突变敏感性分子开关检测线粒体DNA A1555G位点的条件优化

目的对高保真酶介导的突变敏感性分子开关技术检测线粒体DNA(mt DNA)A1555G位点条件进行优化。方法利用3'硫代磷酸化修饰的突变型引物和野生型引物作为下游引物,在其上游设计一条公共引物分别构成突变引物对和野生引物对,以构建好的包含mt DNA A1555G位点的突变型质粒和野生型质粒为模板,进行高保真聚合酶介导的双向引物延伸反应,对PCR体系中的退火温度、引物浓度、模板浓度等条件优化,通过凝胶成像系统对其PCR结果进行分析确定最佳反应条件。结果分子开关技术检测mt DNA A1555G位点的最佳PCR条件:退火温度为61.0℃,引物浓度为0.6μmol/L,检测模板浓度为103~106copies/μL。结论确定了分子开关技术检测mt DNA A1555G位点的最佳反应条件,为该技术在线粒体DNA的突变筛查中的应用提供依据。     

急性冠脉综合征患者白介素-18及基质金属蛋白酶-9检测的意义

目的探讨白介素-18（IL—18）及基质金属蛋白酶-9（MMP-9）预测急性冠脉综合征（ACS）的意义。方法心内科住院患者79例，根据临床表现及冠脉造影结果分为对照组24例、不稳定性心绞痛（UAP）组预测3l例和急性心肌梗死（AMI）组24例，用酶联免疫吸附法（ELISA）测量其股动脉血清IL—18及MMP-9水平。结果IL—18水平，对照组较UAP组显著降低（P〈0．01），UAP组较AMI组显著降低（P〈0．01）；MMP-9水平，对照组较UAP组显著降低（P〈0．01），UAP组较AMI组显著降低（P〈0．01）。结论IL—18及MMP-9在正常人中表达，在ACS患者中显著升高，可作为ACS重要预测指标，并可能成为ACS的治疗靶点。     

子宫内膜癌PTEN基因968delA突变检测技术平台的构建及初步应用

目的 构建子宫内膜癌PTEN基因968delA突变检测技术平台,为临床分析PTEN基因968delA突变与子宫内膜癌的相关性提供技术支持。方法 设计PTEN基因968delA位点的特异性硫化修饰引物,以本实验室前期构建的包含PTEN基因968delA位点的突变型质粒和野生型质粒为模板,进行高保真聚合酶介导的双向引物延伸反应,采用正交设计进行PCR条件优化,再将其优化后采用突变敏感性分子开关技术检测从南华大学附属第一医院收集的62例临床患者子宫内膜组织样本PTEN基因968delA位点突变。结果 突变敏感性分子开关技术检测PTEN基因968delA位点最佳PCR反应条件为：30个循环、模板DNA(10 ng/μL)0.3μL、引物(10μmol/L)0.5μL、退火温度61℃,灵敏度达10^-3 ng/μL。62例子宫内膜癌组织与21例正常子宫内膜组织标本均未发现PTEN基因968delA突变。结论 成功构建了子宫内膜癌PTEN基因968delA突变检测技术平台,为该技术在PTEN基因968delA的突变筛查中的应用提供了依据。     

晚期胆囊癌介入栓塞化疗的临床疗效观察

原发性胆囊癌因早期诊断困难,大多数患者就诊时已属中晚期,手术切除率低,预后差.近年来随着影像诊断技术的发展和手术技术的提高,积极开展了胆囊癌根治术和扩大根治术,其预后已有所改善.尽管有报道认为行胆囊癌扩大根治术后,这些患者的5年生存率有所提高,甚至有日本学者报道达36％[1],但多数学者认为5年生存率仍在10％左右[2].我院自2002年11月～ 2006年11月间收治46例晚期胆囊癌患者,其中26例行手术治疗,20例行介入栓塞化疗,对两组患者治疗后客观疗效及1～3年生存率进行比较.     

