早孕期弓形虫感染对大鼠胎盘RT.BMl及RTl-E基因转录的影响

通过检测正常妊娠和早孕期弓形虫感染的Wister大鼠胎盘RT.BMl和RTl-E mRNA的表达水平,发现二者在正常妊娠中的规律,进而探索早孕期弓形虫感染对胎盘RT.BMl和RTl-E mRNA表达的影响,以阐明弓形虫感染致不良妊娠结局的分子免疫机制.将48只孕鼠随机分为感染组和正常组,每组24只.感染组于妊娠第5天腹腔注射1×105个弓形虫强毒株(RH株)速殖子/只,正常组不作任何处理.两组于孕第9、13、15、17天分别处死6只孕鼠,无菌剖腹,观察胎鼠情况,计数死胎及活胎数.采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)检测胎盘RT.BMl和RTl-E mRNA表达水平.结果:①正常组活胎数204只,死胎3只,死胎率1.4%,感染组活胎数133只,死胎27只,死胎率16.9%,死胎率明显高于正常组(P<0.05);②正常组RT.BMl mRNA在孕第9、13、15、17天的相对表达水平为(3.21±1.32)、(4.35±1.29)、(3.96±1.49)、(11.1±2.15),前三个时间点表达水平基本一致(P>0.05),第17天则明显增高(P<0.01);RTl-E mRNA在各时间点相对表达水平为(0.79±0.45)、(2.15±1.03)、(2.13±1.74)、(2.394±1.85),第9天明显低于后三个时间点(P<0.05);③感染组各时间点RT.BMl mRNA相对表达水平为(12.4±2.86)、(11.5±3.67)、(6.89±1.59)、(17.3±3.06),第9、13、15天与正常组相比有显著差异(P<0.01);而RTl-E mRNA分别为(1.834±0.886)、(4.72±1.59)、(4.24±2.26)、(3.83±2.26),第9、13、15天与正常组相比均有显著差异(P<0.01)、(P<0.05)、(P<0.01).结果显示弓形虫感染量合适,动物模型成功建立;RT.BMl和RTl-E mRNA在大鼠胎盘的表达水平与妊娠进展密切相关;大鼠早孕期弓形虫感染可致胎盘局部RT.BMl和RTl-E表达增高,从而打破正常妊娠所需的胎蕊局部免疫平衡状态,可能是早孕期弓形虫感染致不良妊娠结局的分子机制之一.     

中西医结合治疗中风急性期40例

中风是临床常见危重证之一，病死率和致残率相当高。即使有幸度过急性期，大部分患者多留有后遗症，因此在急性期及时合理治疗是降低死亡率和减少致残率的关键。笔者用自拟的泻热通腑汤治疗急性脑血管意外40例，取得较好效果，并与西药治疗组对照。现报告如下。     

5例体外受精-胚胎移植术中宫腔积液的病因及处理

目的 探讨宫腔积液在体外授精-胚胎移植（in vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET）周期中的发生原因、处理方法及与临床妊娠率的关系.方法 回顾性分析2002年11月～2005年12月间在本中心完成144个IVF-ET周期中发生宫腔积液的5例患者的临床资料,结合文献复习进行讨论.结果 5例宫腔积液的患者4个超排卵治疗周期均在取卵时行负压抽液术,并予全身抗感染治疗,2例妊娠,其中1例流产.结论 在IVF-ET中宫腔积液,经积极处理不影响临床妊娠率.     

日本血吸虫特异性IgE相关抗原编码基因的克隆和鉴定

目的　从日本血吸虫成虫cDNA文库中筛选并克隆日本血吸虫特异性IgE相关抗原编码基因。　方法　用ABC ELISA法从日本血吸虫病流行区筛选出高水平抗血吸虫成虫抗原IgE抗体的个体 15人 ,采集血清并混合。混合血清经Protein G柱吸收后 ,用于日本血吸虫成虫cDNA文库的免疫学筛选。PCR扩增阳性克隆插入cDNA片段。序列分析后 ,于该序列第一开读框两端设计引物并分别引入EcoRⅠ和NotⅠ位点 ,PCR扩增并纯化目的基因片段后克隆入质粒载体pGME T ,再亚克隆入表达载体pGEX 6p 1。经IPTG诱导表达 ,对表达产物进行SDS PAGE和Westernblotting鉴定。　结果　阳性克隆插入片段约 12 0 0bp ,第一开读框长 5 0 7bp ,编码 16 9个氨基酸 ,理论分子量为 19 3kDa。DNA序列分析显示 ,与已知序列同源性小于 4 0 %。重组质粒pGEX 6p 1/Sj4 3B能高效表达融合蛋白 ,且能被日本血吸虫特异性IgE抗体识别。　结论　成功构建的重组质粒pGEX 6p 1/Sj4 3B ,Sj4 3B可编码日本血吸虫特异性IgE抗体相关抗原     

