骨髓源性肝干细胞的筛选、扩增和分化

Objective To explore the feasibility of direct separation, selective proliferation and differentiation of BDLSC from hone marrow cells with culture systems containing cholestatic serum in vitro.Methods Whole bone marrow cells of rats cultured in routine medium were replaced with con-ditioning selection media containing eholestatic sera of different concentrations after they attached to the plates.The optimal concentration of cholestatic serum was determined according to the outcome of the selected cultures.Then the selected BDLSC were induced to proliferating culture system and dif-ferentiating culture system.Each passage of the proliferated stem cells was subjected to flow cytome-try for detection of stem cell markers.The morphology and phenotypie markers of BDLSC were char-acterized using immunohistochemistry, RT-PCR and electron microscopy.The metabolic functions of differentiated cells were also determined by glycogen staining and urea assay.Results The 50 ml/L eholestatie serum was the optimal concentration for the selection of BDLSC at which BDLSC could sur-vive while the other populations of the bone marrow cells could not.The purified BDLSC could prolif-erate for 6 passages and maintained stable markers in our proliferating system.When the culture sys-tem changed to differentiating system, hepatocyte-like colony-forming units (HCFU) were formed.HCFU expressed markers of embryonic hepatoeytes (AFP, albumin and cytokeratin 8/18), biliary cells (cytokeratin 19), hepatocyte functional proteins (transthyretin and eytoehrome P450-2b1), and hepatocyte nuclear factors (HNF-1α and HNF-3β).They also had glycogen storage and urea synthesis functions, two of the critical features of hepatocytes.Conclusion BDLSC can be selected directly from whole bone marrow cells and pure BDLSC can also proliferate for 6 passages.The differentiated cells have hepatocyte-like phenotype and function.BDLSC will he a new way to provide a readily avail-able alternate source of cells for clinical hepatocyte therapy.     

腹腔镜脾切除术(附20例报告)

目的探讨腹腔镜脾切除术的可行性和方法。方法该院从1999年6月～2003年6月间共施行腹腔镜脾切除术20例，其中肝炎后肝硬化继发脾功能亢进7例、遗传性球型红细胞增多症1例、自身溶血性贫血l例，特发性血小板减少性紫癜8例、脾血管瘤1例，脾淋巴管瘤1例，脾囊肿1例。结果手术成功17例，平均手术时间3h，平均术中失血380ml，平均术后住院5d，无术后并发症。3例中转开腹，1例为脾蒂出血，1例为胃短血管出血，1例为脾周围炎粘连紧密出血。结论腹腔镜脾切除术是一安全可行的脾脏切除新方法，术中体位的选择、脾蒂的处理、巨脾的处理以及脾脏的取出等问题的合理处理是手术取得成功的关键。     

腹腔镜胆总管切开术:T管引流还是一期缝合

目的探讨腹腔镜胆总管切开术T管引流与一期缝合的适应证、手术特点及胆道并发症的防治。方法回顾性对比分析1997年11月～2005年11月该院116例腹腔镜胆总管切开术：T管引流组（54例）与一期缝合组（62例）的临床资料。结果对比两组胆总管内径、手术时间、术后胆漏及胆管狭窄，差异均无统计学意义（P〉0.05），一期缝合组术后胃肠功能恢复时间、补液时间及住院时间显著缩短（P〈0.01）。无手术死亡病例。结论腹腔镜胆总管切开术选择T管引流还是一期缝合，取决于其适应证。一期缝合的适应证较为严格，主要为术中取石干净及胆总管通畅，其手术效果明显优于T管引流；T管引流为术后胆道造影及胆道镜处理残留结石提供了有效途径。只有严格按照手术适应证并熟练掌握手术要点，才能有效防止胆道并发症的发生。     

超声引导在急性化脓性胆囊炎直接穿刺引流术的临床价值

目的 探讨超声引导在急性化脓性胆囊炎经皮经肝胆囊直接穿刺引流术的临床价值。 方法 98例急性化脓性胆囊炎患者于超声引导下行经皮经肝胆囊直接穿刺引流术。 结果 除1例由于胆囊壁过厚、直接穿刺引流术无法突破囊壁、改为经典穿刺引流术外,其余患者均行直接穿刺引流术成功置管,一次成功率达98.98%;其中65例术后12h内症状明显缓解,所有患者均治愈出院。 结论 超声引导经皮经肝胆囊直接穿刺引流术可迅速缓解急性化脓性胆囊炎引起的严重症状,明显降低并发症及死亡率,充分发挥了超声微创技术创伤少、安全准确等优势,效果突出、值得推广。     

十二指肠镜下子母镜联合U-100激光治疗难治性胆总管结石的疗效

目的 观察十二指肠镜下子母镜联合U-100双频激光治疗难治性胆总管结石的疗效,评估其应用价值.方法 对39例结石直径大于2.0 cm以上、嵌顿性、多发结石无法经内镜下逆行胰胆管造影(ERCP)用网篮取出的难治性胆总管结石患者,行十二指肠镜下子母镜联合U-100激光碎石取石.结果 全组均成功取石,其中行2次及以上ERCP的患者20例(51.3%).无胆管损伤、出血、穿孔、坏死性胰腺炎等严重并发症发生.结论 十二指肠镜下子母镜联合U-100激光碎石对于难治性胆总管结石患者的治疗是安全、有效的,但亦存在手术时间长、操作复杂、手术费用高等局限性.     

