膜联蛋白V流式细胞术在肝细胞损害研究中的应用

目的用膜联蛋白Ｖ（Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ）法和碘化吡啶（ＰＩ）法两种流式细胞术定量检测肝细胞凋亡,作出应用评价,并用此方法探讨三七皂甙Ｒｇ１、 Ｒｂ１对急性肝损害的保护作用。方法用Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ法和ＰＩ法 检测脂多糖所致急性肝损害和 Ｒｇ１、 Ｒｂ１对肝损害的保护作用。用 ３Ｈ标记油酸法检测分泌型磷脂酶 Ａ２的活性。结果（ｌ）与ＰＩ染色法比, Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ法有更高的灵敏度和特异性,且仅用此法既能将正常细胞、凋亡细胞和坏死细胞区分开。（２）Ｒｇ１、 Ｒｂ１可明显降低脂多糖所致的大鼠急性肝损伤的凋亡率和坏死率（Ｐ＜ ０．０１）,可明显降低ｓＰＬＡ２的活性（Ｐ＜ ０．０１）。结论（１）Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ 法是理想的定量检测凋亡细胞的方法。（２）Ｒｇ１、 Ｒｂ１可保护 ＬＰＳ所致的大鼠急性肝损害。     

苦参碱诱导K562细胞分化的差异表达基因的研究

目的研究苦参碱诱导人红白血病K562细胞分化的分子机制。方法应用改良的mRNA差异显示逆转技术(DDRT—PCR)筛选苦参碱诱导K562细胞分化相关的差异表达基因；对差异cDNA片段纯化、克隆、测序及Blast分析，采用逆转录一聚合酶链式反应(RT—PCR)方法验证。进一步对其中的未知差异cDNA片段采用Northern杂交确定其转录本的大小及组织分布特性，进而充分利用多种生物信息学资源对差异片段进行结构和功能的预测。结果苦参碱诱导K562细胞前后存在明显的基因表达差异，筛选获得了17条差异条带。其中4个差异显著片段经RT—PCR验证后，在Genbank中分析，有3个为已知基因，1个可能为未知基因，暂命名为KH基因。Northern杂交证实KH基因转录本的大小为1．35kb，分布于正常人体脑组织中。结论苦参碱具有诱导K562细胞基因表达谱发生变化的作用，由苦参碱诱导的K562细胞分化是一个多基因参与的过程；KH基因可能是苦参碱作用K562细胞后表达量发生改变的未知基因，可能与细胞癌变有关。     

实时定量聚合酶链反应检测心血管活性多肽apelin方法的建立

目的：建立实时定量聚合酶链反应(RQ-PCR)检测心血管活性多肽的方法，为快速、准确地分析心脏组织中apelin基因表达奠定基础。方法：根据心血管活性多肽apelin基因序列，设计并合成引物和荧光标记TaqMan探针。将逆转录.聚合酶链式反应扩增的apeLin基因片段克隆至pGEM-Teasy载体，重组质粒经蓝自筛选、酶切、测序鉴定后，作为阳性克隆标准品，用于标准曲线的制定，由此可定量检测出每一样品模板的起始拷贝数。结果：阳性克隆标准品制作的标准曲线可显示循环阈值与模板浓度具有良好的线性关系(r=0.970)，可用于apelin基因表达的起始拷贝数定量测定。结论：RQ-PCR方法较常规PCR技术更为简便、准确、特异、灵敏，对定量检测及研究心血管活性多肽有积极意义。     

Western-blot检测蛋白表达的方法改进及初步应用

目的 探讨 Western-blotting-增强化学发光法（ECL）在分析细胞周期调控蛋白表达中的应用。方法 采用K562细胞,制备细胞核,对电泳,封闭,结合、检测等关键步骤进行了实验条件的摸索和改进,并对我室研究苦参碱诱导K562细胞分化机制的细胞周期蛋白的表达进行了分析。结果 30μg核蛋白质即可检测到K562细胞中,均有不同程度的CyclinE、Cdk2、CyclinD1、Cdk5表达。结论 Western-blotting-ECL法特异性强、灵敏度高,是分析蛋白质表达较为理想的方法。     