Ⅱ型糖尿病合并脂肪肝患者血清淀粉样蛋白A水平的临床研究

目的探讨血清淀粉样蛋白A（SSA）在新诊断的Ⅱ型糖尿病（T2DM）合并非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）患者中的临床意义。方法将79例新诊断T2DM的分为NAFLD组患者39例,非NAFLD组患者40例,分别测定体质量指数（BMI）、腰臀比（W/H）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、空腹血糖（FPG）、空腹胰岛素（FINS）、血清淀粉样蛋白A（SSA）、糖化血红蛋白（HbA1c）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）、计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）和胰岛素敏感指数（ISI）。结果 NAFLD组患者的血清SSA以及BMI、W/H、ALT、AST、FINS、TG及HOMA-IR较非NAFLD组患者显著增高（P〈0.01）,NAFLD组的年龄I、SI、HDL显著降低（P〈0.01）。新诊断的T2DM是否合并NAFLD与年龄、BMI、FINS及SSA有相关性（P〈0.05）。SSA与BMI,FINS,W/H呈正相关（P〈0.05）。结论 BMI、空腹胰岛素及SSA水平是新诊断的T2DM合并NAFLD的危险因素,并且BMI、腰臀比、空腹胰岛素水平与SSA水平具有相关性。     

股骨近端并股骨干骨折的手术治疗

目的 探讨应用股骨近端髓内钉和近端解剖锁定钢板治疗股骨近端骨折并股骨干骨折的手术方法和疗效.方法 2005年1月至2012年1月收治23例股骨近端并股骨干骨折病人,分别采用髓内钉固定和有限切开复位锁定钢板固定治疗.结果 23例病人全部获得9个月～4年的随访,平均23个月,采用Friedman-Vyman系统标准评价结果:优8例,良12例,一般3例,差0例,优良率为87％,未出现髋内翻畸形、内固定物折断、脱钉、螺钉切割股骨头、钢板松动、感染等并发症.骨折处均达骨性愈合,无髓内钉松动、断钉及股骨头坏死等并发症出现.膝、髋关节功能良好.结论 股骨髓内钉固定或有限切开复位锁定钢板内固定均是治疗股骨近端并股骨干骨折的有效手段,但各有不同的手术适应证,两种手术方式均能做到创伤小、操作简便易行,固定牢固可靠、利于骨折愈合的等优点,良好的保留患肢的功能.技术的关键是达到优良复位.     

CD₄⁺CD₂₅⁺调节性T细胞及Foxp3在儿童传染性单核细胞增多症发病中的作用

目的探讨CD₄⁺CD₂₅⁺调节性T细胞(Treg)及其转录因子Foxp3在儿童传染性单核细胞增多症(IM)发病中的作用。 方法选择2010年4月至2011年1月于四川省人民医院诊治的35例IM患儿的外周静脉血标本(每例患儿分别采集2个)为研究对象,并按照标本采集时期分为IM急性期组(n＝35)和IM恢复期组(n＝35)。选择同期于本院儿童保健门诊进行常规体检的35例健康儿童的外周静脉血标本(每例儿童采集1个)为对照组(本研究遵循的程序符合本院人体试验委员会所制定的伦理学标准,得到该委员会批准,分组征得受试对象监护人的知情同意,并与之签署临床研究知情同意书)。分别检测3组血样标本中CD₃⁺,CD₃⁺CD₄⁺,CD₃⁺CD₈⁺,CD₄⁺CD₂₅⁺ Treg表达率及Foxp3 mRNA水平,并进行统计学分析。IM患儿与健康儿童的年龄及性别分布比较,差异无统计学意义(P>0.05)。 结果IM急性期组外周血CD₃⁺,CD₃⁺CD₄⁺,CD₃⁺CD₈⁺,CD₄⁺/CD₈⁺和CD₄⁺CD₂₅⁺ Treg测定结果分别与IM恢复期组和对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);IM急性期组Foxp3 mRNA表达水平显著降低,分别与IM恢复期组和对照组比较,差异也有统计学意义(P<0.01),IM恢复期组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。IM急性期组CD₄⁺CD₂₅⁺ Treg与Foxp3 mRNA表达呈正相关关系(r＝0.823,P<0.05)。 结论IM急性期存在明显免疫失衡,即CD₃⁺CD₈⁺明显增高,CD₃⁺CD₄⁺及CD₄⁺/CD₈⁺明显降低,其免疫失衡原因可能是由于CD₄⁺CD₂₅⁺ Treg数量降低及其转录因子Foxp3表达下调导致的免疫抑制功能不足所致。     

