荧光探针PCR检测金黄色葡萄球菌的研究

目的 研究并建立荧光探针聚合酶链反应(PCR)技术,用于金黄色葡萄球菌(SAU)及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的临床检测.方法 采用标准化荧光探针PCR技术及操作流程,进行灵敏性及特异性的鉴定.结果 分析性灵敏性达到1×10 2拷贝/reaction,达到设计要求,具备高重复性;对1196例临床标本应用荧光探针PCR检测SAU,临床灵敏性为97.41％,临床特异性为98.47％,对527例SAU的临床样本进行MRSA筛查,临床灵敏性为99.74％,临床特异性为95.59％;对385份鼻腔拭子标本应用荧光探针PCR检测SAU,检出率达18.18％;对其中40株SAU进行MRSA筛查,检出率达42.50％.结论 荧光探针PCR技术检测SAU及其MRSA的方法具有较高的优越性,适合在临床检测应用.     

肠球菌GyrA基因突变和多重耐药泵与氟喹诺酮耐药性关系研究

目的探究肠球菌GyrA基因突变和多重耐药泵与氟喹诺酮类药物耐药性的关系。方法全部试验菌株使用VITEK 2-Compact仪器和GPI卡进行鉴定。通过PCR和单链构象多态性(SSCP)法检测对左氧氟沙星(Levo)与环丙沙星(Cip)耐药的30株粪肠球菌和10株屎肠球菌GyrA基因有无碱基发生突变,并通过基因测序确定其突变类型。检测了30株粪肠球菌在M-H琼脂中加入终浓度为20μg/mL利血平后Cip MIC值的改变。结果 PCR-SSCP分析结果表明40株对Levo和Cip同时耐药肠球菌均扩增出GyrA基因,其中有24株粪肠球菌和4株屎肠球菌的单链泳动带与粪肠球菌ATCC 29212和敏感菌株的单链泳动带相比较出现异常。其中粪肠球菌在第87位上有密码子改变:GAA变为GGA;屎肠球菌在第83位有密码子改变:AGT变为TAT,这些突变均可引起氨基酸的改变。在M-H琼脂中加入利血平可以提高部分粪肠球菌对环丙沙星的敏感性。结论用PCR-SSCP法检测40株肠球菌的GyrA基因并通过测序分析,显示有70%(28株)肠球菌碱基发生了突变,说明GyrA基因喹诺酮类药物耐药决定区(QRDR)突变是肠球菌对氟喹诺酮类药物耐药的重要原因,此外还有药物泵出等耐药机制的存在。     

细菌16SrRNA基因PCR诊断细菌性阴道病的研究

目的确定阴道主要角色菌的分离率与细菌性阴道病(bacterial vaginosis,BV)的关系,建立BV的分子诊断方法。方法采用临床Amsel标准筛选91例BV患者、82例健康对照妇女。采集阴道分泌物标本提取细菌基因组DNA,采用细菌特异性16SrRNA基因PCR检测标本中的卷曲乳酸杆菌、阴道加德纳菌、人型支原体等11种角色菌。比较上述细菌分离率与BV发生的关系。通过统计学分析建立最佳的用于BV诊断细菌检测组合。结果与BV密切相关的阴道细菌有纤毛菌属、阴道阿托波菌属、巨球菌属、羞怯动弯杆菌属、普雷沃菌属。上述细菌的分离率在2组样本的差异具有统计学意义(P<0.01)。以联合检测阴道阿托波菌属、纤毛菌属、普雷沃菌属作为BV的判断标准时,敏感性为93.41%,特异性为78.05%。结论 BV为多种微生物混合感染性疾病,通过PCR方法检测主要致病菌或致病菌组合,可以有效地对BV进行快速分子诊断。     

BI/NAP1/027型高产毒艰难拟梭菌的研究现状与展望

艰难拟梭菌是一种普遍存在于人体肠道中的条件致病菌。当机体在各种诱因下出现菌群失调时,艰难拟梭菌可通过释放其特有的毒素而诱发肠道炎症反应,使患者出现从单纯的腹泻到致命的感染性休克等多种轻重不等的临床症状。近几年,我国多地陆续从患者的粪便样本中检测到BI/NAP1/027型艰难拟梭菌。该型菌株能产生更高水平的毒素和更难杀灭...     

血清同型半胱氨酸作为肿瘤标志物的初步探讨

目的 检测同型半胱氨酸在多种常见恶性肿瘤患者血清中的表达水平,并初步研究其作为肿瘤标志物的可能性.方法 选择首都医科大学附属北京友谊医院外科明确诊断的180例恶性肿瘤患者和30例正常健康体检者(对照组),检测其空腹血清同型半胱氨酸和肿瘤标志物(CEA、AFP、CA125、CA199)水平,并按照临床上使用的cutoff值,将同型半胱氨酸的结果与肿瘤标志物的结果比较.结果 对照组血清同型半胱氨酸为(11.40±3.13) μmol/L,恶性肿瘤患者血清同型半胱氨酸均升高[(13.89±4.95) μmol/L～(21.40±9.38) μmol/L],平均(17.01 ±9.32) μmol/L差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 与另外4种肿瘤标志物(CEA、AFP、CA125、CA199)相比,血清同型半胱氨酸在肺癌、乳腺癌、食管癌中具有更高的阳性预测率.血清同型半胱氨酸水平在肿瘤患者血清中升高具有普遍性,并且按照临床上使用的cutoff值,可以将其用作为肺癌、乳腺癌和食管癌的肿瘤标志物.     

