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目的:建立PC12细胞的蛋白质组学研究的技术体系,全面展示PC12细胞的蛋白质表达谱。方法:提取PC12细胞的蛋白质,建立固相pH梯度双向电泳图谱,应用图像扫描仪及ImageMaster 2D Evolution分析软件获得蛋白质点的数字化和匹配性信息,挑选匹配良好的高峰度蛋白点,进行基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)的鉴定。结果:成功构建出PC12细胞的双向电泳图谱,并用MALDI-TOF-MS成功鉴定出19种PC12细胞的蛋白质,分属于以下6类:分子伴侣及相关功能蛋白、细胞结构/骨架蛋白、代谢相关蛋白、凋亡相关蛋白、激素结合相关蛋白和神经内分泌相关蛋白。结论:PC12细胞样品的蛋白质样品双向电泳图谱重复性良好,初步建立了PC12细胞的蛋白质组学研究技术,证明以PC12细胞为模型的神经系统疾病蛋白质组学研究的可行性。 相似文献
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目的 探讨神经毒素6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导PC12细胞的帕金森(PD)模型中GRP78的表达.方法 在建立6-OHDA诱导PC12细胞帕金森模型的基础上,MTT法测细胞存活率和Hoechst33342染色检测细胞凋亡.分别提取6-OHDA处理组和对照组细胞总蛋白,应用荧光差异凝胶电泳(Differential Gel Electrophoresis,DIGE)技术获得蛋白点的差异表达信息,运用MALDI-TOF质谱鉴定出差异蛋白质.结果 实验组细胞存活率为60%±4.8%,与对照组比较显著下降(P<0.05).荧光染色可见细胞核呈固缩状或碎裂状的典型的凋亡形态学改变.DIGE分析发现6-OHDA组表达明显增高的一个蛋白质点,经质谱分析鉴定确认为GRP78.结论 6-OHDA能够诱导PC12细胞凋亡,凋亡过程中GRP78表达增高,提示GRP78增高可能与PD的发病机制有关. 相似文献
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目的 应用蛋白质组学技术研究6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导SH-SY5Y细胞帕金森病(PD)模型中14-3-3蛋白的表达变化.方法 在建立6-OHDA诱导SH-SY5Y细胞PD模型的基础上,分别提取6-OHDA实验组和对照组孵育24 h的细胞总蛋白,应用荧光差异双向凝胶电泳(DIGE)技术获得蛋白点的差异表达信息,运用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF MS)鉴定出差异蛋白质.结果 DIGE分析发现实验组有一个表达明显上调的差异蛋白质点(P<0.05),经质谱分析鉴定确认为14-3-3蛋白.结论 6-OHDA诱导SH-SY5Y细胞的PD模型中14-3-3蛋白表达上调,提示14-3-3蛋白上调可能与PD的发病机制有关. 相似文献
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细胞质内被称为路易(小)体(Lewy bodies, LBs)的蛋白质性包含体是帕金森病的主要病理特征,26S蛋白酶体内存于LBs内,但是其存在形式可能是单个亚基或是完整复合体,为了广泛地揭示10 µmol/L人工合成蛋白酶体抑制剂(proteasomal inhibitor,PSI)作用大鼠嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)48小时后富集在PSI诱导性包含体中的26S蛋白酶体亚基,通过生物化学分级分离(biochemical fractionation),双向电泳(two-dimensional electrophoresis)和肽质量指纹鉴定(identification via peptide mass fingerprints,PMF)的蛋白质组学方法,我们从PSI诱导性包含体中鉴定了蛋白酶体β5、26S蛋白酶体ATP酶2,26S蛋白酶体ATP酶5、26S蛋白酶体ATP酶6、26S蛋白酶体非ATP酶11和26S蛋白酶体非ATP酶13等6个26S蛋白酶体亚基.这一结果提示当PC12细胞发生蛋白酶体抑制时至少6个26S蛋白酶亚基可能被富集到PSI诱导性包含体中. 相似文献
