骨髓间充质干细胞自体移植促进兔缺血肢体的血管生成

背景:常规药物治疗、介入或血管旁路移植手术对下肢动脉闭塞症的远期疗效均不理想。近年来采用干细胞的血管再生疗法在梗死部位修复或重新建立有效侧支循环逐渐成为可能。目的:验证骨髓间充质干细胞自体移植对兔缺血后肢血管再生的促进作用。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-08/2006-11在江苏省血吸寄生虫病防治研究所完成。材料:选用新西兰大白兔8只,制备兔后肢缺血模型。按随机数字表法分为2组,实验组及对照组各4只。方法:分离培养实验组兔骨髓间充质干细胞,5-溴-2-脱氧尿苷标记,将骨髓间充质干细胞制成悬液注射于实验组兔后肢缺血部位;对照组注射等量生理盐水。主要观察指标:2周后行兔股动脉二维及彩色多普勒超声检测,观察移植前后的血管内径、血流峰值速度及血流加速时间等;取缺血部位肌肉组织,通过免疫荧光及苏木精-伊红染色观察移植细胞分布及血管生成情况。结果:细胞移植2周后实验组兔的股动脉内径、血流峰值速度均大于对照组(P<0.01),血流加速时间短于对照组(P<0.01)。免疫荧光染色结果显示实验组兔移植部位有抗5-溴-2-脱氧尿苷染色阳性细胞存在;苏木精-伊红染色结果显示实验组缺血部位血管密度高于对照组。结论:骨髓间充质干细胞具有促进血管生成的作用,自体移植可望成为一种简单的、有效的治疗下肢缺血的方法。     

混合淋巴细胞反应体系中胎盘间充质干细胞的免疫抑制效应

背景:胎盘由滋养细胞及大量起源于胚外中胚层的间充质和血管共同组成,提示胎盘中存在间充质干细胞成分.目的:探索胎盘间充质干细胞对混合淋巴细胞反应体系中淋巴细胞增殖和细胞因子分泌的影响,评价其免疫学特性.方法:分离培养胎盘间充质干细胞,采用人以及兔双向混合淋巴细胞反应体系,根据胎盘间充质干细胞:外周血单个核细胞的不同比例(1:5,1:10,1:20,1:50,1:100,1:500)加入丝裂霉素处理胎盘间充质干细胞.3H掺入法测定淋巴细胞增殖率并用 ELISA法测定混合培养上清液中白细胞介素2和γ-干扰索的含量.结果与结论:胎盘间充质于细胞抑制人或兔混合淋巴细胞反应体系中淋巴细胞的增殖,抑制率与加入的胎盘间充质干细胞数量成正比,同时胎盘间充质干细胞减少混合淋巴细胞反应中细胞因了白细胞介素2、γ-干扰素的分泌.提示胎盘间充质于细胞具有免疫调节作用,可以抑制同种异体或异种混合淋巴细胞反应体系中淋巴细胞的增殖.     

体外诱导羊膜来源间充质干细胞分化为血管内皮细胞

背景：羊膜来源间充质干细胞植入机体不同类型组织后是否可以分化为相应组织靶细胞呢？ 目的：检测血管内皮细胞生长因子在体外诱导人羊膜间充质干细胞分化为血管内皮细胞的可行性。 方法：分离培养羊膜间充质干细胞,鉴定其表面抗原表达,用含体积分数2%胎牛血清以及50 μg/L血管内皮生长因子的条件培养基诱导,诱导后细胞通过内皮细胞标志物血管内皮生长因子受体2以及v-WF染色鉴定。 结果与结论：羊膜间充质干细胞表面抗原CD29、CD44、CD105阳性,CD34、CD45、CD106以及HLA-DR阴性。诱导后细胞形态明显改变,内皮细胞标志物血管内皮细胞生长因子受体2以及v-WF染色结果阳性。提示羊膜间充质干细胞在体外具有分化为血管内皮细胞的能力。     

体外诱导胎盘间充质干细胞分化为内皮细胞的可能性

目的：观察体外诱导胎盘间充质干细胞分化为血管内皮细胞的可行性。 方法：实验于2004-05／-2005—10在无锡第三人民医院细胞实验室完成。①分离培养胎盘间充质干细胞，鉴定其表面抗原，分别加入CD34-nTC，CD45-PE，CD19-FITC，CD29-FITC，CD44-PE，CD105-FITC，CD106-FITC，HLA—DR—FITC鼠抗人单克隆抗体，进行流式细胞仪分析。②培养细胞诱导分化：取培养2代细胞，用培养基为DMEM／F12＋体积分数为0．02的胎牛血清＋50μs／L血管内皮细胞生长因子的条件培养基诱导。③诱导细胞免疫组织化学染色分析：诱导后细胞通过内皮细胞标志物KDR，FLT—1以及v—WF染色鉴定。 结果：①胎盘间充质干细胞的原代培养结果：随着细胞密度的增加，胞体变得细长，形态类似成纤维细胞。原代细胞生长较慢，传代细胞在3～5d左右可增殖1倍。培养的细胞可以稳定生长传代。②胎盘间充质干细胞的表面抗原测定结果：胎盘间充质干细胞表面抗原CD29，CD44，CD105阳性；CD34，CD45，CD19，CD106以及HIA—DR阴性。③胎盘间充质干细胞的诱导分化及染色结果：诱导后细胞形态明显改变，胞体逐步回缩，立体感增强，内皮细胞标志物KDR，FLT—1以及v—WF染色结果阳性。 结论：胎盘间充质干细胞在体外具有分化为血管内皮细胞的能力，可以作为干细胞研究的一种有效来源。     

