放疗前后宫颈癌组织端粒酶活性的表达

目的：研究端粒酶活性在子宫颈癌组织发生发展中的作用、放疗前后端粒酶活 性的检测对于放疗疗效的判定及预后评估的意义。方法：采用 ＰＣＲ－ＴＲＡＰ方法检测 ２４例 放疗前后子宫颈癌组织标本的端粒酶活性。结果：２４例宫颈癌组织中,放疗前有２３例端粒 酶检测阳性,阳性率 ９５． ８％,放疗后有 １５例端粒酶检测阳性,阳性率 ６２． ５％。结论：端粒酶 活性表达在子宫颈癌的发生发展中起重要的作用,放疗前后端粒酶活性的测定,对于放疗效果及结局的早期预测可能是一种有用的监测手段。     

抗γ-精浆蛋白人-鼠杂合Fab噬菌体抗体库的构建及导向筛选

目的:建立人-鼠杂合Fab噬菌体抗体库,筛选抗γ-精浆蛋白(γ-sm)人源性抗体轻链。方法:PCR扩增前列腺癌患者外周血淋巴细胞人抗体全套轻链基因,克隆人含鼠源抗γ-sm抗体Fd基因的pComb3X噬粒中,建立人-鼠杂合Fab噬菌体抗体库。通过稀释滴定、限制性酶切等分别对库容、基因重组率和多样性进行鉴定。以M13K07辅助噬菌体超感染,利用纯化的γ-sm对杂合库进行筛选,对筛出的阳性克隆进行功能检测。结果:构建了库容量为1．2×107CFU、重组率为90％、多样性好的人-鼠杂合噬菌体抗体库。ELISA检测出2个强阳性克隆,Western blot确证为抗γ--sm的人-鼠杂合Fab,竞争ELISA显示其表观亲和力约为亲本鼠抗体亲和力的71．8％。DNA测序显示筛到的人源轻链可变区基因属IGKV4-1*01胚系家族。结论:成功得到人源性抗γ-sm抗体轻链,为进一步获得全人源化抗体奠定了基础。     

根尖周病患牙根管内厌氧菌与临床症状的关系

<正> 随着对专性厌氧菌培养和分离技术的发展,越来越多的证据表明厌氧菌是根管内感染占优势的细菌,它们包括产黑色素类杆菌、脆弱类杆菌、消化链球菌、核梭杆菌、放线菌等。但哪些菌种是根管内感染的特异性     

抗藤黄微球菌Rpf结构域单克隆抗体的制备与特性鉴定

目的:克隆、表达藤黄微球菌Rpf结构域多肽,并制备针对该多肽的单克隆抗体(mAb).方法:采用聚合酶链反应(PCR)藤黄微球菌基因组中扩增出藤黄微球菌Rpf结构域基因,用限制性内切酶消化后插入到pUC-19克隆载体中,测序正确后,再亚克隆到融合表达载体pPro-EXHT中,转化大肠杆菌DH5α,目的基因经IPTG诱导,由T7启动子调控表达了氨基端带6个连续组氨酸残基的Rpf结构域基因多肽,在变性条件下纯化目的蛋白.用纯化的目的蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,进行细胞融合、克隆化制备抗Rpf domain单抗(mAb),用ELISA法初步鉴定其特异性和相对亲和力.结果:在变性条件下用Ni2 -NTA亲和色谱柱纯化目的融合蛋白,纯化获得的蛋白纯度大于90%.用该融合蛋白免疫小鼠后,获得了3株抗Rpf domain mAb,这3株mAb均特异性识别Rpf domain多肽.结论:所获得的抗Rpf domain mAb特异性强、效价高,对进一步研究Rpf domain在结核病免疫预防中的作用提供了有力的工具.     

阴道加德纳菌四种临床检测方法的比较

细菌性阴道病是近年来被确定的与性传播有关的疾病 ,其病原体为阴道加德纳菌 ,随着性病病原体感染谱的变化 ,发病率有逐年增高的趋势。目前对加德纳菌的实验诊断 ,主要以直接涂片找线索细胞、分离培养法、免疫荧光法及聚合酶链反应 (ＰＣＲ)技术等。为探讨细菌性阴道病实验诊断方法应用的效果 ,我们对阴道加德纳菌临床 4种检测方法进行比较。报告如下。一、材料和方法1 临床标本 :5 0份宫颈分泌物 ,取自西京医院门诊妇产科就诊的非特异性阴道炎 (ＮＳＶ)患者 ,常规消毒用无菌棉签自宫颈口取分泌物于无菌生理盐水管中。2 革兰染色法 :取无菌…     