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背景: 迄今为止阿尔茨海默病(AD)的发病机制尚不明了。没有任何药物可以阻止疾病的发展,这就需要人们发现新的方法来对其进行治疗。神经干细胞(NSCs)是具有自我再生能力的细胞。人们希望通过NSCs移植来治疗AD。我们的实验将对此进行研究。目标:通过实验对胎鼠NSCs移植对AD模型大鼠的保护效应进行研究。设计,时间及地点:体外培养、体内移植及蛋白质组学等实验均在吉林大学第一临床医院完成(时间2007.07-2009.03)。材料:细胞培养基及神经生长因子均来自sigma。方法:NSCs是从胎鼠海马中获得。通过切断双侧海马制备AD模型大鼠,此后2周,将NSCs移植入AD模型大鼠脑内进行试验。主要方法:通过蛋白质组学对不同实验组(正常组、移植组、模型组)海马的蛋白水平进行测定。同时应用原位杂交技术和免疫组织化学方法对实验鼠海马及额叶的胆碱乙酰转移酶(Chat)mRNA,胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和S100β进行测定。结果:蛋白质组学方法发现,通过不同实验组间对比GFAP、热休克蛋白90(Hsps90)、热休克蛋白70(Hsps70)、丝状肌动蛋白(F-actin)及肌动蛋白(actin)等均发生改变。所有结果显示,与AD模型组大鼠相比ChatmRNA、 Hsps、 F-actin和Actin的表达在NSCs移植组均升高;而在相同区域GFAP和S100β的阳性细胞表达在NSCs移植组却相对减少。结论:我们的试验结果显示NSCs对损伤的海马产生重要的影响。 相似文献
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蛋白质组学技术是后基因组时代的重要工具,其广泛应用为探索帕金森病的发病机制、寻找诊断预后指标和药物作用靶点等提供了有价值的线索。 相似文献
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由多巴胺氧化产生的氧化应激和由此引发的蛋白质表达变化能够改变与帕金森病相关的细胞代谢过程。SH-SY5Y细胞经过10 μmol/L维甲酸和80 nmol/L 佛波酯相继诱导各72小时后出现了分化的神经元表现型,SH-SY5Y分化细胞暴露于100 μmol/L多巴胺24小时后出现氧化应激。在本研究中,为了在这个帕金森细胞模型中发现由氧化应激引发的蛋白质表达变化谱,我们通过二维差异胶内电泳和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱的蛋白质组学方法,筛选和鉴定了显著性变化的蛋白质。结果显示,诱导分化作用使6个蛋白质表达显著性地变化(6个蛋白质表达均增加),毒性暴露作用使14个蛋白质表达显著性地变化(11个蛋白质表达增加,3个蛋白质表达降低);同时,在SH-SY5Y分化细胞中显著性地增加的微管蛋白alpha1,在SH-SY5Y分化细胞经过毒性暴露作用后显著性地降低,并且被鉴定为泛素化微管蛋白alpha。这提示,SH-SY5Y细胞在诱导分化作用后的蛋白质表达变化谱和SH-SY5Y分化细胞在毒性暴露作用后的蛋白质表达变化谱是不同但相关的。
关键词:SH-SY5Y细胞;维甲酸;佛波酯;多巴胺;氧化应激;蛋白质表达;蛋白质组学分析 相似文献
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布地奈德结肠定位微丸的制备及释药特性研究 总被引:5,自引:0,他引:5
目的:制备pH-时滞型布地奈德微丸并对其释药特性进行研究。方法:采用锅包衣法制备裁药微丸,并进行乙基纤维素有机溶液包衣及Eudragit FS30D水分散体包衣。用转篮法进行释放度实验,采用多种pH模式筛选和评价处方。结果与结论:包衣厚度及材料比和pH对释药速率均有影响。优选处方微丸在高低2种pH模式下,其释药特性符合设计要求。 相似文献