VITEK-2 Compact全自动细菌鉴定仪直接鉴定BACTEC 9120血培养阳性标本的临床应用

目的利用VITEK-2 Compact全自动细菌鉴定仪对BACTEC 9120血培养阳性标本进行直接菌种鉴定,并将结果与传统检测方法相比较,以探讨快速获得阳性血培养结果的可行性。方法共收集60例单细菌血培养阳性标本,其中36例为革兰阴性杆菌,24例为革兰阳性球菌。应用VITEK-2 Compact全自动细菌鉴定仪对血培养阳性标本进行直接鉴定,同时与传统操作方法结果相比较。结果血培养阳性标本直接经VITEK-2 Compact全自动细菌鉴定仪鉴定后,97.2%的革兰阴性杆菌和75.0%的革兰阳性球菌与传统操作方法所得鉴定结果相一致。结论在直接鉴定革兰阴性杆菌血培养阳性标本时,应用VITEK-2 Compact全自动细菌鉴定仪进行鉴定是可行的,但在鉴定革兰阳性球菌时可靠性稍差。该方法在一定程度上可以有效缩短获得血培养结果的周期,对指导临床治疗起到积极的作用。     

阿米卡星双圈耐药型鲍曼不动杆菌药敏试验研究

目的调查鲍曼不动杆菌(Ab)K-B法药敏试验阿米卡星出现的双圈现象,结合不同药敏试验方法和药敏结果探讨其治疗选药。方法全部37株非重复Ab均用VITEK-2 compact全自动微生物鉴定仪鉴定并做仪器法药敏;通过K-B法再对阿米卡星单独做纸片法药敏试验,并对出现双圈现象的鲍曼不动杆菌进行传代诱导;琼脂稀释法检测阿米卡星对出现双圈和耐药现象的菌株最低抑菌浓度(MIC)。结果全部37株Ab被VITEK-2 compact全自动微生物鉴定仪确认并报告为对阿米卡星敏感;K-B法21株阿米卡星周围显示双圈表型、12株敏感、4株耐药;诱导7 h左右开始出现双圈现象,至第6代抑菌圈完全消失;琼脂稀释法得出出现双圈和耐药现象的菌株MIC值≥4 096 mg/L,个别菌株高达8 192 mg/L,均达到耐药标准。结论仪器法药敏缺乏药物选择灵活性,应仔细阅读操作说明,药敏试验结果应参考K-B法并进行修正,以免误导临床;阿米卡星K-B法产生双圈现象应报告阿米卡星耐药;双圈现象可经传代诱导消失。     

老年患者尿路感染阿萨希毛孢子菌的基因分型与药敏特点

目的探讨老年尿路感染患者尿液分离阿萨希毛孢子菌的基因分型及其药敏特征,为临床治疗提供依据.方法共收集2009年1月至2012年1月尿路感染阿萨希毛孢子菌10株,设计序列特异性引物对其基因进行鉴定,并采用微量肉汤稀释法和E‐test法对其进行药敏试验.结果基因型别鉴定结果显示,10株阿萨希毛孢子菌以Ⅳ型基因为主,占70%,其次分别为Ⅲ型(20%)和Ⅰ型(10%);体外药敏试验结果显示,各菌株对两性霉素B、氟康唑、伏立康唑、伊曲康唑、5′‐氟胞嘧啶均为敏感,其中伏立康唑的最低抑菌浓度最小,且部分菌株对伊曲康唑呈现剂量依赖性敏感.结论老年尿路感染患者尿液阿萨希毛孢子菌基因型别以Ⅳ型为主,三唑类药物对其具有显著疗效,其中以伏立康唑效果最佳.     

北京地区汉族人群胃癌发生与EBVA73基因外显子区A157154C多态性的相关性研究

目的 探讨北京地区EBV A73基因外显子区A157154C多态性与胃癌的相关性。方法 采用病例-对照研究方法,以聚合酶链反应(PCR)联合DNA测序检测29例EBV IgM+胃癌患者和40例同期健康体检者EBV A73基因外显子157154 nt位点的基因型和等位基因频率。结果 胃癌组A157154C C等位基因频率和CC基因型频率明显高于对照组(χ²=8.997,P=0.003; χ²=6.801,P=0.033)。C等位基因携带者患胃癌的风险是A等位基因携带者的2.95倍(OR=2.95,95% CI=1.44～6.04)。胃癌组男性患者C等位基因频率显著高于女性患者(χ²=5.392,P= 0.020)。两组间比较显示A157154C不同基因型与年龄、性别、吸烟、饮酒和临床分期均无相关性。结论 EBV A73基因A157154C CA+CC基因型可能是中国北方地区汉族人群胃癌发病的危险因素。     

降钙素原在血流感染中的临床价值

目的 探讨降钙素原(procalcitonin,PCT)在血流感染中的临床价值.方法 回顾性分析2015年1月至2016年9月血流感染患者的临床资料、血培养和PCT结果,参照血培养结果评估PCT的临床意义.结果 收集8 710例疑似血流感染患者资料,与阴性血培养结果相比,PCT在革兰阴性细菌血流感染中明显升高(7.36 ng/ml,95％CI4.69～8.82 ng/ml,P＜0.01),在革兰阳性细菌(4.77 ng/ml,95％CI 3.35～6.04 ng/ml,JP＜0.01)和真菌血流感染(1.30 ng/ml,95％CI 0.79～2.98 ng/ml,P＜0.01)的患者中稍高,但污染菌的则不变.PCT对血流感染的诊断临界值为1.1 ng/ml,特异性、灵敏度、阳性预测值和阴性预测值分别为81.0％,79.0％,25.8％和93.1％.结论 PCT能快速区分血流感染与非血流感染,具有很好的临床诊断价值.