聚合酶链反应诊断女性淋病性尿道炎和宫颈炎

本文报告用聚合酶链反应诊断女性淋病性尿道炎和宫颈炎17例,将聚合酶链反应与淋菌分离培养比较,认为聚合酶链反应检测淋菌优于淋菌分离培养,具有快速、特异性和敏感性高的特点。     

Survivin靶向microRNA表达载体的构建和鉴定

目的：设计并构建Survivin靶向的microRNA表达载体，观察其对Survivin基因的抑制作用。方法：以Survivin为靶基因，根据pPRIME载体要求，设计针对Survivin的microRNA序列，PCR扩增获得目的片段并克隆到载体中，序列正确的载体脂质体转染Hela细胞，RT—PCR和Western blotting检测其对Survivin的抑制作用。结果：用Xho I和EcoR I双酶切鉴定、DNA测序证实构建的microRNA表达载体序列正确，后者在mRNA和蛋白水平上均能明显抑制Hela细胞中Survivin的表达。结论：Survivin靶向microRNA表达载体构建成功，并能抑制靶基因的表达，为其在肿瘤基因治疗中的应用奠定了基础。     

RNAi介导的survivin基因沉默对PC-3细胞裸鼠体内成瘤能力的影响

目的:研究survivin基因表达沉默后对PC-3细胞的裸鼠体内成瘤率,瘤体生长速度,以及平均瘤重等方面产生的影响.方法:使用RNA干涉技术,用构建的pSilencer 3.1-SVV1、pSilencer 3.1-SVV2、 pSilencer 3.1-SVV3 siRNA表达质粒和阴性对照质粒pSilencer 3.1-NC转染PC-3 细胞,使PC-3 细胞的survivin 基因表达沉默,随后将细胞接种于裸鼠皮下,观察转染了各质粒的PC-3细胞在裸鼠体内成瘤率,瘤体生长速度,以及平均瘤重等方面的变化.结果:pSilencer 3.1-SVV2和pSilencer 3.1-SVV3质粒转染组的裸鼠肿瘤成瘤率明显下降,裸鼠瘤体生长速度明显慢于未转染组和pSilencer 3.1-NC质粒转染组(P＜0.01).实验终止时,肿瘤平均体积与瘤重与未转染组和pSilencer 3.1-NC质粒转染组相比减少50%-55%.结论:RNAi 介导的survivin 基因沉默可显著影响PC-3细胞裸鼠体内成瘤能力及瘤体生长速度.     

结核分枝杆菌Rv0867c基因的克隆表达及其纯化

目的构建结核分枝杆菌Rv0867c基因的原核表达质粒,获得结核分枝杆菌Rv0867c基因的表达蛋白。方法制备结核分枝杆菌基因组DNA,采用聚合酶链反应(PCR)技术扩增目的基因片段;通过克隆载体pUC19构建质粒载体pUC19-Rv0867c,经序列测定证实正确,双酶切后连接于表达载体pPRO-EXHT,转化入大肠杆菌DH5α中,再经IPTG诱导表达带His标签的Rv0867c融合蛋白;用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白的相对分子质量大小及表达形式。结果成功扩增出了结核分枝杆菌Rv0867c基因,构建了具有正确基因序列的表达载体pPRO-EXHT-Rv0867c,转化入大肠杆菌DH5α中,经诱导产生高水平的表达产物。经SDS分析,在80 kD处出现新生蛋白带,凝胶薄层扫描检测表达量约占菌体蛋白的23.7%。该融合蛋白以包涵体的形式存在,用Ni²⁺-NTA纯化柱在变性条件下进行纯化。结论成功克隆了结核分枝杆菌Rv0867c基因并得到了其大肠杆菌表达产物,为进一步研究Rv0867c基因蛋白的活性及其功能,以及结核分枝杆菌快速促生长作用奠定了基础。     

端粒酶活性在卵巢肿瘤组织中表达的临床意义

目的：研究测定端粒酶活性在诊断和预测卵巢肿瘤方面的意义。方法：应用ＰＣＲ－ＴＲＡＰ法检测３０例卵巢肿瘤组织（良性组织８例,交界性或低度恶性肿瘤７例,恶性肿瘤１５例）的端粒酶活性。结果：８例卵巢良性组织中均未测出端粒酶活性,７例卵巢交界性或低度恶性肿瘤组织中,４例（５７％）端粒酶活性阳性表达,１５例卵巢恶性肿瘤组织中,１４例（９３．３％）端粒酶活性阳性表达。卵巢上皮性恶性肿瘤组织中,在组织类型、组织学分级及肿瘤分明之间无显著性差异。结论：端粒酶活性的检测不仅有助于卵巢肿瘤的诊断和鉴别诊断,且有助于预测患者的预后。