆的心力衰竭。     

NLRP3炎症小体在早期动脉粥样硬化ZDF大鼠中的表达及阿托伐他汀的干预

目的 观察NLRP3炎症小体及其介导的炎症因子在早期动脉粥样硬化(AS)Zucker糖尿病肥胖(ZDF)大鼠主动脉组织中的表达,以及阿托伐他汀(ATV)的干预作用。方法 高脂饲喂联合小剂量多次注射VD3建立ZDF大鼠早期AS模型,并给予ATV干预;检测血糖血脂、胰岛素、ox-LDL和hs CRP,并进行主动脉组织病理学检查和NLRP3、caspase 1、IL-1β和TNF-α基因表达的检测。结果 高脂饲喂后ZDF大鼠血糖、血脂、胰岛素和oxLDL水平均显著上升(P<0.05)。注射VD3后,hs CRP水平均显著上升(P<0.05),主动脉组织出现明显的早期AS病变,且NLRP3、caspase 1、IL-1β和TNF-α基因表达显著上调(P<0.05),而ATV组ZDF大鼠血脂、ox-LDL和hs CRP水平均明显下降(P<0.05),AS病变程度减轻,且主动脉组织中NLRP3、Caspase 1、IL-1β和TNF-α基因表达显著下调(P<0.05)。结论 NLPR3炎症小体及其介导的炎症因子参与了ZDF大鼠早期AS的炎症反应,而ATV可抑制NLRP3炎症小体的表达,抑制AS的炎症反应。     

睾酮缺乏对高脂饮食小型猪血脂和肝内脂质沉积的影响

目的 探讨睾酮缺乏对高脂饮食小型猪血脂水平和肝脏脂质沉积的影响.方法 取6~7月龄性成熟后的雄性五指山小型猪18只按体重随机分成三组,即不去势组,去势组和去势加睾酮处理组,每组6只.三组动物均采用高脂饲料饲喂12周,每周测定动物体重.采血检测血清睾酮、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和甘油三酯(TG)水平变化.12周后动物处死,采集肝组织,检测肝脏TG和TC含量.肝组织标本石蜡包埋切片后进行苏木素-伊红染色,观察肝脏病理变化. 结果 (1)高脂饮食诱导后,三组小型猪体重均呈线性增长趋势,不去势和去势加睾酮处理组小型猪的体重略高于去势组小型猪,但三者差异不显著;(2)去势小型猪血清睾酮含量显著减少,但给予外源性睾酮后,睾酮水平恢复;(3)去势显著增加高脂饮食小型猪血清TC,LDL-C和TG水平,但对血清HDL-C水平没有显著影响.睾酮处理后,血清TG,TC和LDL-C水平均显著降低;(4)去势组小型猪肝脏TG和TC含量均显著高于不去势组小型猪,睾酮处理后TG和TC含量显著减少;(5)与不去势组小型猪相比,去势组小型猪肝细胞脂肪变性程度增加,睾酮处理后,去势小型猪肝脂肪变性程度明显减轻.结论 睾酮缺乏加剧高脂饮食诱导小型猪的血脂代谢紊乱,增加肝脏脂质沉积.     

Lewis大鼠肾阳虚体质及其HPA功能失衡的研究

目的 对Lewis大鼠肾阳虚体质和HPA功能进行研究。方法 采用氢化可的松皮下注射法和切除肾上腺损伤HPA法建立大鼠肾阳虚模型,同时Lewis大鼠与两种实验性肾阳虚模型进行比较,并用一般体征、行为学、神经内分泌功能等检测和方法评估Lewis大鼠肾阳虚程度。结果 与正常Wistar大鼠比较,Lewis大鼠体重明显重于同周龄的Wistar大鼠,但体温、尿量和抓力明显低于Wistar大鼠（P<0.01）,Lewis大鼠的记忆能力有下降趋势,Lewis大鼠肝脏指数、肾脏指数和肾上腺指数明显降低（P<0.01）,血清ACTH、CRH、cGMP、Cort和尿液17OHCS明显降低（P<0.01）。结论 因基因遗传而致Lewis大鼠肾上腺皮质功能有所减退,Lewis大鼠具有先天性肾阳虚体质-临界性肾阳虚证或肾阳虚证前期。     

血液样本处理方式对Wistar大鼠血液生化指标检测结果的影响

目的观察血液样本处理方式对大鼠血液生化指标检测结果的影响。方法取体重180~220 g的SPF级Wistar大鼠40只,雌雄各半,禁食不禁水12 h后,用3%戊巴比妥钠麻醉后取全血和肝素抗凝血各3 m L。将每种血样分别置于3个1.5 m L的离心管和肝素抗凝管中各1 m L,并分别在室温放置1 h、2 h、4 h后进行离心,测定血糖、血脂、蛋白、肝功能、肾功能、心肌酶等指标。结果血液样本类型和采集后离心前的放置时间对Wistar大鼠的血清或血浆TC、TG、TP、ALB、ALT、ALP、BUN和CREA等指标均无明显影响(P0.05)。但血浆的GLU值显著高于血清(P0.05,P0.01),并随着采集后离心前放置时间的延长持续下降。血清AST和CK、LDH值则均显著高于血浆(P0.05,P0.01),且随采集后离心前放置的延长呈现持续显著的上升(P0.05,P0.01)。而采集后离心前放置时间对Wistar大鼠血浆AST和CK、LDH值均无明显影响(P0.05)。结论血液样本类型对血脂、蛋白和肾功能指标无明显影响,但对GLU、AST、CK、LDH等检测结果有一定影响。采集后离心前的放置时间延长可导致血清血浆GLU下降,血清AST、CK、LDH升高,但对血浆AST、CK、LDH指标无明显影响。     