内镜技术在胆管结石的诊治进展

胆管结石(choledocholithiasis)是一种常见胆道疾病,是引起肝外阻塞性黄疸、梗阻化脓性胆管炎以及胰腺炎的最常见原因。主要症状有上腹部疼痛、黄疸和发热,即Charcot三联征。过去,胆管结石患者需要行胆总管切开探查取石术。这一传统手术方法对     

骨髓源性肝干细胞的筛选、扩增和分化

目的 探讨采用含淤胆血清的培养体系直接从体外全骨髓细胞培养中筛选、扩增和分化骨髓源性肝干细胞的可行性.方法 制备含不同浓度淤胆血清的条件筛选培养液,常规培养大鼠全骨髓细胞,贴壁后换用条件筛选培养液,根据筛选的结果确定最佳的淤胆血清浓度.筛选到的骨髓源性肝干细胞分别采用扩增培养液和分化培养液进行扩增和诱导分化.传代细胞应用流式细胞仪检测干细胞标记.采用免疫组织化学、RT-PCR和电镜等方法对骨髓源性肝干细胞进行形态学以及表型特征的鉴定.以糖原染色和尿素分析的方法对诱导分化的细胞进行代谢功能的测定.结果 筛选培养结果,含50 ml/L的淤胆血清培养液的筛选效果最佳:骨髓源性肝干细胞能够生存,而其他非肝干细胞因不能适应而凋亡.纯化的肝干细胞能在扩增培养体系中传代6代并且维持稳定的细胞表面特征.更换为分化培养体系后,可形成肝细胞样集落形成单位.肝细胞样集落形成单位的细胞表达胎肝细胞的标志(AFP,白蛋白和细胞角蛋白8/18),胆管细胞的标志(细胞角蛋白19),肝细胞的功能蛋白(甲状腺素转运蛋白和细胞色素P450-2 b1),以及肝细胞核因子(HNF-1α和HNF-3 β).同时具有糖原储存和尿素合成等肝细胞特有功能.结论 含淤胆血清的筛选培养液能从全骨髓细胞培养中有效地筛选骨髓源性肝干细胞,并且纯化的肝干细胞能传代6代.肝干细胞分化后能形成具有肝细胞样的表型和功能.骨髓源性肝干细胞为解决临床肝细胞治疗的肝细胞来源问题提供了一个新的方法.     

肝内胆管细胞癌细胞凋亡相关基因研究进展

细胞凋亡是由多基因调控所引起的细胞主动死亡的过程,肿瘤是细胞凋亡异常疾病,与肝内胆管细胞癌细胞凋亡相关的基因有p53、bcl-2、ras、cycin D1、p16、p27、survivin、c-myc、mdm-2等,它们与肝内胆管细胞癌的发生、发展、治疗和预后关系密切.     

超声引导PTC在恶性梗阻性黄疸诊断中的应用

目的总结经皮肝穿刺胆道造影(PTC)对恶性梗阻性黄疸的诊断价值并将超声引导经皮肝穿刺胆道造影(U—PTC)和常规(X—PTC)进行比较。方法将该院2001年7月～2004年3月间进行的U—PTC(12例)同X一PTC(31例)进行比较。结果二者均对恶性梗阻性黄疸的诊断提供较为丰富的信息，但U—PTC较PTC更具有优点。结论PTC在恶性梗阻性黄疸的诊断中具有自身的优势，U—PTC较PTC具有具有操作时间短、成功率高、并发症少、病人痛苦小等优点，值得在临床推广。     

胰管塑料支架和/或鼻胆管引流在内镜逆行胰胆管造影术选择性胆管插管困难时的应用研究

目的探讨胰管塑料支架和/或鼻胆管引流在胆总管结石患者内镜逆行胰胆管造影术(ERCP)选择性胆管插管困难(DSBC)时的应用。方法回顾性分析57例ERCP术中DSBC的胆总管结石患者的临床资料,将患者分为胰管塑料支架组、鼻胆管引流组、胰管塑料支架+鼻胆管引流组,观察其手术成功率、术后并发胰腺炎、高淀粉酶血症或其他并发症的发生率,对比分析3组间的差异。结果接受ERCP的57例患者中,胰管塑料支架组13例患者,手术成功2例(15.4%),高淀粉酶血症1例(7.7%),术后胰腺炎2例(15.4%),发热1例(7.7%),出血1例(7.7%);鼻胆管引流组20例患者,手术成功20例(100.0%),无高淀粉酶血症及术后胰腺炎,无出血及发热等并发症的发生;胰管塑料支架+鼻胆管引流组24例患者1次ERCP手术成功19例(79.2%),2次ERCP成功5例(20.8%),4例出现高淀粉酶血症(16.7%),2例出现出血(8.3%),无发热及术后胰腺炎。3组间比较术后胰腺炎的发生和手术成功率差异有统计学意义。结论 ERCP术中DSBC的患者可通过放置胰管支架和/或鼻胆管引流术提高手术的成功率,减少胰腺炎的发生。