维甲类化合物Ro13-7410对HL-60细胞凋亡及分化诱导作用

目的：观察第三代维甲类化合物（Ｅ）４［２５，６，７，８ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏ５，５，８，８ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌ２ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｙｌ１ｐｒｏｐｅｎｙｌ］ｂｅｎｚｏｉｃａｃｉｄ（Ｒｏ１３７４１０）对人白血病细胞系ＨＬ６０的影响。方法：应用剂量反应曲线，台盼蓝排斥法，光镜、电镜，凋亡细胞检测试剂盒以及硝基四氮唑蓝还原能力等测定观察Ｒｏ１３７４１０对ＨＬ６０细胞的作用。结果：Ｒｏ１３７４１０能明显抑制ＨＬ６０细胞增殖，并同时诱导ＨＬ６０细胞的凋亡和分化。结论：Ｒｏ１３７４１０作用于ＨＬ６０细胞后可使ＨＬ６０细胞发生凋亡和分化，其诱导的分化作用比同等浓度的全反式维甲酸弱     

聚合酶链反应检测肿瘤细胞株的端粒酶活性

目的比较聚合酶链反应酶免法（ＰＣＲＥＬＩＳＡ）和聚合酶链反应聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＣＲＰＡＧＥ）方法检测白血病细胞端粒酶活性的临床应用价值。方法ＰＣＲＥＬＩＳＡ以地高辛标记对端粒重复片段特异的探针与ＰＣＲ变性产物杂交，通过ＥＬＩＳＡ系统检；ＰＣＲＰＡＧＥ方法直接用电泳法分离ＰＣＲ扩增端粒酶的合成产物，经溴乙啶染色，分析端粒酶活性。结果ＰＣＲＥＬＩＳＡ方法能准确特异地检测白血病细胞的端粒酶活性，检测灵敏度可达１×１０２细胞数。经ＰＡＧＥ分离显示，端粒酶的ＰＣＲ产物有含５０ｂｐ等６条梯带。结论两种方法均可用于临床检测。ＰＣＲＥＬＩＳＡ方法似更简单、方便一些。     

常见食用品简易处置被酚误伤的方法初探

目的:探讨一种在被酚误伤情况下能够及时有效处置的简便方法.方法:测试在不同温度条件下酚与常用食品的互溶性以及不同体积的酚与常用食品的互溶性.结果:通过对6类14个品种的常用食品进行实验发现实用油类、酒类、酱油类和醋类与酚有很好的互溶性.而茶类、蒸馏水等食品与酚的互溶性很差.结论:常用食品中的实用油类、酒类、酱油类与醋类都可以用于被酚误伤后的紧急处置,取材容易,方法简便有效.     

苦参碱对K562细胞UCHT基因表达的影响

[目的]利用凋亡相关基因芯片研究苦参碱对K562细胞基因表达谱的影响，以揭示苦参碱抗肿瘤作用的分子机制。[方法]苦参碱0．4mg/ml作用K562细胞48h后，分别提取对照组和处理组细胞总RNA，采用Superarray公司GEArray Q Series Human Apoptosis Gene Array（HS-002）芯片（含96个凋亡相关基因）筛选出苦参碱作用细胞后的差异表达基因．并用RT-PCR验证其中的LIGHT基因表达的变化。[结果]0．4mg／ml苦参碱作用K562细胞48h后，芯片结果显示37个基因的差异表达在2倍以上，其中表达下调为32个，表达上调为5个。RT-PCR验证了苦参碱对LIGHT基因表达上调的影响。[结论]苦参碱作用K562细胞可上调LIGHT基因的表达。     

苦参碱诱导K562白血病细胞分化和凋亡的实验研究

目的：研究苦参碱的抗肿瘤作用。方法：以人红白血病细胞株Ｋ５６２为研究对象,通过形态学观察和细胞化学染色了解不同浓度的苦参碱对肿瘤细胞的诱导分化作用。并利用程序性细胞死亡检测试剂盒检测肿瘤细胞凋亡的情况。结果：０．１ｇ／Ｌ苦参碱能够诱导Ｋ５６２白血病细胞分化,形态学上类似中幼红和晚幼红细胞,联苯胺染色阳性率由１％￣２％上升至７％,细胞化学染色显示糖原由阴性转为强阳性且阳性率为１００％;１．０ｇ／Ｌ苦