Lewis大鼠下丘脑中肾阳虚相关mRNA表达及超微结构观察

摘 要：目的 通过对Lewis大鼠下丘脑中肾阳虚相关mRNA表达及超微结构的观察,为进一步研究Lewis大鼠肾阳虚体质的机制提供依据。方法 采用Lewis大鼠与皮下注射氢化可的松法和切除肾上腺损伤HPA法建立的两种实验性肾阳虚模型进行比较,并通过检测各组大鼠下丘脑中TNF-α、IFN-γ、IL-10、CRH、MR、GR mRNA表达和下丘脑、肾上腺组织超微结构的观察等,对Lewis大鼠肾阳虚体质机制进行研究。结果 与正常Wistar大鼠比较,Lewis组大鼠下丘脑GR、IL-2 mRNA表达明显升高（P<0.01）,而下丘脑CRH、TNF-α、IFN-γ、IL-10 mRNA表达明显降低（P<0.01）;Lewis大鼠肾上腺皮质束状带略变薄,线粒体减少,且有轻微变形肿胀;Lewis大鼠下丘脑神经元细胞体胞核大,核形不规则,线粒体明显减少,神经细胞突触减少,突触前部的分泌小泡减少。结论 未经干预处理的Lewis大鼠存在自发性的CRH mRNA低水平表达、HPA轴的功能失衡,存在免疫相关细胞因子mRNA的异常表达和免疫器官一定程度的病理改变, Lewis大鼠具有自发肾阳虚体质或肾阳虚证前期。     

WHBE兔对卵白蛋白诱发变应性鼻炎的敏感性研究

目的通过与日本大耳白兔作比较,来探究WHBE兔对卵白蛋白诱发变应性鼻炎的敏感性。方法 WH-BE兔和日本大耳白兔各20只,各随机分成模型组和正常对照组,每组10只,隔天用卵白蛋白加氢氧化铝腹腔注射作基础致敏7次后用1%卵白蛋白溶液每侧滴鼻0.1 ml激发建立变应性鼻炎模型,观察各组兔子鼻部症状并评分,末次激发后取各组动物的鼻黏膜作甲苯胺蓝染色,计数并比较肥大细胞在各组之间的差异。结果与正常对照组比,变应性鼻炎激发后WHBE兔和日本大耳白兔模型组症状明显(P<0.01),鼻黏膜肥大细胞数量增加(P<0.01);WHBE兔激发后鼻部症状评分有高于日本大耳白兔的趋势,末次激发评分显著高于日本大耳白兔(P<0.05),鼻黏膜肥大细胞数量也显著高于日本大耳兔(P<0.05)。结论 WHBE兔对卵白蛋白加氢氧化铝诱导变应性鼻炎有较强的敏感性,较适合用于变应性鼻炎的研究。     

注射用丹酚酸A抗四氯化碳致大鼠肝纤维化的作用

目的 观察注射用丹酚酸A抗四氯化碳（CCl4）致大鼠肝纤维化的作用.方法 采用皮下注射CCl4诱导大鼠肝纤维化建模;造模4周后,分为模型对照组和丹酚酸A高、低剂量组及丹酚酸胶囊组,另设正常对照组.高、低剂量组分别尾静脉注射5 mg/kg、2.5 mg/kg丹酚酸A;丹酚酸胶囊组经口灌胃丹酚酸浸膏粉50 mg/kg;正常对照组和模型对照组尾静脉注射生理盐水10 ml/kg;各组每日一次,连续给药4周后,测定血清天冬氨酸转氨酶（AST）、谷氨酸转氨酶（ALT）活性,以及肝脏脏器系数、肝组织羟脯氨酸（Hyp）含量和Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的变化.结果 与模型对照组比,丹酚酸A高、低剂量组和丹酚酸胶囊组均可明显改善纤维化大鼠的体征,显著降低肝脏器系数（P＜0.05）;ALT、AST活性、Hyp含量以及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达量在丹酚酸A高剂量组显著降低（P＜0.05,P＜0.01）.结论 注射用丹酚酸A具有抗肝纤维化的作用,且静脉注射5 mg/kg丹酚酸A作用优于口服50 mg/kg丹酚酸胶囊.     

Lewis大鼠肾阳虚体质及其HPA轴功能失衡

目的 对Lewis大鼠肾阳虚体质及其HPA轴功能进行研究。方法 采用氢化可的松皮下注射法和切除肾上腺损伤HPA法建立大鼠肾阳虚模型,同时Lewis大鼠与两种实验性肾阳虚模型进行比较,并用一般体征、行为学、神经内分泌功能等检测和方法评估Lewis大鼠肾阳虚程度。结果 与正常Wistar大鼠比较,Lewis大鼠体重明显重于同周龄的Wistar大鼠,但体温、尿量和抓力明显低于Wistar大鼠(P<0.01),Lewis大鼠的记忆能力有下降趋势,Lewis大鼠肝脏指数、肾脏指数和肾上腺指数明显降低(P<0.01),血清促肾上腺皮质激素(ACTH)、促肾上腺皮质释放激素(CRH)、环磷酸鸟苷(cGMP)、皮质醇(Cort)和尿17-羟皮质类固醇(17OHCS)明显降低(P<0.01)。结论 因基因遗传而致Lewis大鼠肾上腺皮质功能减退,Lewis大鼠具有先天性肾阳虚体质-临界性肾阳虚证或肾阳虚证前期。