HBV前C基因突变株感染者血清抗-HBe效价及特异性细胞免疫功能研究

用ＰＣＲ及寡核苷酸探针杂交技术筛选出ＨＢＶ前Ｃ基因突变株、野毒株感染者ＨＢＶ已清除者,以血清性ＨＢｓＡｇ及Ｃ细胞识别的抗原表位ＨＢｃＡｇ５０－６９合成多肽为特异性刺激原在体外进行淋巴转化实验,用ＥＬＩＳＡ法检测突变株感染者及ＨＢＶ已清除者血清抗－ＨＢｅ效价。结果突变感染者抗－ＨＢｅ效价显著高于ＨＢＶ已清除者;对ＨＢｓＡｇ的应答,突变组其余各组差异无显著性。对合成多肽的应答,突变组显著低于其余各组     

乳腺癌c-erbB-2、nm23基因扩增及产物表达

目的：探讨乳腺癌癌基因和抑癌基因表达与预后的关系。方法：应用组织原位杂交及免疫组化技术对２５例新鲜乳腺癌标本的ｃ－ｅｒｂＢ－２、ｎｍ２３基因扩增及产物表达进行了检测。结果：ｃ－ｅｒｂＢ－２、ｍＲＮＡ杂交信号主要位于癌细胞胞浆中，杂交颗粒的多少不均，阳性细胞呈异质性分布，ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白在该组表达率为４０％（１０／２５），ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白阳性颗粒分布于癌细胞膜上，随着肿瘤恶性程度的增加，ｃ－ｅｒｂＢ－２基因扩增及蛋白表达都增加（Ｐ＜０．０５）。ｎｍ２３基因扩增及产物表达却随肿瘤恶性程度的增加而减少（Ｐ＜０．０５），ｎｍ２３ｍＲＮＡ杂交颗粒位于胞浆中，蛋白的表达可见于胞浆中，少数见核中阳性，该组ｎｍ２３蛋白表达率为４４％（１１／２５）。结论：ｃ－ｅｒｂＢ－２、ｎｍ２３基因扩增及产物表达呈负相关关系（Ｐ＜０．０５），且与乳腺癌临床病理特征密切相关     

聚合酶链反应检测脑膜炎奈瑟菌DNA片段

聚合酶链反应检测脑膜炎奈瑟菌ＤＮＡ片段刘长云童祥华苗乃法冯永堂李在连我们采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法对该菌染色体中一段核苷酸作为靶ＤＮＡ进行扩增，并对部分确诊病例的临床标本进行了检测，效果满意，现报道如下。一、材料与方法１．脑膜炎奈瑟菌的体外培养与...     

酵米面假单胞菌与椰毒假单胞菌的比较研究

将酵米面假单胞菌(即国内通称之酵米面黄杆菌)与椰毒假单胞菌进行了对比研究。在形态学,生理特征,生化反应,底物利用试验,抵抗力与药物抑菌谱,G+C克分子％上两菌高度一致。此外,两菌的抗原关系密切,DNA—DNA杂交呈高度相关,两菌的产毒也一致。因而证明为同一菌种。由于两菌在底物利用试验上有微小差异。因而椰毒假单胞与酵米面假单胞菌这两名应同时保留作为同义名中主次名之别。     

肿瘤特异性细胞毒T细胞对B16细胞的杀伤作用

目的 研究肿瘤特异性细胞毒Ｔ细胞对其靶细胞的杀伤作用,方法 研究采用丝裂霉素致半数死亡的黑色素瘤传代细胞株Ｂ１６为肿瘤特异性抗原,与Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠脾淋巴细胞在ｒＩＬ－２共同的作用下,结果 诱导出的Ｂ１６细胞特异杀伤Ｔ细胞,对Ｂ１６细胞在形态上和功能上有明显杀伤作用,结论 可采用本研究的方法制备肿瘤的特异性杀伤了Ｔ细胞。     

乳糖化赖氨酸与反义x基因质粒复合物体外对HBV表达的抑制

目的研制一种能把基因药物定向导入肝脏组织的小分子肝靶向药物载体。方法用还原氨化法合成乳糖化赖氨酸(Lac-Lys)共价结合物作为肝靶向药物载体。将含HBV反义x基因的质粒在一定条件下与Lac-Lys制成复合物后转染HepG2.2.15。用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清中的HBsAg和HBeAg。结果经红外光谱定性,成功制备出了Lac-Lys的共价结合物;此共价结合物能与质粒DNA形成复合物,经细胞培养观察可将质粒DNA载入细胞;抗原检测结果显示,含有反义xDNA的质粒在细胞内能有效抑制病毒的复制。xDNA与Lac-Lys的最佳比例是1∶5,最大抑制率是73.2%。结论合成的Lac-Lys可将反义x基因质粒定向载入细胞内,并有效抑制HBsAg和HBeAg的表达。     

