人上睑眶隔脂肪来源的脂肪干细胞的分离培养及鉴定

目的探讨人上睑眶隔来源的脂肪提取脂肪干细胞(ADSCs)的可行性,并进行分离、培养及鉴定。方法取健康成年人上睑眶隔脂肪组织,用胰酶进行消化后收集细胞接种于培养瓶内,采用差速贴壁法纯化细胞。用HE染色、免疫荧光进行细胞鉴定,并进行成脂、成软骨诱导。结果 HE染色显示细胞形态为长梭形,呈漩涡状生长。免疫荧光鉴定结果显示细胞表面抗原CD44、CD29阳性表达,CD106、CD34阴性表达,说明分离培养的细胞是脂肪干细胞。成脂、成骨诱导实验证明所得细胞有多向分化的能力。结论可以从人上睑眶隔脂肪组织提取出ADSCs,并有多向分化能力,为今后ADSCs的取材提供了新的路径。     

重组人睫状神经营养因子脂质体制备及性质

目的制备重组人睫状神经营养因子（recombinant human ciliary neurotrophic factor,rhCNTF）脂质体,提高rhCNTF穿透血脑屏障能力。方法采用薄膜超声法制备rhCNTF脂质体,测定包封率。分别用rhCNTF原液、rhCNTF脂质体及生理盐水尾静脉注射Balb/C小鼠,0,2,6,12,24 h后测小鼠脑组织中rhCNTF含量。结果制得的rhCNTF脂质体形态圆整,平均直径为85.0 nm,包封率为93.14%。用ELISA法测定小鼠脑组织中rhCNTF的含量,rhCNTF原液组和rhCNTF脂质体组存在显著差异。结论制备的rhCNTF脂质体能提高rhCNTF穿越血脑屏障的能力,为rhCNTF的进一步应用和研究提供了依据。     

民族药物知识产权保护方法探讨

系统地介绍我国民族药物知识产权保护方法,针对民族药物的特点分析各种保护方法的优劣。在此基础上,提出合理保护民族药物知识产权的策略,从而让更多的人认识知识产权的重要价值,增强民族药物知识保护与利用的意识,以促进民族药物产业健康有序地发展。     

重组新型人角质细胞生长因子异构体抗肝纤维化实验研究

角质细胞生长因子(KGF)是皮肤表层的细胞因子，已证明有二种类型即KGF-Ⅰ和KGF-Ⅱ。能促进角质细胞增生、保护黏膜细胞和肝细胞。重组新型人角质细胞生长因子变构体K102经基因工程改造而成，由大肠杆菌重组表达和制备，能抑制成纤维细胞增殖和分化，而天然KGF不具备此作用。实验目的在于评价K102对实验性肝纤维化的预防和逆转治疗作用。     

重组人睫状神经因子聚乙二醇化条件的优化

目的 对单甲氧慕聚乙二醇丁醛(mPEG-ButyrALD,相对分子质量20×103)修饰重组人睫状神经因子(rh-CNTF)的条件进行优化.方法 优化了pH值、温度、时间、rh-CNTF与PEG的修饰比例、rh-CNTF浓度等修饰条件,并对修饰产物行分离纯化.鸡胚背根节培养法检测和比较rh-CNTF和PEG-rhCNTF的体外生物学活性.结果 rh-CNTF与PEG的修饰比例、rh-CNTF的浓度和pH值是主要影响因素,最佳pH为6.5,最佳rh-CNTF浓度为1～2 mg/ml,rh-CNTF与PEG的最佳质量比为1:1,时间和温度影响甚微.rh-CNTF的体外神经营养活性约为PEG-rhCNTF的2倍.结论 本法优化了修饰重组人睫状神经因子的条件.     

重组人角质细胞生长因子的体内外作用研究

 目的研究重组人角质细胞生长因子(K102)在体内和体外的生物活性。方法运用3T3BALB/c细胞和大鼠CCl₄肝纤维化模型对K102在体内体外的生物活性进行测定。结果体外生物活性检测:K102明显抑制成纤维细胞的生长,bFGF对K102有一定拮抗作用,且具有剂量依赖性;体内生物活性检测:治疗给药组血清ALT,AST和肝组织羟脯氨酸含量较CCl₄模型组明显改善。病理组织学检查见K102大、小剂量组肝细胞脂肪变性和水样变性比较轻,汇管区纤维组织仅有轻微增生。结论K102的抗肝纤维化作用可能是通过促进肝细胞增生、合成代谢,以及抑制成纤维细胞生长、减少纤维组织增生而产生的。     