自体骨髓基质细胞移植治疗骨不连及骨缺损

目的研究骨髓基质细胞对骨不连与骨缺损的治疗效果。方法抽取患者自体骨髓基质细胞,在体外培养增殖后再植于骨不连与骨缺损处,观察治疗效果。结果4例骨不连与1例骨缺损患者均治愈,疗效良好。结论骨髓基质细胞可用于骨不连与骨缺损的治疗。     

TGF-β3诱导骨髓间充质干细胞表达软骨细胞表型的实验研究

目的探讨TGF-β3体外诱导骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞的可行性。方法分离培养骨髓间充质干细胞,鉴定其表面抗原,用含10%胎牛血清以及10ng/mL转化生长因子TGF-β3的条件培养基诱导,诱导后细胞通过软骨细胞特征性染色鉴定。结果骨髓间充质干细胞表面抗原CD29、CD44、CD105阳性,CD34、CD45、CD106以及HLA-DR阴性。诱导后细胞形态明显改变,甲苯氨蓝以及Ⅱ型胶原染色结果阳性。结论TGF-β3具有促进骨髓间充质干细胞在体外分化为软骨细胞的能力,可以作为组织工程种子细胞的一种有效来源。     

红景天苷联合HGF对脐血间充质干细胞向肝样细胞分化的诱导作用观察

目的观察红景天苷联合肝细胞生长因子(HGF)诱导脐血间充质干细胞(MSCs)向肝样细胞分化的作用。方法将第5代脐血MSCs随机分成4组,A组不处理,B组分别加入5(B1)、10(B2)、20μmol/L(B3)的红景天苷5μL,C组分别加入5(C1)、10(C2)、20 ng/mL(C3)的HGF 5μL,D组分别加入B1+C1(D1)、B2+C2(D2)、B3+C3(D3)的红景天苷和HGF。分别于培养第1、7、14、21天,光镜下观察细胞形态变化,并计数肝样细胞的数量;采用全自动生化仪检测细胞上清液中的谷丙转氨酶(ALT),溴甲酚绿法检测上清液中的白蛋白(ALB),观察肝样细胞的分泌功能。结果 A组细胞均呈长梭形,各时点无明显变化;B、C、D组第7天梭形细胞两端逐渐变短,第14、21天细胞由长梭形变为三角形、多角形或类圆形(肝样细胞)。A组高倍镜下均未见肝样细胞,B、C、D组在第7、14、21天均可见肝样细胞(P均<0.05),数量随时间延长而增加(P均<0.05);D组肝样细胞数量高于同时点的B、C组(P均<0.05),并随药物浓度增加而增加;D2、D3与D1比较,P均<0.05,而D3与D2比较,P>0.05。A组各时点细胞上清液中均未检测到ALT、ALB,B、C、D组第14、21天均检测到ALT、ALB(P均<0.05),并随时间延长而升高(P均<0.05);D组ALT、ALB水平均高于同时点的B、C组,且随药物浓度的增加而升高(P均<0.05),D2、D3与D1比较,P均<0.05,而D3与D2比较,P>0.05。结论与单用HGF、红景天苷相比,二者联合应用可增强脐血MSCs向肝样细胞分化的诱导作用,其中以10μmol/L红景天苷联合10 ng/mL HGF的诱导效果最佳。     

人骨髓基质细胞向神经元分化的两种体外诱导方法比较

目的通过体外定向诱导人骨髓基质细胞(hBMSCs)使其分化为神经元,比较两种诱导方法。方法采用Percoll-Paque液(1.073g/ml)分离hBMSCs,体外扩增培养后,分别加入丁羟茴醚(BHA) 二甲基亚砜(DMSO)和β-巯基乙醇(BME)诱导hBMSCs分化为神经元,光镜下形态学观察,及免疫组化检测特异性神经元烯醇化酶(NSE),神经丝蛋白(NF),胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞数。结果hBMSCs在加入两种诱导剂后均有胞体收缩,突起伸出,NSE,NF,GFAP均有不同程度阳性率,但丁羟回醚 二甲基亚酚组的细胞存活率高,神经元阳性率(诱导成功率)高。结论丁羟茴醚 二甲基亚酚是一种较好的体外诱导hBMSCs分化为神经元的诱导剂。     

嗅成鞘细胞移植对中枢神经系统脱髓鞘疾病的治疗作用

中枢神经系统(central nervous system，CNS)中的白质对各种有害因素诸如感染、中毒、退行性变及营养缺乏产生的典型反应是脱髓鞘性变。对脱髓鞘疾病的病理机制及转归、应用嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells．OECs)治疗该疾病的实验研究和临床应用前景、嗅鞘细胞同目前另两个热点细胞即雪旺氏细胞和少突胶质细胞作用的比较等一一进行阐述。针对该项成鞘细胞移植技术仍存在的不足，有必要对嗅鞘细胞的分子生物学基础进行更深入的研究。     

用于临床移植的不同时期人胚胎嗅鞘细胞的形态学变化

目的 建立体外培养纯化人胚嗅鞘细胞的模型,观察不同时期人胚嗅鞘细胞形态学变化. 方法 采用无血清培养技术,差速贴壁+免疫吸附的纯化方法 ,培养并纯化取自 3～ 7个月人胚嗅球的嗅鞘细胞.根据 GFAP免疫组化染色结果统计培养所得嗅鞘细胞纯度. 结果 此培养方法可获得大量、高纯度的嗅鞘细胞. 结论 成功培养了人胚嗅鞘细胞,为进一步临床移植应用研究提供纯度较高的人胚嗅鞘细胞.