狼疮性BXSB小鼠脾脏淋巴细胞增殖与凋亡的初步分析

为了比较全面准确地了解系统性红斑狼疮 (SLE )BXSB小鼠的发病过程中 ,淋巴细胞增殖与凋亡的动力学变化及其机制。采用细胞双色荧光染色的标记技术 ,检测了脾脏淋巴细胞中的增殖细胞和凋亡细胞的百分率 ,并且测定了巨噬细胞吞噬凋亡细胞的能力。结果发现 ,发病的雄性BXSB小鼠和雌性BXSB小鼠脾脏中增殖的CD4 + T淋巴细胞和B淋巴细胞百分率显著高于对照C5 7小鼠 ,而凋亡的B淋巴细胞的百分率显著低于对照C5 7小鼠 ;但是 ,雌雄BXSB小鼠和对照C5 7小鼠巨噬细胞吞噬凋亡细胞的吞噬指数相同。本研究结果表明 ,在BXSB小鼠的SLE发病过程中 ,淋巴细胞的增殖速度异常升高、而凋亡速度下降 ,可能与其脾脏肿大有关 ;而且淋巴细胞的增殖与凋亡的失衡与巨噬细胞的功能无关 ,可能与淋巴细胞内在的异常有关。     

胸腺来源免疫抑制提取物对不同组织肿瘤细胞作用的研究

目的探讨小牛胸腺来源免疫抑制提取物 (TISE c)对不同组织来源肿瘤细胞的影响。方法采用3 H TdR掺入方法 ,检测TISE c对肝癌、肺腺癌、膀胱癌传代细胞株细胞增生的影响 ,以及在显微镜下观测TISE c对癌细胞形态学变化的影响。结果TISE c对 3种肿瘤细胞均具有抑制分裂增生作用 ,但是癌细胞形态正常。结论TISE c可能是一种能够抑制癌细胞分裂增生的生物制剂 ;对不同组织来源的癌细胞不存在组织特异性 ;抑制癌细胞增生不是通过细胞毒性或杀伤机制     

小鼠OX40真核表达载体的构建及表达

目的构建小鼠OX40的真核表达载体。方法从ConA活化的小鼠牌淋巴细胞中提取总RNA，应用RT-PCR方法，扩增获得编码小鼠OX40分子的cDNA，并将其克隆到PUCm-T载体，经PCR、酶切和测序分析证实，进而脂质体法转染HUVECS，G418筛选，RT-PCR法鉴定获得表达OX40分子的阳性细胞株。结果构建的pIRES2-EGFP-OX40重组真核表达载体经PCR、酶切和测序分析，证实该片段与GeneBank记载的小鼠OX40cDNA序列完全一致。筛选获得能表达小鼠OX40蛋白的HUVECs转基因细胞。结论成功构建小鼠OX40转基因细胞，该克隆细胞为进一步研究OX40分子的功能奠定了基础。     

人类CD252基因片段在大肠杆菌中的表达、纯化及免疫原性分析

目的优化表达含人类CD252胞外段的融合蛋白,纯化目的蛋白,为单克隆抗体的制备打下良好的基础。方法将测序正确的pET32a（＋）－CD252胞外段重组质粒转入表达菌株BL21感受态细菌中,用SDS－PAGE电泳鉴定重组菌的诱导表达情况,通过改变pET32a（＋）－CD252阳性菌株的诱导时间、温度,以优化出最佳表达条件。采用包涵体纯化法纯化目的蛋白。用纯化的重组蛋白免疫BalB／C小鼠,采用ELISA法测定血清中抗体效价。结果成功获得表达pET32a（＋）－CD252的阳性菌株。转化有pET32a（＋）－CD252胞外段重组质粒的表达菌经IPTG诱导后,在蛋白分子量标准的31．0～42．7kD之间出现了新的蛋白条带,新的蛋白主要存在于包涵体中。优化表达条件分析表明,在诱导4h、温度37℃、IPTG浓度为1．0mmol／L时,融合蛋白的表达量最高。包涵体洗涤纯化后,经SDS-PAGE电泳证明可得到较纯的目的蛋白。免疫小鼠后测得的平均抗体效价为1：3200。结论pET32a（＋）-CD252胞外段原核表达载体能够表达CD252蛋白,并获取了目的蛋白的优化表达条件,表达蛋白具有良好的免疫原性。