巨噬细胞集落刺激因子（M－CSF）抑制c－kit的表达

已经证实细胞原癌基因ｃ－ｋｉｔ的蛋白产物是造血于细胞因子（ＳＣＦ）或肥大细胞生长因子（ＭＧＦ）的细胞膜上受体，对于造血细胞增殖和分化调节起重要作用。ｃ－ｋｉｔ的表达受到多种细胞因子的调节，其中已知ＩＬ－４和ＴＧＦ－β１可抑制它的表达。近来许多实验都发现ＳＣＦ与ＩＬ－３，ＧＭ－ＣＳＦ，Ｇ－ＣＳＦ，ＥＰＯ，ＩＬ－１和ＩＬ－６对造血有协同增强作用，但与Ｍ－ＣＳＦ无协同作用。Ｍ－ＣＳＦ的受体是原癌基因ｃ－ｆｍｓ的蛋白产物，与ｃ－ｋｉｔ的产物一样属单链穿膜的具磷酸化激酶活性的受体。我们应用小鼠巨噬细胞为模型，发现Ｍ－ＣＳＦ抑制ｃ－ｋｉｔ的表达，可能是这两种造血刺激因子无协同作用的原因。     

重组人胰岛素类似物DesB30的结构及生物效价分析

目的确认重组人胰岛素类似物DesB30的结构,分析其生物效价。方法在毕赤酵母中构建表达含有短C肽AAK并去掉B链第30位氨基酸（T）的人胰岛素原类似物HMPIDesB如,经胰蛋白酶酶切纯化获得DesB如。利用N末端氨基酸序列测定,质量肽谱分析,圆二色谱等方法进行结构确认及质量分析。利用RP—HPLC法,小鼠血糖法,脂肪细胞法分析其生物效价。结果DesB30的N端氨基酸序列、二硫键配对、圆二色谱值与理论值一致,其生物效价与人胰岛素基本一致。结论毕赤酵母分泌表达的胰岛素类似物DesB30结构正确,胰岛素去掉B链第30位的苏氨酸,不影响其生物活性。     

Fyn酪氨酸蛋白激酶参与粒-巨噬细胞集落刺激因子受体诱导的酪氨酸磷酸化过程(英文)

本实验研究了小鼠巨噬细胞中原癌基因fyn酪氨酸蛋白激酶(PTK)的活性和酪氨酸磷酸化过程在粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)受体诱导的信号转导中的作用。用抗fyn,抗磷酸化酪氨酸和抗GM-CSF受体(β链)单抗进行了蛋白免疫印迹、免疫沉淀、膜交联以及PTK活性测定。结果发现在小鼠骨髓来源的巨噬细胞(BMDM)中,GM-CSF刺激后15分钟内,可见细胞浆中数种蛋白的酪氨酸磷酸化,其中p59被证实是fyn癌基因蛋白。同时,fyn酪氨酸蛋白激酶(PTK)活性 在GM-CSF刺激后被增强二倍以上。细胞膜交联实验显示在GM-CSF刺激后形成的p330-450膜复合体中p59fyn蛋白与GM-CSF受体β链相关联。     

细菌脂多糖对小鼠巨噬细胞生长的调节作用

目的研究细菌脂多糖对小鼠巨噬细胞的生长调节作用。方法应用小鼠腹腔渗出性巨噬细胞（ＰＥＭ）和巨噬细胞株Ｊ７７４Ａ．１为靶细胞，测定细菌脂多糖（ＬＰＳ）对Ｍ－ＣＳＦ和ＧＭ－ＣＳＦ刺激的巨噬细胞集落细胞形成的影响，同时用１２５Ⅰ标记的ＧＭ－ＣＳＦ受体结合实验测定了ＬＰＳ对巨噬细胞膜上的ＧＭ－ＣＳＦ受体数目的调节。用反向ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）法检测ＴＴＧＦ－β１对巨噬细胞产生ＩＦＮ－γ的作用。结果ＬＰＳ单独对巨噬细胞无生长调节作用，但可抑制ＧＭ－ＣＳＦ对巨噬细胞的增殖效应。而在ＴＧＦ－β１同时存在下，ＬＰＳ的抑制效应被消除。ＲＴ－ＰＣＲ证实ＬＰＳ诱生巨噬细胞产生的ＩＦＮ－γ可被ＴＧＦ－β１有效地抑制．而已知ＩＦＮ－γ是强烈的巨噬细胞生长抑制因子。此外，１２５Ⅰ－ＧＭ－ＣＳＦ受体结合实验发现，同ＴＧＦ－β１一样ＬＰＳ增强ＧＭ－ＣＳＦ受体数目的表达。结论ＬＰＳ参与了多种细胞因子对巨噬细胞生长的调节网络，根据存在的细胞因子不同，表现为抑制和增殖的双重作用。