冬凌草甲素对脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的 研究冬凌草甲素（oridonin）对高糖高脂诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的保护作用机制.方法 体外培养HUVECs,噻唑蓝法（MTT）确定oridonin作用的最佳浓度;将细胞分为空白对照组、高糖高脂＋oridonin预处理组（以下简称为oridonin预处理组,oridonin预处理细胞24 h）、高糖高脂组（高糖高脂的浓度为33.3 mmol/L葡萄糖＋500 μmol/L棕榈酸,处理48 h）,利用流式细胞仪检测细胞凋亡率,观察各组细胞凋亡情况;酶联免疫吸附法（ELISA）检测上清液中肿瘤坏死因子仅（TNF-α）、白介素6（IL-6）的浓度,以观察细胞的炎症情况;实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）分析HUVECs内TAp63、沉默信息调节因子1（Sirt1）mRNA的表达水平;Western blotting分析TAp63、Sirt1及凋亡相关基因磷酸化细胞外调节蛋白激酶（p-ERK）、B淋巴细胞瘤2（Bcl-2）的蛋白表达水平.两组间比较采用￡检验,多组间采用单因素方差分析.结果 Oridonin作用于HUVECs细胞24 h的最佳浓度为5 μmol/L.高糖高脂组HUVECs细胞内TAp63（mRNA及蛋白）、Sirt1 （mRNA及蛋白）、Bcl-2蛋白水平明显低于空白对照组（t=-22.50、-6.02、-16.22、-6.72、-7.71,均P＜0.05）,HUVECs凋亡率、细胞内p-ERK蛋白表达及上清中炎症因子TNF-α、IL-6浓度明显高于空白对照组（t=14.34、12.59、17.37、17.90,均P＜0.05）.与高糖高脂组相比,oridonin预处理组HUVECs内TAp63 mRNA和蛋白、Sirt1mRNA和蛋白、Bcl-2蛋白表达明显升高（t=5.85、5.06、4.55、3.04、5.81,均P＜0.05）,HUVECs凋亡率、细胞内p-ERK蛋白表达及上清中炎症因子TNF-α及IL-6的浓度明显下降（t=-7.11、-7.81、-10.51、-10.36,均P＜0.05）.结论 冬凌草甲素能够抑制高糖高脂诱导的HUVECs的凋亡,可能与其抑制高糖高脂诱导的炎症反应和（或）增加TAp63、Sirt1、Bcl-2的表达,且降低p-ERK的表达有关.     

中风风险人群及高危人群中医状态辨识

任继学教授认为中风病机为虚风上冲,挟营阴上扰于脑.中焦虚满态及下焦失藏态为中风病风险人群的中医状态,痰火内郁态及肝阳上亢态为中风高危人群的中医状态.按此理论体系.中风高危人群治疗原则为行气解郁、清泻痰火,平肝潜阳、降气泻火.在调护时须注重脾胃的调养和生活方式的调控.     

两种方法行子宫-输卵管碘油造影778例临床对比观察

目的与传统子宫-输卵管碘油造影（risc）相比较，了解使用FL—IA型妇科诊断治疗仪行子宫输卵管碘油造影的临床应用价值。方法将778例不孕妇女随机分为FL-IA型妇科诊断治疗仪组（656例）和传统组（122例）进行子宫输卵管碘油造影，并观察其术中腹痛，术后阴道流血天数和盆腔炎发生率等指标。结果两组术后盆腔炎的发生率近似（P〉0．05），但治疗仪组重度腹痛人数高于传统HSG组（P〈0.05），而传统HSG组术中感觉无痛人数及术后阴道流血≥17天人数则明显高于治疗仪组（P〈0．05）。结论使用FL-IA型妇科诊断治疗仪行HSG操作简便、安全，可使医务人员不受射线损害，且有一定治疗作用，值得临床推广应用。     

中职生亚健康状况调查

目的:了解中职生健康状况,探索消除中职生亚健康状态的措施。方法:选择医学护理专业中职生450人进行问卷调查。结果:亚健康状态表现达84.2%,主要症状是失眠多梦、食欲不振、疲劳乏力、抑郁、焦虑;一年级与二年级学生亚健康状态发生率分别是78.1%和89.6%,两个年级差别有统计学意义(X2=11.12,P<0.01)。结论:中职生普遍处于亚健康状态,应做好健康教育工作,提高学生综合素质。     

日本血吸虫(中国大陆株)线粒体相关蛋白rSj338的免疫细胞化学定位

目的　应用免疫电镜技术观察日本血吸虫线粒体相关蛋白rSj338在成虫组织细胞中的分布和定位。 方法　收集新鲜的日本血吸虫成虫 ,常规固定、包埋 ,制备日本血吸虫成虫超薄冷冻切片。用纯化的抗rSj338单特异多克隆抗体为一抗 ,同时 ,以正常兔血清作阴性对照 ;以直径为 10nm胶体金颗粒标记的蛋白A进行定位 ,进行组织化学反应 ,透射电镜观察日本血吸虫线粒体相关蛋白rSj338在成虫组织细胞中的分布和定位。 结果　高密度胶体金颗粒主要分布于日本血吸虫线粒体外膜上 ,在线粒体的嵴上也见分布。结论　rSj338蛋白确为日本血吸虫线粒体相关蛋白 ,与采用BLAST网分析结果同源性一致