除菌过滤器验证(一):法规要求概述

文中介绍了液体除菌过滤和微生物污染水平控制过滤的区别,并结合历史发展阐释了现行法规对液体除菌过滤的定义。在此基础上,重点结合国外法规要求,对除菌过滤器的相关验证要求和项目进行了综述。     

儿童EB病毒感染传染性单核细胞增多症T细胞亚群的动态变化

目的研究儿童传染性单核细胞增多症(IM)不同时期外周血T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+细胞的改变及其变化规律。方法在病程不同时期采集30例IM患儿的外周血,肝素抗凝,采用流式细胞术方法分别检测了30例IM患儿急性期、病程1月、病程3月、病程6月及正常对照组外周血淋巴细胞CD3+、CD4+、CD8+细胞表达率。结果1IM急性期CD4+(14.84±5.03%)及CD4/CD8(0.25±0.13%)明显降低,CD3+(82.55±5.49%)、CD8+(66.17±8.10%)明显增高,与其余各组比较均存在显著性差异(P<0.001);2随时间推移及感染的控制CD4+及CD4/CD8细胞逐渐升高,但病程1月(CD4+:27.89±6.04%,CD4/CD8:0.66±0.16%)与病程3月(CD4+:29.49±4.49%,CD4/CD8:0.76±0.20%)比较无显著性差异(P>0.05),与病程6月(CD4+:32.81±6.79%,CD4/CD8:0.93±0.31%)及对照组(CD4+:65.04±6.50%,CD4/CD8:1.18±0.35%)比较,均存在显著性差异(P<0.001);3病程1月CD3+(76.25±8.33%),CD8+(46.35±9.43%)与病程3月CD3+(71.20±5.32%),CD8+(37.76±8.28%)、病程6月CD3+(67.98±8.01%),CD8+(33.96±7.37%)及对照组CD3+(65.04±6.50%),CD8+(30.72±16.51%)比较均存在显著性差异(P<0.001);4实验各组病程3月与病程6月CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+比较均无显著性差异(P>0.05),但3月组与对照组比较均存在显著性差异(P<0.01);5实验各组病程病程6月CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+与对照组比较均无显著性差异(P>0.05)。结论IM急性期CD3+、CD8+明显增高,CD4+及CD4/CD8明显降低,随着时间推移及感染控制,CD3+、CD8+逐渐降低,CD4+及CD4/CD8逐渐增高,6月CD3、CD4、CD8的表达及CD4+/CD8+达正常水平。     

淋巴瘤患者血清血管内皮生长因子水平的检测及其临床意义

目的检测淋巴瘤患者血清血管内皮生长因子（VEGF）水平并探讨临床意义。方法采用ELISA方法检测淋巴瘤患者血清VEGF水平。结果淋巴瘤患者血清VEGF水平,初诊未治和未缓解组显著高于完全缓解组和正常对照组（P〈0．01）。而完全缓解组与正常对照组差异无统计学意义（P〉0．05）。早期组显著高于正常对照组（P〈0.01）。晚期组显著高于早期组和正常对照组（P〈0．01）。结论淋巴瘤患者血清VEGF水平可能在一定程度上反映淋巴瘤血管新生的程度和疾病状态。VEGF可以被看作是判断淋巴瘤预后的指标。